Universidad de Sonora

Unidad Regional Sur

Divisin de Ciencias e Ingeniera

Departamento de Qumico Biolgico y Agropecuarias

Manual de Prcticas de Laboratorio De Qumica Analtica II

Q. Guadalupe Hernndez Salomn

Q. Guadalupe Morales Higuera Q. Leonardo Tllez Verdugo

NAVOJOA, SONORA

ENERO 2009

PRACTICA # 1 COLORIMETRIA DETERMINACION COLORIMTRICA DE NUTRIENTES EN TIERRAS OBJETIVO: Utilizar la propiedad de los compuestos qumicos de colorarse cuando intervienen en reacciones qumicas especficas. Aprovechar, adems, que en condiciones controladas la coloracin es directamente proporcional a la cantidad de compuesto. TEORIA: Algunos estudios han mostrado que se requieren 16 elementos qumicos para el crecimiento saludable de las plantas. La escasez de uno solo puede afectar seriamente los rendimientos y las utilidades en la agricultura. Nutrientes primarios (N, P, K), se requieren en mayor cantidad para el desarrollo adecuado de la planta. Nutrientes secundarios (Ca, Mg, S); tambin se requieren en cantidades bastante sustanciales. Micronutrientes (B, Cu, Fe, Mn, Mo, Zn, Cl). Se llaman as debido a que la planta requiere de ellos en pequeas cantidades. La planta no asimila de la tierra los otros elementos necesarios (C, O, H). PROCEDIMIENTO 1. A 5 gramos de la muestra de tierra por analizar (que debe de estar seca y finamente molida), se aaden 10 ml de solucin extractiva, se agita unos minutos y se filtra (no debe aadirse agua). Al lquido filtrado se le llama extracto del suelo y lleva disueltos los elementos a cuantificar. NITROGENO NITRICO. 2. En una placa de porcelana se coloca una gota de extracto de suelo (ES) y se le agrega 4 gotas de difenilamina, se reposa 2 minutos, se agita y compara con la coloracin de la tabla de Morgan adjunta. Vara, segn la concentracin de azul fuerte a azul plido. NITROGENO AMONIACAL. 3. 4 gotas de ES se le agrega 2 gotas de reactivo de Nessler, se reposa 1 minuto y se compara. La coloracin vara de caf a amarillo. FOSFORO. 4. 10 gotas de ES y 1 gota de molibdato de sodio y 2 gotas de oxalato estanoso, se agita y reposa un minuto. La coloracin vara de azul a blanco MANGANESO 5. 10 gotas de ES y 1 gota de KOH, agitando se agregan 2 3 gotas de bencidina y se compara inmediatamente (coloracin fugaz). Vara de azul verdoso a azul no muy intenso. MAGNESIO 6. 10 gotas de ES, 1 gota de KOH y 3 gotas de amarillo de titanio, se agita y se reposa 1 minuto. La coloracin vara de rojo carmn a amarillo naranja. POTASIO 7. En un tubo pequeo de 1 cm. de dimetro y fondo plano se colocan 10 gotas de ES, 1 gota de cobalnitrito de sodio y 12 gotas de alcohol isoproplico. Se reposa 2 minutos y se compara verticalmente con las lneas negras de la carta de referencia.

CALCIO 8. 10 gotas de ES y 2 gotas de oxalato de amonio, se reposan 5 minutos y se comparan verticalmente. La coloracin vara de blanco a transparente. PREPARACION DE REACTIVOS 1. Solucin extractiva: 10 gramos de acetato de sodio en 100 ml de cido actico al 3%. 2. cido actico al 3%: 3 ml de cido actico se aforan a 100 ml con agua destilada. 3. Difenilamina: solucin al 2/1000 .2/100 en H2SO4 concentrado, sin que la temperatura no exceda de 24 C en la preparacin. 4. Reactivo de Nessler: (200 ml). 10 gr de KI en 30 ml de agua destilada, agregar solucin saturada de HgCl2 (4.4 gr en 70 ml de agua destilada) y 80 ml de KOH al 50%; completar a 200 con agua destilada. 5. Molibdato de sodio: 12.5 gr en 100 ml de agua tibia. Por separado, mezclar 50 ml de cido actico y 550 ml de agua destilada. Mezclar las dos soluciones lentamente y agitando. No debe haber precipitado. 6. Oxalato estanoso: Disolver en 10 ml de ES lo que se pueda tomar con la punta de un palillo. Se debe preparar el da que se utiliza. 7. Bencidina: 0.1 gr de bencidina en 20 ml de cido actico; diluir a 200 ml con agua destilada. 8. KOH: solucin acuosa al 15%. 15 gr en 100 ml de agua destilada. 9. Amarillo de titanio (tiazol). 50 mg en 20 ml de agua destilada. 10. Cobalnitrito de sodio: 5 gr de Co(NO 3)3 (nitrato de cobalto), incluyendo agua de cristalizacin, disueltos en 47.5 ml de agua destilada y 2.5 ml de cido actico. Por separado, disolver 30 gr de nitrito de sodio (NaNO 2) en 50 ml de agua destilada. Mezclar ambas soluciones en partes iguales 24 horas antes de usarse. Despide vapores venenosos. 11. Alcohol isoproplico. Grado reactivo. 12. Oxalato de amonio. Solucin acuosa al 105. 10 gr en 100 l de agua destilada. CUESTIONARIO 1. Entregar el resultado del anlisis de los nutrientes contenidos en su muestra de tierra. 2. Investigar las reacciones de coloracin de cada nutriente en este mtodo (Mtodo de Morgan).

PRACTICA #2 COLORIMETRIA ELABORACION DE UN COMPARADOR VISUAL PARA LA DETERMINACION DE NITRITOS OBJETIVO: Determinar microgramos (g) de una sustancia aprovechando algunas de sus propiedades para desarrollar una serie tipo. TEORIA: El mtodo se basa en la comparacin del color rojizo producido cuando los nitritos reaccionan con el cido sulfanlico y el alfa-naftilamina. La sensibilidad es tan grande que detecta pequesimas cantidades de nitrito. PROCEDIMIENTO: 1. La solucin madre, cuya concentracin es de 100g de N de NO 2-/ml, se diluye para obtener una solucin estndar de 1 g de N/ml. 2. Se coloca 0.0, 1,2 3, 4, 5, 6, 7, 8,9 y 10 ml de sta en una serie de tubos de ensaye y se completa cada uno a 10 ml con agua destilada. 3. Se agita y luego se agrega a cada tubo, 1 ml de cido sulfanlico, se vuelve a agitar y se deja en reposo de 2 a 3 minutos. 4. En seguida se aade 1 ml de solucin de alfa-naftilamina, se agita y se deja transcurrir 10 minutos para realizar la comparacin. 5. Se procede de igual manera con una muestra que debe proporcionar el instructor y determinar su concentracin comparndola con la serie tipo la cual tiene: 0, 1, 2, 3,4, 5, 6, 7, 8,9 y 10 g de N/10 ml. PREPARACION DE REACTIVOS 1. Solucin madre de NaNO2. disolver 0.4928 gr. de NaNO2 anhidro en un litro. Concentracin final 100 g de N en NO2-/ml. 2. Solucin de cido sulfanlico. Disolver 0.8 gr de cido sulfanlico en 100 ml de cido actico 5N. 3. Solucin de alfanaftilamina. Disolver 0.5 gr de alfanaftilamina en 100 ml de cido actico 5 N. CUESTIONARIO 1. Entregar la concentracin de su problema en g de nitrgeno de NO2-/ml. 2. Investigar la reaccin que ocurre entre los nitritos, el cido sulfanlico y el alfanaftilamina ( es una reaccin de diazotizacin).

PRACTICA # 3 USO, MANEJO Y CUIDADOS DEL ESPECTROFOTOMETRO SPECTRONIC 21 MILTON ROY COMPANY OBJETIVO: Manejar correctamente el espectrofotmetro, aprender a calibrarlo y conocer sus principales cuidados. TEORIA: En este tipo de instrumentos la luz incide sobre una rejilla de difraccin un prisma de cuarzo que divide la luz en su espectro, moviendo la fuente de luz o un espejo. El espectro formado puede hacerse pasar a travs de una abertura. La amplitud de la banda es de 35 milimicras, pero hay hasta de fracciones de milimicrones. Este arreglo es un espectrofotmetro llamado monocromador (seleccin de un color), y es indudable que el espectrofotmetro ofrece la longitud de onda en el espectro visible que se desee. Cuando la luz seleccionada pasa a travs de un tubo especial (celda), conteniendo la solucin, parte de la luz es absorbida. La luz que emerge incide sobre una fotocelda o tubo fotomultiplicador que transforma la energa luminosa en energa elctrica, esta energa resultante se mide directamente por un galvanmetro. La escala del galvanmetro en algunos instrumentos est marcada en % de transmitancia o de absorbancia. MATERIAL Espectrofotmetro Spectronic 21 2 celdas para espectrofotmetro Pauelos desechables REACTIVOS Agua destilada PROCEDIMIENTO 1. Conectar a la corriente 110 V. 2. Encender el aparato en posicin ON (1). 3. Esperar por 15 minutos a que el aparato se estabilice. Mover el botn AT y colocarlo en 0 de Transmitancia ( 2) 4. Seleccionar la longitud de onda (3), deseada, observando la ventanilla correspondiente. 5. Calibrar el aparato de la siguiente manera: a) Coloque la celda con el blanco en el porta muestra (4) b) Gire el botn 2 hasta que el indicador de la escala quede en 100% de transmitancia (5). 6. Cambie la celda del blanco por la celda que contiene la muestra problema y anote la lectura

CUESTIONARIO: 1. Proporciones un diagrama esquemtico del espectro electromagntico. 2. Investigue las leyes fundamentales de la fotometra 3. Proporcione un diagrama esquemtico del sistema ptico de un espectrofotmetro (monocromador)

PRACTICA #4 USO, MANEJO Y CUIDADOS DEL ESPECTROFOTOMETRO (TURNER MOD. 340) OBJETIVO: Manejar correctamente el espectrofotmetro, aprender a calibrarlo y conocer sus principales cuidados. TEORIA: El espectrofotmetro es un instrumento en donde la luz incide sobre una rejilla de difraccin o sobre un prisma que divide la luz en su espectro que pasa a travs de una abertura. Esta luz seleccionada pasa a travs de una celda o tubo conteniendo una solucin de la muestra que se va a analizar, siendo una parte de la luz absorbida. La luz que emerge incide sobre una foto celda o tubo fotomultiplicador que transforma la energa luminosa a energa elctrica. Esta energa resultante se mide directamente por un galvanmetro. La escala del galvanmetro est marcada ya sea por % de transmitancia o absorbancia. MATERIAL Espectrofotmetro Turner 340 2 celdas para espectrofotmetro Pauelos desechables REACTIVOS Agua destilada PROCEDIMIENTO DESCRIPCION DEL ESPECTROFOTOMETRO A) Botones de control e indicadores: 1. MODE SWITCH. OFF. El aparato est apagado TRANS. Leer transmitancia ABS. Leer absorbancia 2. ZERO. Cuando el aparato est en TRANS el botn ZERO-SET se presiona, y se mueve el botn ZERO para poner la pantalla a 0.0% T 3. 100% T/0A. Si est en TRANS se usa este botn para poner 100%T en la pantalla. Si est en ABS se usa este botn para poner 0.000 A en la pantalla. Este control consta de dos indicadores: el botn COARSE es para aproximar y e l botn FINE es para ajustar lecturas exactas. 4. DISPLAY.- Es la pantalla que indica hasta 3 dgitos despus del punto. 5. TRANS.- Indica la luz conducida cuando el aparato est en modo de transmitancia. 6. ABS.- Indica la luz conducida cuando el aparato est en modo de absorbancia. 7. WAVELENGTH READOUT.- Indica la longitud de onda en nanmetros con 3 dgitos 8. WAVELENGTH ADJUST.-Es para seleccionar la longitud que se desea trabajar. 9. ZERO-SET.- Este botn se presiona cuando el aparato se ajusta a 0.0% T con el botn ZERO. B) Porta muestras ( Cuvette Holder)

En esta seccin se introduce la celda con la muestra, con la lnea blanca hacia al frente hasta que alcance el fondo, se cierra y se observa la lectura en la pantalla digital. CALIBRACIN 1. Conectar el aparato en corriente 110 V. 2. Encender el aparato en posicin TRANS, espere 15 minutos para que se estabilice. 3. Seleccione la longitud de onda con el botn WAVELENGTH. 4. Inserte apropiadamente en posicin el filtro de luz. 5. Coloque la celda ya sea con agua destilada o con el blanco en el porta muestras. 6. Presione y sostenga el botn ZERO-SET, ajuste con el bot ZERO hasta que la lectura indique 0.00 y suelte el botn ZERO-SET. Mediciones de transmitancia a) b) c) d) Seleccione el botn en posicin TRANS. Ajuste con el botn 100%T/0A COURSE aproximadamente a 100. Ajuste con el botn 100%T/0A FINE exactamente a 100.0 Coloque la celda con la muestra en el porta muestras y lea la transmitancia en la pantalla.

Mediciones de absorbancia a) b) c) d) Seleccione Ajuste con Ajuste con Coloque la el botn en posicin ABS el botn 100%/0A COURSE aproximadamente 0.000 el botn 100%/0A FINE exactamente a 0.000 celda con la muestra y lea la absorbancia en la pantalla.

Cuidados 1. Coloque el instrumento en un espacio en el laboratorio libre de vibraciones. Deje un rea entre el aparato y la pared aproximadamente 2 pulgadas para que circule aire. 2. Verifique si el voltaje del interruptor es apropiado para el aparato. 3. Mantenga el aparato desconectado en caso de no utilizarlo. 4. No moverlo innecesariamente, en todo caso hacerlo cuando el aparato est fro. 5. Las celdas deben lavarse solamente con agua destilada y secar con pauelo de papel

B. STRAY LIGHT FILTER C. CUVETTE HOLDER

8. WAVELENGTH ADJUST 4. DISPLAY 5. TRANS - 6. ABS

9. ZERO SET

1. MODE SWITCH

7. WAVELENGTH READOUT 2. ZERO 3. COARSE-FINE 100%T/0A

PRACTICA # 5 ESPECTROFOTOMETRIA VISIBLE OBJETIVO: Examinar las curvas espectrales de absorcin del permanganato de potasio y del dicromato de potasio. Obtener la longitud de onda de mxima absorcin. Adquirir habilidad en el manejo del aparato. TEORIA: Al pasar un haz de luz a travs de una solucin se produce un fenmeno de absorcin parcial. Ciertas longitudes de onda quedan detenidas por el medio (b); otras logran atravesarlo y se observa entonces un color determinado.

Transmitancia Po
b

Energa radiante Incidente

Espesor del lquido

Energa radiante Trasmitida

La relacin entre la energa radiante transmitida P y la incidente P 0 es una constante T a la que se le llama TRANSMITANCIA definida por: T = P/ P0 Al logaritmo en base 10, del recproco de la transmitancia T, se le llama ABSORBANCIA (A) A = Log 1/T A = - Log T MATERIAL Espectrofotmetro Balanza Analtica 3 matraces de aforacin de 1 litro REACTIVOS PERMANGANATO DE POTASIO (KMnO 4) 5X10-4M. Calcular la cantidad necesaria para preparar un litro. Disolver en 500 ml de agua destilada, agregar 15 ml de cido sulfrico concentrado, mezclar y aforar a un litro. DICROMATO DE POTASIO (K2Cr2O7) 5X10-4M. Proceder de la misma forma que para el permanganato 1 vaso de precipitado de 100 ml 1 pipeta de 10 ml 1 probeta de 100 ml

PROCEDIMIENTO 1. Se determina la absorbancia de una solucin de permanganato de potasio 5X10 -4M en un rango de 400-600 nanmetros (nm), de longitud de onda en el espectrofotmetro designado. Luego se determina la absorbancia en intervalos mas cortos de longitud de onda (de 20 en 20 variando la longitud de onda), donde los cambios estructurales sean evidentes. 2. Se repite lo anterior, pero usando la solucin de dicromato de potasio 5X10 -4M 3. Presentar los datos en la siguiente forma: LONGITUD DE ONDA KMnO4 %T 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 CUESTIONARIO 1. Elaborar grficas de los espectros de las dos soluciones indicando la longitud de onda de mxima absorcin. Utilice papel milimtrico para graficar lambda contra absorbancia y papel semilogartmico para lambda contra % de transmitancia. 2. Investigar las longitudes de onda recomendadas para cada solucin. A K2Cr2O7 %T A

PRACTICA # 6

NITRATOS EN EL SUELO POR EL METODO DEL ACIDO FENOLDISULFONICO OBJETIVO: Construir la grfica de calibracin para nitratos en suelos y determinar con ella la concentracin de muestras problemas. TEORIA: En la gran mayora de suelos, el nitrgeno inorgnico combinado se encuentra en forma de in NH4+ o NO3-. La determinacin de nitratos en suelos es complicada debido a que la cantidad de esta forma mineral de nitrgeno en los suelos est sujeta a cambios rpidos originados por los procesos de amonificacin, nitrificacin y otros procesos microbiolgicos no bien conocidos. Esto significa que las muestras tomadas para la determinacin de nitrgeno de nitratos deben ser analizadas inmediatamente despus de su muestreo. El mtodo colorimtrico empleado con mayor frecuencia en suelos es que hace uso del cido fenildisulfnico. MATERIAL Espectrofotmetro Balanza analtica 1 probeta de 100 ml 1 bao mara 1 termmetro 1 parrilla elctrica 1 frasco obscuro REACTIVOS 1. ACIDO FENILDISULFONICO. Disolver 25 gramos de fenol en 150 ml de cido sulfrico concentrado, agregar 75 ml de cido sulfrico fumante (13-15% SO 3) y calentar en bao mara por dos horas a una temperatura de 95 a 100 0 C. guardar en un frasco de vidrio obscuro. 2. HIDROXIDO DE AMONIO 1:1. Mezcle volmenes iguales de NH4OH concentrado y agua destilada. 3. SOLUCION ESTANDAR DE NITRATOS. Disolver exactamente 7.2160 gramos de nitrato de potasio (seco a 1050 C) en agua y aforar a 1 litro. 4. solucin estndar diluida de nitratos 10 ppm de N-NO3. Tomar 10 ml de la solucin anterior y aforar a 1 litro con agua destilada. 5. SOLUCION EXTRACTORA. Disolver 1 gramo de CaSO4 dihidratado en agua y aforar a 1 litro. PROCEDIMIENTO 1. 2. 3. 4. Pesar 10 gramos de suelo y agregar a un matraz elermeyer de 250 ml. Agregar 50 ml de solucin extractora y agitar durante 15 minutos. Filtrar con papel Whatmann # 42 Tomar una alcuota del filtrado, la cual puede ser de 20 ml, dependiendo de la concentracin de nitratos de la muestra. Agregar esta alcuota a un vaso de precipitado de 100 ml. 5. Evaporar la muestra junto con el blanco que contendr los mismos mililitros de solucin extractora que la muestra, a una temperatura de 95 -100o C. 6. Agregar 2 ml de cido fenoldisulfnico al residuo por medio de una bureta de punta recortada. Inclinar el recipiente de tal manera que el cido entre en contacto con todo el residuo. 3 matraces de aforacin de 1 litro 9 vasos de 100 ml 9 matraces elermeyer de 250 ml 1 bureta de punta recortada 8 matraces de aforacin de 100 ml Papel filtro Whatmann # 42

7. Despus de 10 minutos de reposo, agregar de 30 a 40 ml de agua y 15 ml de solucin de hidrxido de amonio. Un mtodo alternativo de agregar el hidrxido es agregando hasta que el color vire a amarillo y despus agregarle 3 ml ms. 8. Agregar la solucin del paso 7 a un matraz volumtrico de 100 ml, y aforar a la marca con agua destilada. 9. Poner un poco de solucin del paso 8 en una celda y tomar lectura de 420 milimicras ajustando a 100% de transmitancia con un blanco de reactivos. 10. Determine la concentracin en ppm de la muestra problema utilizando la grfica de calibracin construida. PREPARACION DE LA CURVA DE CALIBRACION 1. Tomar alcuotas de 0, 2, 4, 6, 8,10 y 12 ml del estndar de 10 ppm de nitrgeno y agregarles junto con 10 ml de la solucin extractora a vasos de precipitado y proceder con los pasos 5, 6,7 y 8. 2. preparar la grfica usando % de transmitancia y ppm de nitrgeno. NO3 10 ppm blanco 0 ml 2 4 6 8 10 12 Probl. 20 SOLUCIN EXTRACTORA 10 10 10 10 10 10 10 10 H2O DESTILADA af. a 100ml NO3 ppm 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 ? A %T

ppm (NO3) = lectura en la curva X aforacin/ alcuota ppm (NO3) = lectura de la curva X FD FD = factor de dilucin = aforacin/alcuota CUESTIONARIO 1. Construir la grfica de calibracin para nitratos 2. Cul es la importancia de la determinacin analtica de nitratos en suelos?

PRACTICA # 7 SULFATOS EN SUELOS Y AGUA OBJETIVO.- Construir la grfica de calibracin para sulfatos en suelos y aguas y determinar con ella la concentracin de muestras problemas. TEORIA: El azufre se representa en muchas formas en el suelo, entre las que se pueden mencionar, los sulfuros, sulfatos y derivados orgnicos. Se ha encontrado que existe una relacin estrecha entre el carbono, nitrgeno y el azufre de los suelos, misma que indica que una gran parte del azufre se presenta en los compuestos orgnicos. Para que una determinacin se incluya la mayora del azufre, se necesita convertir este elemento a una forma mas simple, tal es el caso de la oxidacin del azufre a sulfatos, o reduccin de cualquiera de sus compuestos a sulfuros. La determinacin se basa en la afinidad que tiene el bario por los sulfatos. MATERIAL Espectrofotmetro Balanza analtica 1 pipeta de 5 ml REACTIVOS HCl 6N Cloruro de bario (BaCl2.H2O) em cristales de 20-60 mallas Sulfato de potasio grado reactivo (K2SO4) PROCEDIMIENTO 1. Se toma uma alcuota de suelo de 2 ml de extracto de suelo, se Le adiciona 1 ml de HCl 6N y se afora con agua destilada a 50 ml en un matraz volumtrico. 2. Efectuadas las diluciones se pasa a un matraz elermeyer de 125 ml y se le agrega 0.5 gr de BaCl2 para precipitar el BaSO 4, se agita durante dos minutos y se realiza la lectura en el espectrofotmetro en longitud de onda de 420 nm ppm (SO4) = lectura en la curva X aforacin/ alcuota 10 matraces de aforacin de 50 ml 10 matraces elermeyer de 125 ml

CURVA DE CALIBRACION PARA SULFATOS SOLUCION ESTANDAR DE SULFATOS.- Disolver 1.8141 gr de K2SO4 en un litro de agua destilada. SOLUCION ESTANDAR DE SULFATOS DILUIDA A 100 ppm .- Tomar 100 ml de la solucin anterior y aforarla a un litro: 1. Tomar alcuotas de 0-40 del estancar de 100 ppm de sulfatos y proceder como en la muestra problema cada vez. 2. Preparar las grficas usando el % de transmitancia y ppm de sulfatos. 3. Determine la concentracin en ppm de la muestra problema utilizando la grfica de calibracin construida.

SO4 (100ppm) (diluciones) 0 5 10 15 20 25 30 35 40 muestra CUESTIONARIO.

Aforar a 50 ml

ppm 0 10 20 30 40 50 60 70 80

1. Construir la grfica de calibracin para sulfatos 2. Cul es la importancia de la determinacin analtica de sulfatos en suelos?

PRACTICA # 8 DETERMINACION DE LA GLUCOSA EN SUERO TECNICA DE HULTMAN CON ORTOTOLUIDINA OBJETIVO: Construir la grfica de calibracin para glucosa en suero y determinar Corella la concentracin de muestras problemas. TEORIA: La ORTOTOLUIDINA reacciona especficamente con las aldohexosas en solucin actica caliente para formar una mezcla en equilibrio de glicosilamina y la correspondiente base de Ziff. El color verde formado es proporcional a la cantidad de glucosa presente. MATERIAL Espectrofotmetro Balanza analtica 6 matraces de aforacin de 100 ml 6 tubos de ensaye de 16x150 mm (con tapn de rosca) 1 pipeta de 1 ml 1 bao mara REACTIVOS Ortotoluidina Solucin estndar de glucosa de 1 mg/ml Solucin de glucosa de 3mg/ml PROCEDIMIENTO 1. En un tubo de ensaye de 16x150 mm, aadir 0.1 ml de suero (problema), en otro tubo aadir 0.1 ml de agua destilada (blanco), y en otro aadir 0.1 ml de solucin patrn de glucosa 1 mg/ml (testigo) 2. Agregar 5 ml del reactivo de ortotoluidina a cada tubo y mezclar. 3. Tapar los tubos y colocarlos en bao de agua hirviendo durante 10 minutos (el nivel del agua en el bao, debe ser superior al nivel de los reactivos en los tubos). 4. Sacar los tubos y enfriarlos (con agua fra corriente). 5. Leer a una longitud de onda de 630 nanmetros. 6. Ajustar a 100% de transmitancia o 0 de absorbancia con el blanco de reactivos (el color es estable 20 minutos) 7. Determine la concentracin de glucosa utilizando la grfica de calibracin construida o por clculos. CURVA DE CALIBRACION # Tubo 1 2 3 4 5 Ml de solucin glucosa 3mg/ml 0.0 0.5 1.0 2.0 3.0 de Agua destilada 3.0 2.5 2.0 1.0 0.0 Miligramos en 100 ml 0.0 50.0 100.0 200.0 300.0

De cada una de estas diluciones tomar 0.1 ml y proseguir como se indica en la tcnica a partir del paso 2.

VALORES NORMALES DE GLUCOSA EN SANGRE. DE 70 A 100 mg en 100 ml de plasma

50

60

70

80

100

110

120

130

140

150

160

GLUCOSA (Mg/ml) CALCULOS: ABSORBANCIA DEL PROBLEMA ABSORBANCIA DEL TESTIGO CUESTIONARIO: 1. Construir la grfica de calibracin para glucosa. 2. Cual es la importancia analtica de la determinacin de glucosa en suero? X 100 = mg glucosa /100

PRACTICA # 9 REFRACTOMETRIA MANEJO Y CUIDADOS DEL REFRACTOMETRO DE ABBE-3L MR OBJETIVO: Manejar correctamente el refractmetro. Realizar su calibracin, determinar el ndice de refraccin de sustancias puras y conocer sus principales cuidados. TEORIA: Cuando un rayo de luz penetra en un medio en que su velocidad de propagacin es diferente (con respecto al medio original), el rayo sufre una desviacin conocida con el nombre de refraccin de la luz

MATERIAL Refractmetro 1 gotero REACTIVOS Agua destilada Cloroformo PROCEDIMIENTO CALIBRACION

Pauelos desechables Algodn Benceno Alcohol etlico

1. Conecte el aparato a corriente de 110 V, baje la palanca de encendido hacia el centro 2. Calibrarlo con agua destilada (nD = 1.3325) de la siguiente manera: a) Abra la tapa del prisma (3), y limpie completamente el prisma de medicin y el prisma superior (2).

b) Deposite y disperse en el prisma de medicin una gota de agua destilada c) Cierre el prisma superior. Si la muestra es lquida la tapa (5), permanece cerrada. d) Acerque la fuente luminosa (1), y regule la intensidad girando la lmpara para ver bien la zona de sombra luz, si no se observa correctamente, entonces regularla con el dial de calibracin (6), debe de hacerse mas visible la separacin sombra-luz. e) Aproximar y centrar la sombra luz al centro de la cruz con el manubrio que se encuentra en la parte central lateral derecha. NOTA: el cloroformo nD = 1.4428 y el benceno nD = 1.4979 f) Se mueve la palanca de encendido del centro hacia abajo. Deber marcar 0 de slidos totales disueltos (std), y 1.3325 nD; si no es as, utilizar la llavecita de calibracin y ajustar a sa lectura, introduciendo en el orificio de calibracin que se encuentra a un lado del manubrio de calibracin. MEDICION DE MUESTRAS PROBLEMAS 3. Se apaga el aparato pasando la palanca de encendido hacia arriba, enseguida se baja (1), se levanta el prisma superior (2) y se abre la tapa (5), se limpia bien y con mucho cuidado, se deposita y se distribuye una gota del problema, se cierra (2) y (5). 4. Se prende el aparato colocando la palanca de encendido hacia el centro, se sube (1), se centra la sombra-luz en el centro de la cruz con el manubrio, se baja la palanca de encendido hacia abajo. 5. Se observa y anota la lectura la cual ser indicada por el trazo que pasa verticalmente en el campo visual.

CUIDADOS DEL REFRACTMETRO Este aparato proporciona una mxima precisin y una rpida y fcil operacin. Para mantener estas propiedades, se debe limpiar cuidadosamente todo el tiempo y tener un cuidado especial con su sistema de prismas; estos cuidados son: 1. Utilizar un detergente no inico para limpiar los prismas, despus de cada muestra, se pueden limpiar con algodn empapado con alcohol etlico, benceno o ter de petrleo para eliminar los compuestos insolubles en agua. Los compuestos solubles en agua se eliminan con agua destilada tibia. 2. . El prisma superior debe de estar cerrado cuando no se usa. Los cristales de los prismas son muy delicados y fcilmente astillables, debe evitarse aplicadores de metal o de vidrio y solo debe de usarse algodn absorbente libre de polvo para limpiar los prismas. 3. Alrededor de los prismas tienen resinas epxidas, las cuales son resistentes a varios materiales, sin embargo existen solventes que pueden reaccionar con ellas, por lo cual no deben usarse ciertas sustancias como el N,N-dimetilformamida, fenoles, cresoles y otros cidos alquitrantes; soluciones de cido actico y N,N- dimetilacetamida. CUESTIONARIO 1. 2. 3. 4. 5. En que consiste el ndice de refraccin? A que se le llama refraccin especifica? Qu es la refraccin molar? Cules son las variables que afectan a las mediciones del ndice de refraccin? Dibujar un diagrama del refractmetro de Abbe, sealar cada parte y mencione porque es el instrumento mas usado 6. Cules son las aplicaciones de la refractometra? 7. Proporcione un diagrama esquemtico de un refractmetro

PRACTICA # 10 DETERMINACION REFRACTOMETRICA DE AZUCARES OBJETIVO: Adiestrarse en el manejo del aparato y cuantificar el azcar de un jugo o refresco comercial. TEORIA: El ndice de refraccin es valioso en los anlisis cuantitativos, cuando se ha obtenido una sustancia en estado razonable puro, la determinacin del ndice de refraccin disminuye inmediatamente las posibilidades que debe corroborarse para su identificacin. MATERIAL Refractmetro Balanza analtica 4 matraces de aforacin de 100ml SUSTANCIAS Sacarosa Jugo o refresco comercial PROCEDIMIENTO 1. A partir de sacarosa pura y agua destilada, se prepara una serie de soluciones tipo con 0,5,10,30 y 50 % de concentracin en sacarosa (con 5 0 10 ml de cada solucin son suficientes) 2. Determinar el ndice de refraccin a cada solucin y hacer una grfica de los resultados obtenidos nD contra concentracin en %. 3. Con la ayudad de la grfica determine el % de sacarosa en la solucin problema (jugo o refresco comercial). CUESTIONARIO 1. Construir la grfica nD contra porcentaje de sacarosa y la concentracin de la muestra problema 2. Investigar el efecto de la temperatura y la fuente de luz en las determinaciones refractomtricas 4 vasos de precipitado de 50 ml 1 gotero

PRACTICA # 11 DETERMINACION DE ALCOHOL ETILICO POR REFRACTOMETRIA OBJETIVO: Construir la grfica ndice de refraccin contra concentracin para el sistema aguaalcohol y cuantificar el etanol en licores diversos. TEORIA: Para el anlisis seguro de una mezcla es requisito que el sistema a cuantificar presente una curva de composicin-ndice de refraccin casi lineal para componentes de inters. Generalmente esta condicin se cumple para rangos pequeos de concentracin y componente qumicamente similares; sin embargo, algunos sistemas presentan mximos o mnimos; por ejemplo, el sistema etanol-agua estudiado en esta prctica. MATERIAL Refractmetro 7 matraces de aforacin de 100 ml 1 probeta de 50 ml REACTIVOS Alcohol etlico Tequila Vodka PROCEDIMIENTO 1. A partir de etanol puro y agua destilada, se prepara una serie de soluciones tipo con las concentraciones siguientes (porcentaje en volumen): 0, 10, 30, 50, 70,80 y 100 %. 2. Se determina el ndice de refraccin a cada solucin y se hace una grfica de los resultados obtenidos nD contra concentracin, se pide al maestro una solucin problema (de preferencia licores sin color: tequila, vodka, ginebra, etc) y con la ayuda de la grfica se determina la concentracin alcohlica del licor. CUESTIONARIO 1. Realizar una tabla experimental y la grfica de nD contra % en volumen. 2. Determinar el valor mximo de la curva y la concentracin de los licores analizados 1 probeta de 100 ml 1 gotero

Ginebra Brandy Whisky

PRACTICA # 12 POLARIMETRIA MANEJO Y CUIDADOS DEL POLARIMETRO SR-6 OBJETIVO: Manejar correctamente el polarmetro. Realizar su calibracin, determinar la rotacin especfica de compuestos pticamente activos y conocer sus principales cuidados. TEORIA: Muchas sustancias transparentes tienen la propiedad de rotar el plano de luz polarizada. Estos materiales se conocen como sustancias pticamente activas. Se ha observado que la rotacin es proporcional a la concentracin y al espesor de la celda y se define como rotacin especfica []D a la rotacin que sufre 1 grasmo de sustancia en 1 ml solucin y con un espesor de 1 decmetro (dm).

[]D = /CL

= angulo en grados L = espesor de celda en dm C = concentracin en g/ml de solucin

MATERIAL Polarmetro Balanza analtica 5 matraces de aforacin de 100 ml REACTIVOS Sacarosa Lactosa Maltosa PROCEDIMIENTO CALIBRACION: 1. Conecte el polarmetro en la caja de control; luego conecte la caja de control en el transformador y finalmente conecte el transformador a la corriente de 110 V. 2. Encienda la unidad por medio del botn rojo (switch de apagado-encendido) y active la lmpara de sodio con el botn amarillo, ambos se localizan en la caja de control. 3. Mire a travs del campo de medicin para verificar que la lmpara de sodio est activada, la luz puede en principio aparecer de un color rojo dbil pero despus de aproximadamente dos minutos la luz deber se amarillo brillante; en este tiempo la unidad queda lista para usarse. Fructosa Glucosa

4.

Gire el vernier de tal manera que el 0 quede en la misma posicin del 0 de la escala circular. Ajuste la lupa a travs del campo de medicin de tal manera que la lnea divisoria entre las medias sombras estn enfocadas. Las medias sombras deben aparecer con igual brillantez. El punto sobre la escala circular que da igual brillantez en las medias sombras puede no estar exactamente en el centro del vernier y en el 0 de la escala circular. En este caso anote el punto de igual brillantez de las medias sombras sobre la escala circular y realice las apropiadas compensaciones para las siguientes mediciones.

MEDICION 5. Inserte el tubo de medicin lleno con la muestra dentro de la cmara de medicin con el extremo expandido hacia arriba. Elimine la luz de la cmara, girando el protector que est en la cmara de medicin. 6. Observe por el ocular, y si lo oscuro de la media sombra est a la derecha, entonces se dice que la sustancia es dextrgira (gira la luz polarizada a la derecha). Si la sombra oscura est a la izquierda se dice que la sustancia es levgira (gira la luz polarizada a la izquierda). 7. Gire el vernier en la misma direccin que la rotacin hasta que las dos medias sombras aparezcan con igual brillantez. 8. Lea los grados de rotacin en la escala circular. Usualmente se realizan tres o cuatro mediciones y se saca el promedio. EJEMPLO Tomar 4 gramos de la sustancia que quiere determinar (sacarosa9, adicione agua hasta 100 ml de solucin. La polarizacin en un tubo de medicin de 1 dm +2.65. Entonces el poder de la rotacin especfica es: [] = 2.65/ 1x4 X 100 = 66.25 EJEMPLO Una solucin de azcar de caa es polarizada en un tubo de 2 dm y muestra una = *10 0. el poder de rotacin especifica [] de la azcar de caa se sabe que es *66.5 8bibliograficamente para la sustancia pura). Por lo tanto para determinar la concentracin C : C = 10/2 X 66.5 X 100 = 7.52 Esto significa que esta solucin contiene 7.52 gr de azcar de caa por 100 ml de solucin. ROTACION ESPECFICA BIBLIOGRAFICA DE SUSTANCIAS PURAS D-gilceraldehdo L-arabinosa D-xilosa D-ribosa D-glucosa D-manosa D-galactosa D-fructosa Maltosa Lactosa Sacarosa + 13.5 + 10.4 + 19.0 - 23.7 + 42.7 + 14.2 + 81.5 - 92.0 +138.0 + 52.5 + 66.5

EL QUE UN CARBOHIDRATO TENGA UNA ROTACION OPTICA POSITIVA O NEGATIVA NO ES CONSECUENCIA DE QUE SU ESTRUCTURA SEA D O L

CUIDADOS DEL POLARIMETRO 1. En primer lugar guarde el instrumento en buenas condiciones de trabajo, es esencial que el tubo de medicin nunca sea insertado hmedo dentro de la cmara de medicin. 2. El tubo de medicin lleno, no debe gotear, puede usarse un trapo limpio o pao para limpiarlo. 3. Los tubos no deben sostenerse en la mano por periodos largos de tiempo, puesto que este puede causar alteraciones dentro del lquido y adems inhibir la brillantez. 4. El tubo debe ser insertado en la cmara de medicin con el extremo ensanchado hacia arriba. 5. Al llenar e tubo debe de hacerse con sumo cuidado procurando evitar la formacin de burbujas. 6. Al cerrar el tubo, una vez lleno, hgalo de una manera segura, pero que no quede demasiado apretado el tapn. CUESTIONARIO 1. Cules son los compuestos pticamente activos? 2. Cul es el compuesto dextro? 3. Cul es el compuesto dextro? 4. De que depende la rotacin especfica? 5. De que depende la rotacin angular? 6. Dibuje el diagrama del polarmetro, cuales son cada una de sus partes? 7. Para que se usa la luz de sodio? 8. Cules son los solventes empleados en los mtodos polarimtricos? 9. Cules son sus aplicaciones? 10. Cmo se define la rotacin especfica? 11. Proporcione un diagrama esquemtico del polarmetro

PRACTICA # 13 DETERMINACION POLARIMETRICA DE AZUCAR EN MUESTRAS DE BEBIDAS NATURALES Y COMERCIALES OBJETIVO: Construir la grfica de concentracin contra rotacin angular para la sacarosa y aplicarla al anlisis de muestras que la contengan. TEORIA: Con frecuencia la rotacin angular aumenta linealmente con la concentracin. Algunas sustancias muestran diferentes comportamientos en distintos solventes. Se ha observado, tambin, variaciones hiperblicas y parablicas con la concentracin. La sacarosa y la mayora de otros azcares producen, variaciones aproximadamente lineales. MATERIAL Polarmetro Balanza analtica 6 matraces de aforacin de 100 ml REACTIVOS Sacarosa Jugo de caa Jugos comerciales PROCEDIMIENTO 1. Se prepara una serie de soluciones tipo (a partir de sacarosa y agua pura), cuyas concentraciones sean: 5, 10, 25,50 y 70 gr. /100 ml. Se aconseja preparar de 50 a 100 ml de cada una. 2. Se toma la rotacin angular de cada una y con los datos de la longitud de la celda y el peso del soluto en 1 ml de solucin, se calcula adems la rotacin especfica () que corresponde al sistema. Jugos naturales Bebidas gaseosas

3.

Hay que hacer una grfica de contra concentracin de sacarosa y pedir al instructor una muestra problema (jugo de caa, bebida gaseosa, etc.). Se realiza tambin su clculo mediante la frmula y se comparan los resultados.

CUESTIONARIO 1. Entregar la grfica y la concentracin en sacarosa de la muestra proporcionada calculada por los dos mtodos. 2. Investigar otras aplicaciones cuantitativas 3. Comparar este mtodo con el refractomtrico.