TCNICAS HISTOLGICAS

TIPOS DE TINCIN CLASES DE COLORANTES

Mara Jos Pico Vela Karla Vizuete

TCNICAS HISTOLGICAS
La tcnica histolgica es una serie secuencial de pasos a travs de los cuales una muestra de tejido llega a transformarse en delgados cortes coloreados capaces de ser observados al microscopio.

Obtencin

Fijacin

Inclusin

Corte

Coloracin

Montaje

OBTENCIN:
Consiste en la provisin del material que se desea estudiar por medio del microscopio.
Consiste en la extraccin de pequeos fragmentos de tejido de un organismo vivo.

Biopsia

Consiste en la extirpacin de rganos completos o de grandes partes de los mismos, Reseccin a travs de un procedimiento quirrgico. Quirrgica Es el examen de los rganos luego de la muerte, generalmente con el objetivo de Autopsia o determinar las causas de la misma. necropsia

FIJACIN:
Producen una rpida muerte celular, evitando la autolisis Algunos de ellos colorean sustancias de los tejidos Preservan la morfologa celular y tisular

Aumentan la consistencia de los tejidos

Preservan la composicin qumica

Inhiben el crecimiento microbiano y por lo tanto la putrefaccin

Facilitan la coloracin posterior

Penetran a los tejidos con relativa rapidez

Fijadores
Fsicos
Qumicos Simples Mezclas de Qumicas
Alcohol Etlico+ Acido Actico

Calor

Alcoholes

Aldehdos

cidos

Sales

Desecacin

Metanol

Formaldehido

c. Actico

Bicromato de Potasio

Acido pcrico + Formol + Acido actico

Microondas

Bicromato de potasio + Bicloruro de mercurio + Acido actico

Formaldehido + Glutaraldehdo

INCLUSIN:
El tejido se impregna en un material que le confiere una consistencia adecuada para el corte.
Observaciones en microscopios pticos Los tejidos fijados se deshidratan en alcoholes pasndolos solventes intermediarios como el xileno o el benceno Y son colocados en una estufa con parafina fundida. Luego de impregnar al tejido, se deja solidificar a la parafina con el tejido incluido, constituyendo los bloques o tacos histolgicos.

Parafina

Resina Epoxi

Observaciones en microscopios electrnica Los bloques resultantes, de gran dureza, son seccionados por la navaja de diamante o de vidrio del ultramicrtomo

COLORACIN:
La coloracin rutinaria trata de posibilitar el estudio morfolgico o estructural, sin que se pueda obtener mayor informacin sobre la naturaleza qumica de las estructuras observadas. La histoqumica utiliza mtodos tendientes a identificar a un determinado tipo de molcula o sustancia, visualizndola microscpicamente.

La mayora de los colorantes citolgicos o histolgicos son de naturaleza naturaleza orgnica y aromticos.

MONTAJE:

Consiste en colocar sobre el corte histolgico ya coloreado una delgada lmina de vidrio llamada cubreobjetos, el cual se adhiere con algn adhesivo transparente conocidos como medios de montaje.

PREPARACIN DE UN FROTIS
Limpiar y secar el portaobjetos Mezclar la muestra en la gota de agua Tomar una muestra de cultivo Flamear la boca del tubo de cultivo Secar el frotis al aire

Colocar una gota de agua

Desinfectar el aza

Fijar la muestra pasndola por el mechero

TINCIN

La tincin es una tcnica auxiliar en microscopa para mejorar el contraste en la imagen vista al microscopio.

Las tinciones pueden ser usadas para definir y examinar tejidos en bruto, poblaciones celulares u orgnulos dentro de clulas individuales.

TIPOS DE TINCIONES:
Se realiza a organismos o clulas vivas en su estado natural. Se utilizan colorantes llamados colorantes vitales, estos no causan dao al organismo o clula durante un tiempo corto, a largo plazo son txicos y mortales.

Mtodo in vivo

Mtodo in Vitro

Estudia al organismo vivo pero colocado en condiciones artificiales. Se realiza en clulas aisladas y fciles de separar. Estas clulas se colocan sobre un sustrato adecuado que se llama medio de cultivo en el cual se mantienen con vida mientras dura el estudio.

SIN COLORANTE

No se utiliza ningn tipo de colorante.

Las muestras se extienden directamente sobre la superficie de un portaobjetos para su observacin.

El material puede diluirse con igual volumen de solucin salina fisiolgica estril.

Se deposita suavemente un cubreobjetos sobre la superficie del material.

Este tipo de preparacin se emplea para detectar trofozotos mviles de parsitos intestinales como Giardia, Entamoeba, huevos y quistes de otros parsitos, larvas y gusanos adultos, Trichomonas, hifas de hongos, etc

En la imagen: Candida sp en un examen en fresco.

TINCIN SIMPLE:
Se utiliza un solo colorante, por lo que todas las estructuras celulares se tien con la misma tonalidad.

El Hidrxido de potasio permite ver elementos de hongos ya que este digiere parcialmente los componentes proteicos, pero no acta sobre los polisacridos de las paredes celulares de los hongos.

Azul de metileno de Loeffler puede agregarse a las preparaciones en fresco de heces para observar la presencia de leucocitos.

TINCIN DIFERENCIADA

Se utilizan varios colorantes combinados.

Las estructuras celulares se diferencian en funcin de los diferentes colorantes que fijan de acuerdo con su propia constitucin qumica.

Los ejemplos clsicos sera la tincin de GRAM o la de Ziehl-Neelsen

En la imagen: BGN y levaduras en una tincin GRAM

LA TINCIN NEGATIVA
Es el reverso del procedimiento de tincin usual: las clulas se dejan sin teir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea.

Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las clulas.

La sustancia utilizada para la tincin negativa es un material opaco que no tiene afinidad por los constituyentes celulares y que simplemente rodea las clulas.

En la imagen: Cryptococcus neoformans en una tincin con tinta china.

TIPOS DE COLORANTES

La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos .

Tienen alguna afinidad especfica por los materiales celulares.

Azul de metileno

Colorantes catinicos

Safranina

Cristal Violeta

Estos colorantes se combinan con intensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los cidos nucledos y los polisacridos cidos.

Eosina

Colorantes Aniones

Fuscina cida

Rojo congo

Se combinan con los constituyentes celulares cargados positivamente, tales como muchas protenas.

Los colorantes de este grupo se combinan con los materiales lipdicos de la clula, usndose a menudo para revelar la localizacin de los depsitos de grasa.

Colorantes Liposolubles

Negro Sudn

RECOMENDACIONES:
Algunos colorantes teirn mejor slo despus de que la clula haya sido tratada con otra sustancia qumica. Esta sustancia se denomina mordiente; habitualmente cido tanco. El mordiente se combina con un constituyente celular y lo altera de tal modo que ahora s podr atacar el colorante.

El azul de metileno es un buen colorante simple que acta sobre todas las clulas bacterianas rpidamente y que no produce un color tan intenso que oscurezca los detalles celulares.

Los mtodos de tincin son de gran utilidad, pero deben usarse siempre con precaucin, ya que pueden conducir a errores.

Las molculas de colorante forman en ocasiones precipitados o agregados que parecen estructuras celulares autnticas, pero que son formaciones completamente artificiales inducidas por el mismo colorante.