TRANSPORTE NUCLEAR Y DEGRADACIN DEL MRNA

VERNICA RUIZ MAN

COMPLEJO DEL PORO NUCLEAR

Es una estructura que permite el intercambio de molculas entre el citosol y el ncleo de la clula. Tamao: muy grande (de unos 125 millones de Da), Su forma: de cesta de baloncesto y atraviesa la envoltura nuclear.

PORO NUCLEAR

Formado por: unas 100 protenas ordenadas en simetra ortogonal. El c. del poro presenta canales acuosos que estn permanentemente abiertos y por ellos difunden libremente sustancias de hasta 5000 Da. Protenas de hasta 60000 Da pueden pasar por transporte activo con una velocidad que depende del tamao de la protena. El nmero de poros del ncleo es variable y se adapta a los requerimientos del trfico de sustancias. Normalmente hay unos 3000 poros por ncleo.

ENVOLTURA NUCLEAR

Delimita el ncleo.

Est formada por dos membranas continuas.

La m. interna est en contacto con protenas (de unin a la cromatina) clave para la estabilidad del ncleo que constituyen la lmina nuclear. La m. externa es muy parecida a la del retculo endoplsmico. Contiene ribosomas adheridos. Ambas estructuras estn unidas formando un continuo.

COMUNICACIN ENTRE EL CITOPLASMA Y EL NCLEO

El poro nuclear permite el paso de sustancias a travs de la envoltura nuclear. As, posibilita la necesaria entrada de protenas y bases nitrogenadas al interior del ncleo y la salida de ARNm, ARNt y ribosomas al citoplasma. Durante la mitosis el poro se desorganiza al igual que la envoltura nuclear y se vuelve a reorganizar en interfase.

SEAL DE LOCALIZACIN NUCLEAR (SLN)

Necesaria para que una protena sea reconocida y pueda introducirse en el ncleo. Es una secuencia de pocos aminocidos que aunque es variable siempre es rica en aminocidos cargados positivamente. La seal de localizacin celular no se elimina de las protenas ya que el proceso de importacin o exportacin puede repetirse para una misma protena. Esta seal se ha encontrado en protenas de algunos virus, como el SV40

PROCESO DE TRANSPORTE A TRAVS DEL PORO NUCLEAR.

La seal de localizacin nuclear es reconocida en el citosol por una protena llamada importina. La importina es capaz de interaccionar con elementos mviles del complejo del poro permitiendo el paso de la protena al interior del ncleo. Ya en el ncleo la protena se separa y la importina vuelve al citosol saliendo por el poro.

NLS = nuclear localization signals

PROCESO DE TRANSPORTE A TRAVS DEL PORO NUCLEAR.

El proceso implica un gasto de energa en forma de GTP que va unido a la importina. Existe adems un sistema anlogo de exportacin muy parecido en el que participa una protena llamada exportina. Mediante este sistema de la exportina salen los ARNm ya procesados en el ncleo.

Al ncleo deben entrar: -Protena histona y no histona -DNA y RNA polimerasa. -SNRNP( ribonucleo protenas small "pequeas") -Iones -Ncleotidos.

Del ncleo deben salir: -Diferentes RNA( mensajero, ribosomal, transferencia), estos asociados a protenas. -Sub-unidades ribosomales( cada una dependiente de la otra).

DEGRADACIN DEL ARN

Los intrones son degradados en el interior del ncleo y los ARNm anmalos que carecen de marcos de lectura abiertos completos son eliminados por decaimiento del ARNm mediado sin sentido. Los ARNm funcionales en las clulas eucariticas son degradados a diferentes velocidades, proporcionando un mecanismo adicional de control de la expresin gnica. En algunos casos, las tasas de degradacin del ARNm estan reguladas por seales extracelulares.

ARN FUNCIONES EN LAS CLULAS

El ARN mensajero (ARNm) sirve de molde para la sntesis de protenas El ARN ribosmico (ARNr) y el ARN de transferencia (ARNt) participan en la traduccin del ARNm. Otros ARN de pequeo tamao intervienen en el corte y empalmado de ARNm y en la clasificacin de protenas en eucariotas.

El ARNm fue descubierto en la E.coli, tambin fue del primer organismo del que se aisl y purific la ARN polimerasa y tambin a partir del E. coli fueron aclarados los mecanismos bsicos por los que se regula la transcripcin.

PRIMER PASO EN LA MADURACIN DEL ARNM

Modificacin del extremo 5 del trnscrito mediante la adicin de una estructura denominada caperuza o cap de 7-metilguanosina. Las enzimas responsables de la formacin de esta caperuza son reclutadas al CTD fosforilado siguiendo la iniciacin de la transcripcin, y la caperuza es aadida tras la transcripcin de los primeros 20-30 nucletidos de ARN. La formacin de la caperuza es iniciada por la adicin de una molcula de GTP en orientacin inversa al nucletido 5 terminal del ARN. A continuacin se aaden grupos metilo a este residuo de G y a las formas de ribosa de uno o dos nucletidos 5 de la cadena de ARN. La caperuza en 5 estabiliza el ARN, adems de alinear los ARNm eucariticos sobre el ribosoma durante la traduccin.

POLIADENILACIN

El extremo 3 de la mayora de los ARNm eucariticos se forma no por la terminacin de la transcripcin, sino por el corte del transcrito primario y la adicin de una cola de poli-A una reaccin de la maduracin denominada poliadenilacin

SEALES PARA LA POLIADENILACIN

La secuencia ms conservada en clulas animales es el hexanucletido AAUAAA, que se localiza de 10 a 30 nucletidos corriente arriba del sitio de poliadenilacin. Otras secuencias se encuentran tanto corriente arriba como corriente debajo de AAUAAA. Estas son reconocidas por un grupo de protenas, que incluyen una endonucleasa que corta la cadena de ARN y una poli-A polimerasa que aade una cola de unos 200 nucletidos al transcrito de ARN. Estas enzimas procesadoras estn asociadas con el CTD fosforilado de la ARN polimerasa II, y pueden viajar con la polimerasa desde el punto de iniciacin. La escisin y poliadenilacin sealiza la finalizacin de la transcripcin, que habitualmente ocurre varios cientos de nucletidos corriente abajo del sitio de adicin de la cola de poli-A.

TRADUCCIN DEL ARNM

La mayora de los ARNm eucariticos est poliadenilada. las colas de poli-A regulan la traduccin y la estabilidad del ARNm. La poliadenilacin tiene tambin un importante papel regulador en fases iniciales del desarrollo, donde cambios en la longitud de las colas de poli-A controlan la traduccin del ARNm.

DEGRADACIN DEL ARN

Los pasos de maduracin resultan en la formacin de ARNm maduros, que entonces son transportados al citoplasma, donde funcionan dirigiendo la sntesis de protenas. Sin embargo, la mayora de las secuencias transcritas en pre-ARNm son degradadas en el interior del ncleo. Ms del 90% de las secuencias de los pre-ARNm son intrones, que son degradados en el interior del ncleo despus de su escisin por corte y empalme. Esto es llevado a cabo por una enzima que reconoce el enlace 2-5 caracterstico formado en el punto de ramificacin, adems de por enzimas que reconocen extremos 3 o 5 de las molculas de ARN y catalizan la degradacin de ARN en cualquier direccin. Los extremos 5 y 3 de los ARNm maduros estn protegidos de esta maquinaria de degradacin por la presencia de caperuzas y poliadenilacin, respectivamente, mientras que los extremos no protegidos de los intrones son reconocidos y degradados.

DECAIMIENTO DE ARNM MEDIADO SIN SENTIDO

Adems de degradar intrones, las clulas poseen un sistema de control de calidad (denominado decaimiento de ARNm mediado sin sentido) que dirige la degradacin de ARNm que carecen de marcos de lectura abiertos completos. Esto elimina molculas de ARNm defectuosas y previene la sntesis de protenas anmalas truncadas. En levaduras, el decaimiento del ARNm mediado sin sentido tiene lugar en el interior del ncleo. El mecanismo por el que los codones de terminacin son reconocidos en el interior del ncleo de las clulas de mamferos no se conoce, aunque algunos estudios recientes sugieren que ribosomas en el interior del ncleo podran estar implicados en el reconocimiento e incluso en la traduccin nuclear de ARNm.

ASPECTO FINAL DE LA MADURACIN DE UNA MOLCULA DE ARN

Lo que podra considerarse como el aspecto final de la maduracin de una molcula de ARN es su eventual degradacin en el citoplasma. Puesto que el nivel intracelular de ARN est determinado por un equilibrio entre la sntesis y la degradacin, la tasa de degradacin de ARNs individuales es otro nivel al que puede controlarse la expresin gnica.

ESTABILIDAD

Los ARNm bacterianos se degradan rpidamente a modificaciones en su entorno, como cambios en la disponibilidad de nutrientes requeridos para el crecimiento. En las clulas eucariticas, sin embargo, los distintos ARNm son degradados a distintas velocidades, proporcionando un parmetro adicional para la regulacin de la expresin gnica eucaritica

DEGRADACIN CITOPLSMICA

De la mayora de los ARNm eucariticos est iniciada por un acortamiento de las colas de poli-A. A continuacin se produce la eliminacin de la caperuza en 5 y la degradacin del ARN por parte de nucleasas que actan sobre ambos extremos.

VIDA MEDIA DE LOS ARNM EN LAS CLULAS

En mamfero varan desde 30 minutos hasta aprox. 20 horas. Los ARNm inestables frecuentemente codifican protenas reguladoras, incluyendo ciertos factores de transcripcin, cuyos niveles en el interior celular varan rpidamente en respuesta a estmulos del ambiente. Estos ARNm a menudo contienen secuencias especficas ricas en AU cerca de sus extremos 3 que parecen sealizar una rpida degradacin favoreciendo la deadenilacin.

ESTABILIDAD DE ALGUNOS ARNMS

UNIN DE PROTENA REGURADORA AL IRE

La unin de la protena reguladora al IRE est controlada por los niveles de hierro dentro de la clula: si escasea el hierro, la protena se une al IRE y protege al ARNm de receptor de transferrina frente a la degradacin. Cambios similares en la estabilidad de otros ARNm estn relacionados con la regulacin de la expresin gnica por parte de ciertas hormonas. Por tanto, aunque la transcripcin sigue siendo el nivel principal de control de la expresin gnica, las variaciones en la velocidad de degradacin del ARNm tambin desempean un papel importante en el control continuo de los niveles de los ARNm intracelulares.