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PREPARACIN DE SOLUCIONES BUFFER USADAS EN INMUNOL...

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1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Buffer de acetato Buffer de borato cloruro Buffer de carbonato Buffer de glicina Buffer fosfatos Buffer de tris Buffer veronal Buffer para complemento

BUFFER DE ACETATO (0,1 M; pH 3,6-5,6) Solucin A (cido actico 0,2M): disolver 11,55 ml de cido actico glacial en agua destilada completando 1 litro. Solucin B (acetato de sodio 0,2 M): disolver 27,2 g de acetato de sodio (3 H2O) en agua destilada completando 1 litro.
Solucin A (ml) 463 440 410 368 305 255 200 148 105 88 48 Solucin B (ml) 37 60 90 132 195 245 300 352 395 412 452 Agua destilada (ml) 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 pH 3.6 3.8 4 4.2 4.4 4.6 4.8 5 5.2 5.4 5.6

Si se desea obtener SN buffer de acetato 0,2 M, se elimina el agua destilada de la mezcla. BUFFER DE BORATO CLORURO (borato 0,1 M; cloruro 0,1 M, pH 8,1-10) Solucin A (H3BO3 0,2 m, KCl 0,2 M): disolver 12,4 g de H3BO3 en 400 ml de agua destilada, completando luego a 500 ml. En otro recipiente disolver 14,91 g de KCl en 400 ml de agua destilada, llevando a un volumen de 500 ml. Mezclar ambas soluciones. Solucin B (NaOH 0,2 N): disolver 0,8 g de NaOH en 500 ml de agua destilada, completando a un litro. Controlar la normalidad con solucin valorada de HCl.
Solucin A (ml) 500 Solucin B (ml) 49 Agua destilada (ml) 451 pH 8.1

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60 72 86 101 118 137 158 181 208 236 264 293 321 346 369 389 406 422 437

440 428 414 399 382 363 342 319 292 264 236 207 179 154 131 111 94 78 63

8.2 8.3 8.4 8.5 8.6 8.7 8.8 8.9 9 9.1 9.2 9.3 9.4 9.5 9.6 9.7 9.8 9.9 10

BUFFER DE CARBONATO (pH 9-10.8 fuerza inica 0,1) Solucin A (bicarbonato de sodio 0,1 M): disolver 84 g de NaHCO3 en suficiente cantidad de agua destilado completando 1 litro. Solucin B (carbonato de sodio 0,1 M): 106 g de Na2CO3 anhidro se disuelven en agua destilada completando 1 litro.
Solucin A (ml) 76.8 67.6 56.8 45.3 34.3 24.6 17 11.2 7.1 4.1 Solucin B (ml) 7.7 10.8 14.4 18.2 21.9 25.1 27.6 29.5 30.8 31.7 Agua destilada (ml) 915.5 921.6 928.4 936.5 943.8 950.3 955.4 959.3 962.1 964.2 pH 9 9.2 9.4 9.6 9.8 10 10.2 10.4 10.6 10.8

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BUFFER DE GLICINA Glicina HCl (glicina 0.1 M, pH 2.2-3.6): Solucin A (glicina 1M): disolver 75.07 g de glicina en cantidad suficiente de agua destilada, completando un litro. Solucin B: HCl 1 N.
Solucin A (ml) 100 100 100 100 100 100 100 100 Solucin B (ml) 88 64.8 48.4 33.6 22.8 16.4 12.8 10 Agua destilada (ml) 812 835.2 851.6 866.4 877.2 883.6 887.2 890 pH 2.2 2.4 2.6 2.8 3 3.2 3.4 3.6

Glicina NaOH (glicina 0,1 M, pH 8.6-10.4) Solucin A (glicina 1 M): disolver 75,07 g de glicina en 1 litro de agua. Solucin B (NaOH 1 N): disolver 40 g de NaOH en agua destilada llevando a 1 litro. Verificar normalidad con SN valorada de HCl.
Solucin A (ml) 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 Solucin B (ml) 8 12 17.6 24 33.6 44.8 54.4 64 77.2 91 Agua destilada (ml) 892 888 882.4 876 866.4 855.2 845.6 836 822.8 809 pH 8.6 8.8 9 9.2 9.4 9.6 9.8 10 10.2 10.4

Para preparar SN buffer de glicina- cloruro a diferentes pH, se incorpora a las SN A indicadas, NaCl a una molaridad 10 veces superior a la deseada. BUFFER FOSFATOS (fosfatos 0,1 M, pH 7.5) Solucin A (NaH2PO4 0,2 M): disolver 27.6 g de NaH2PO4 . H2O en agua destilada, completando un litro. Solucin B (Na2HPO4 0,2 M): 53.65 g de Na2HPO4. 7 H2O se disuelven en agua destilada, llevando el volumen final a 1 litro. Si se desea molaridad 0,2 se suprime el agua destilada.
Solucin A (ml) 467.5 460 Solucin B (ml) 32.5 40 Agua destilada (ml) 500 500 pH 5.7 5.8

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450 438.5 425 407.5 387.5 367.5 342.5 312.5 282.5 255 225 195 165 140 115 95 80 65 52.5 42.5 35 26.5

50 61.5 75 92.5 112.5 132.5 157.5 187.5 217.5 245 275 305 335 360 385 405 420 435 447.5 457.5 465.473.5

500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500

5.9 6 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 7 7.1 7.2 7.3 7.4 7.5 7.6 7.7 7.8 7.9 8

BUFFER DE TRIS (tris hidroximetil-aminometano) HCl (tris 0,05 M, pH 7.2-9) Solucin A (tris 0,2 M): se obtiene disolviendo 24.23 g de Tris en agua destilada, llevando a volumen de un litro. Solucin B: HCl 1 N
Solucin A (ml) 250 250 250 250 250 250 250 Solucin B (ml) 44.2 41.4 38.4 32.5 26.8 21.9 16.5 Agua destilada (ml) 705.8 708.6 711.6 717.5 723.2 728.1 733.5 pH 7.2 7.4 7.6 7.8 8 8.2 8.4

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250 250 250

12.2 8.1 5

737.8 741.9 745

8.6 8.8 9

BUFFER VERONAL Veronal veronal sdico cloruro sdico (pH 7.4-8.9 fuerza inica 0,1): Solucin A (veronal 0,025 M): se prepara disolviendo 4,605 g de veronal en agua destilada llevando a un litro. Solucin B (veronal sdico 0,05 M): disolver 10,309 g de veronal sdico en agua destilada llevndolo a un litro. Solucin C (cloruro de sodio 0,5 M): 29.2 g de NaCl se disuelven en agua destilada hasta 1 litro.
Solucin A (ml) Solucin B (ml) Solucin C (ml) Agua destilada (ml) 639 403 636 401 506 639 403 509 321 10 10 25 25 50 100 100 200 200 190 190 175 175 150 100 100 0 0 161 397 164 399 294 161 397 291 479 pH 7.4 7.6 7.8 8 8.2 8.4 8.6 8.8 8.9

Veronal sdico HCl (pH 6.8-9.6 fuerza inica 0,1): Solucin A (veronal sdico 0,5 M): 103.09 g de veronal sdico en agua destilada y completar 1 litro. Solucin B: HCl 1 N
Solucin A (ml) 104.2 107.2 110.8 116.2 123.2 132.4 143.2 153.8 164.7 174.2 181.2 187.2 Solucin B (ml) 47.8 46.4 44.6 41.9 38.5 33.8 28.4 23.1 17.8 12.9 9.2 6.4 Agua destilada (ml) 848 846.4 844.6 841.9 838.3 833.8 828.4 823.1 817.5 812.9 809.6 806.4 pH 6.8 7 7.2 7.4 7.6 7.8 8 8.2 8.4 8.6 8.8 9

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190.4 194.8 197

4.8 2.6 1.5

804.8 802.6 801.5

9.2 9.4 9.6

Soluciones Veronal Veronal sdico para electroforesis (fuerza inica 0,1):


Veronal (g) 4.90 3.41 2.34 Veronal sdico (g) 17.4 18.95 20.62 Agua destilada Hasta 1 litro Hasta 1 litro Hasta 1 litro pH 8.4 8.6 8.8

BUFFER PARA COMPLEMENTO Debe guardarse en la heladera. En el momento de usar se diluye al 1/5 en agua destilada.
NaCl c. dietilbarbitrico (veronal cido) 42.5 g 2.875 g

Dietilbarbiturato de sodio (veronal sdico) 1.875 g CaCl2 anhidro MgCl2 . H2O H2O destilada, c.s.p. 0.2 g 1.0 g 1000 ml

Disolver el veronal cido en aproximadamente 500 ml de agua caliente. Disolver el veronal sdico en agua fra y agregarle en fro, manteniendo el orden, los siguientes componentes: NaCl, CaCl2 y MgCl2. Mezclar con la solucin de veronal sdico y medir el pH, el que debe oscilar entre 7,3 7,4. Si fuera necesario ajustar con HCl o NaOH de normalidad adecuada. Completar a un litro con agua destilada.

Trabajo enviado por: MARIANA PUCCIARELLI


Estudiante de Farmacia Buenos Aires - Argentina

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