DETERMINACIÓN ESPECTROFOTOMETRICA DE NITRITOS Y NITRATOS

I. OBJETIVOS:

 Determinar la concentración de nitritos y nitratos en muestras de agua residual y

suelo.
 Determinar la longitud de onda óptima del instrumento para los nitritos.
II. FUNDAMENTO TEORICO
2.1. NITRATOS Y NITRITOS
Los nitratos y nitritos son iones que existen de manera natural y que forman parte
del ciclo del nitrógeno.
Los niveles naturales de nitratos en aguas superficiales y subterráneas son
generalmente de unos pocos miligramos por litro. En muchas aguas subterráneas,
se ha observado un incremento de los niveles de nitratos debido a la
intensificación de las prácticas agrícolas y ganaderas. Las concentraciones
pueden alcanzar varios cientos de miligramos por litro. En general, cuando los
niveles de nitratos en el agua potable se encuentran por debajo de los 10 mg/l, la
fuente principal de toma de nitratos para los seres humanos son los vegetales.
Cuando los niveles de nitratos en el agua potable superan los 50 mg/l, el agua
potable será la fuente principal del consumo total de nitratos.
El nitrato es uno de los más frecuentes contaminantes de aguas subterráneas en
áreas rurales. Debe ser controlado en el agua potable principalmente porque
niveles excesivos pueden provocar metahemoglobinemia, o “la enfermedad de los
bebés azules”. Aunque los niveles de nitratos que afectan a los bebés no son
peligrosos para niños mayores y adultos, sí indican la posible presencia de otros
contaminantes más peligrosos procedentes de las residencias o de la agricultura,
tales como bacterias o pesticidas.
El origen de los nitratos en aguas subterráneas es principalmente de fertilizantes,
sistemas sépticos y almacenamiento de estiércol u operaciones de extensión. Los
fertilizantes nitrogenados no absorbidos por las plantas, volatilizados, o
arrastrados por la escorrentía superficial acaban en las aguas subterráneas en
forma de nitratos.
Los niveles de nitratos y nitritos en aguas naturales son un indicador importante de
la calidad del agua. Ambos se encuentran relacionados con el ciclo del nitrógeno
de suelo y plantas superiores, aunque los nitratos son añadidos por medio de
fertilizantes que puede ocasionar que los niveles de estos aumenten. Los nitritos
también se forman durante la biodegradación de nitratos, nitrógeno amoniacal u
otros compuestos orgánicos nitrogenados y se utiliza como indicador de
contaminación fecal en aguas naturales. Los nitratos no se consideran en sí
tóxicos, pero la ingesta de grandes cantidades produce un efecto diurético. Por
otra parte, los nitritos pueden producir compuestos cancerígenos, las nitrosaminas,
por su reacción con aminas secundarias o terciarias, además de interaccionar con
los glóbulos rojos de la sangre produciendo metahemoglobinemia que impide el
transporte de oxígeno al cuerpo.
 Fig. 1 Contaminación en Agua por Nitratos
2.2. MÉTODOS DE DETERMINACIÓN DE NITRATOS Y NITRITOS EN AGUA
Se han desarrollado una gran cantidad de métodos para la cuantificación de estos
analitos en aguas y en otro tipo de muestras como alimentos y fluidos biológicos.
Muchos de los métodos están basados en cromatografía iónica, de hecho, la EPA
recomienda la determinación de nitratos y nitritos por este método, aunque existen
varios métodos enfocados a la cromatografía líquida de alta presión o a la
electroforesis capilar]. Varios métodos analíticos están basados en la reducción de
nitratos a nitritos con detección colorimétrica posterior. Se han utilizado varios
agentes reductores como zinc, cadmio o cadmio cuperizado que se han acoplado
como columnas reductoras a configuraciones de flujo continuo no segmentado
para la cuantificación simultánea de nitratos y nitritos. En la actualidad, los
laboratorios ambientales de rutina requieren métodos rápidos, precisos y
económicos.
Estos laboratorios realizan la determinación de nitritos en aguas de acuerdo a la
Norma Mexicana que se basa en la reacción de los nitritos con sulfanilamida y 1-
naftiletilendiamina para formar un compuesto azo que se mide
espectrofotométricamente. La cuantificación de nitratos se basa en la reacción con
sulfato de brucina la cual requiere altas temperaturas de reacción haciendo la
determinación poco precisa, costosa y muy laboriosa, aunque también se
contempla la determinación por medio de una columna de cadmio cuperizada [24].
Los métodos estándar de la ASTM describen la determinación de nitratos y nitritos
utilizando una columna de cadmio cuperizado para la reducción de nitratos y la
formación de un azo compuesto, estos métodos incluyen un método automático de
flujo segmentado.
 Fig 2. Determinación de Nitratos y Nitratos por espectrofotometría
2.3. ESPECTROFOTOMETRÍA UV-VISIBLE
El fundamento de la espectroscopía se debe a la capacidad de las moléculas para
absorber radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectro UV-visible.
Las longitudes de onda de las radiaciones que una molécula puede absorber y la
eficiencia con la que se absorben dependen de la estructura atómica y de las
condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza iónica, constante dieléctrica), por
lo que dicha técnica constituye un valioso instrumento para la determinación y
caracterización de biomoléculas.
Las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forma de
energía interna. Esto permite poner en funcionamiento ciclos vitales como la
fotosíntesis en plantas y bacterias. Cuando la luz (considerada como energía) es
absorbida por una molécula se origina un salto desde un estado energético basal o
fundamental, E1, a un estado de mayor energía (estado excitado), E2. Y sólo se
absorberá la energía que permita el salto al estado excitado. Cada molécula tiene
una serie de estados excitados (o bandas) que la distingue del resto de moléculas.
Como consecuencia, la absorción que a distintas longitudes de onda presenta una
molécula; esto es, su espectro de absorción constituye una seña de identidad de la
misma. Por último, la molécula en forma excitada libera la energía absorbida hasta
el estado energético fundamental.
A) Instrumentación para la medición de absorbancias de la luz UV-Visible
La medición de absorbancia de la luz por las moléculas se realiza en unos
aparatos llamados espectrofotómetros. Aunque pueden variar en diseño,
en especial con la incorporación de ordenadores para el análisis de datos,
todos los espectrofotómetros constan, según se indica en la figura, de:
1. Una fuente de energía radiante: lámpara de deuterio y tungsteno.
2. Un monocromador para la selección de radiaciones de una
determinada longitud de onda: filtros, prismas, redes de difracción.
3. Un compartimento donde se aloja un recipiente transparente
(cubetas o tubos) que contenga la muestra Pueden ser de vidrio,
cuarzo o plástico transparente. Para medir en UV se deben usar las
 de cuarzo o sílice fundido, porque el vidrio no transmite la radiación
UV.
4. Un detector de luz y un amplificador convertidor de las señales
luminosas en señales eléctricas.
5. Un registrador o sistema de lectura de datos.

Fig 3. Espectrofotómetro
III. REACTIVOS:
1. Solución de Ácido Sulfanílico: Disolver 0,80 g de ácido sulfanílico en 28 mL de
CH3COOH glacial y diluía 100 mL con agua destilada.
2. Solución de -Naftilamina: Disolver 0,50g de 1- naftilamina en 28 mL de
CH3COOH glacial y diluir a 100 mL con agua destilada.
3. Solución de Acetato de Sodio: Disolver 14 g de CH3COONa.3H2O en agua y
diluir a 50 mL.
4. Solución madre de nitritos: Pesar con exactitud 0,1875 g de NaNO2 (g.r) y
disolver con agua destilada y llevar a fiola de 250 mL. Aforar a la marca. Esta
−¿¿
solución es de 500 ppm N O 2
5. Solución de Trabajo: Tomar 0,50 mL de solución madre de nitrito y depositar en
una fiola de 250 mL.
−¿. ¿
Aforar a la marca con agua destilada. Esta solución es de 1 ppm N O 2

IV. PROCEDIMIENTO:
PREPARACIÓN DE LA RECTA DE CALIBRACIÓN:
1. Tomar 05 fiolas volumétricas de 50 mL y colocar los volumenes adecuados (en
μL), de solución standard de tal manera que la concentración en las fiolas sena 0;
−¿¿
0,10; 0,15 ; 0,20 y 0,25 ppm N O 2 .
2. Añadir agua destilada a c/u hasta aproximadamente 25 mL.
3. Colocar 0,50 mL de la solución de ácido sulfanílico y dejar reposar 5 min.
 4. Adicionar 0,50 mL de 1- Naftilamina y aforar a la marca con agua destilada.
5. Seleccione la longitud de onda óptima de operación ( opt ), del instrumento.
6. Usando la fiola N°1 calibrar el instrumento a cero
7. Proceder a leer la absorbancia de cada solución patrón.
8. Graficar la absorbancia obtenidas contra las concentraciones y verificar si cumple
con la Ley de Beer.
PREPARACION Y MEDICION DE LA MUESTRA.
1. Colocar en una fiola de 50 mL una cantidad determinada de muestra (2,5 mL),
previamente tratada.
2. Adicionar cada uno de los reactivos al igual que a las soluciones patrón.
3. Leer en el instrumento la absorbancia
−¿¿
4. Usando la recta de calibración determine la concentración de N O 2 ; para luego
multiplicar por el factor de dilución de la muestra.
−¿¿
5. Obtener las ppm N O2 presentes en el agua problema.

Para la presente marcha tenemos:

( gráfica )∗mL .de alicuotadiluida

−¿ ¿
mL .de alicuota directa
−¿ ( muestra ) = ppm N O2 ¿
ppm N O 2

V. CÁLCULOS:
1. Determinación de la masa teórica a tomar del reactivo NaNO2 para la
−¿¿
preparación teórica de 100 Ml de una solución que sea de 600 ppm N O2 .
−¿¿
Ppm N O2 600
requerida =
Vol. S. Stock (L)= 0.1
Masa molar Na N O 2= 69
−¿¿
Masa molar N O 2 = 46
Pureza (%)= 99.0
Na N O 2 a tomar (g)= 0.0909

NO−¿
2 NO−¿2
W NaN O ( gr )=600 mg x 0.1 Lx 1 gr ¿¿
2
L 3 −¿ 69 grNa NO 2
10 mg NO2 x ¿
−¿ 1
46 gr NO 2 x ¿
0.990
W NaN O ( gr )=0.0909 gr NaN O 2
2
2. Determinación de la [ ] real para un peso real tomado en balanza analítica de
0,1022 g NaNO2.

Masa tomada Na N O 2(g) 0.1022

Volumen a preparar (L) 0.1
Pureza NaNO2 ( % ) 99.0
Masa molar NaNO2 69
−¿¿
Masa molar N O2 46
−¿¿
ppm N O2 real 674.5167
preparado

¿
−¿¿
ppm NO
ppm NO−¿=674.5167 2 ¿
2

−¿¿
3. Preparación de 100 mL de solución de trabajo de 10 ppm N O 2 :

C1 V1 = C2 V2
−¿¿
ppm N O2 inicial (real 674.5167
preparado)
−¿¿
ppm N O2 final (requerido) 10
Vol. Final a preparar S. Trab 100
(mL)
Vol inicial a tomar (mL) 1.4825
Vol inicial a tomar (uL) 1482.5

C 1 x V 1 =C2 x V 2
674.5167 x V 1=10 x 100
10∗100
V 1=
674.5167

V 1=1.4825 mL
V 1=1482.5 μL

4. Determinación de [ ] real de solución de trabajo por ajuste de volumen teórico

a 1,50 mL
 C1 V1 = C2 V2
−¿¿
ppm N O2 inicial (real 674.5167
preparado)
Vol inicial a tomar (mL) 1.5
Vol. Final a preparar S. Trab 100
(mL)
ppm NO2- Sol. Trabajo 10.1177

C 1∗V 1=C 2∗V 2

674.5167∗1.50=C 2∗100
674.5167∗1.50
C 2=
100

C 2=10.1177 ppm NO−¿¿

2

5. Preparación teórica de las soluciones estándar para recta de calibrado de NO2

-usando solución de trabajo real
Aplicando ecuación de dilución: C1 V1 = C2 V2

Std Ppm final Aforar a Ppm Vol a tomar Vol a tomar

teórico inicial (mL) (uL)
1 0 50 10.1177 0 0
2 0.05 50 10.1177 0.2471 247.1
3 0.10 50 10.1177 0.4942 494.2
4 0.15 50 10.1177 0.7413 741.3
5 0.20 50 10.1177 0.9884 988.4
6 0.25 50 10.1177 1.2355 1235.5

 CALCULAMOS EL VOLUMEN 1: C 1 x V 1 =C2 x V 2

10.1177 x V 1=0 x 50
V 1=0 mL ≅ 0 μL
 CALCULAMOS EL VOLUMEN 2: C 1 x V 2 ' =C 2 x V 2
10.1177 x V 2' =0.05 x 50
V 2 ' =0.2471 mL≅ 247 L
 CALCULAMOS EL VOLUMEN 3: C 1 x V 3 =C2 x V 2
10.1177 x V 3=0.10 x 50
V 3=0.4942mL ≅ 494.1 L
 CALCULAMOS EL VOLUMEN 4: C 1 x V 4=C 2 x V 2
 10.1177 x V 4=0.15 x 50
V 4 =0.7413 mL≅ 741.1 L
 CALCULAMOS EL VOLUMEN 5: C 1 x V 5 =C2 x V 2
10.1177 x V 5=0.20 x 50
V 5=0.9884 mL≅ 988.2 L
 CALCULAMOS EL VOLUMEN 6: C 1∗V 6=C 2∗V 2

10.1177∗V 6 =0.25∗50V 6=1.2355mL ≅ 1235.2 L

6. Determinación real de las concentraciones a los valores ajustados de

volumen

Std Vol redond. Vol redond. ppm Aforar Ppm

a a inicial a NO2-
tomar ( μL ) tomar (real)
( mL )
1 0 0 10.1177 50 0
2 250 0.25 10.1177 50 0.0506
3 500 0.50 10.1177 50 0.1012
4 750 0.75 10.1177 50 0.1517
5 1000 1.00 10.1177 50 0.2024
6 1250 1.25 10.1177 50 0.2529

 CONCENTRACIÓN DEL 1° GRUPO: C 1 x V 1 =C2 x V 2

10.1177 x 0=C 2 x 50
C 2=0
 CONCENTRACIÓN DEL 2° GRUPO:
10.1177 x V 1=C2 x V 2
10.1177 x 0.25=C 2 x 50
C 2=0.0506
 CONCENTRACIÓN DEL 3° GRUPO:
10.1177 x V 1=C2 x V 2
10.1177 x 0.5=C 2 x 50
 C 2=0.1012
 CONCENTRACIÓN DEL 4° GRUPO:
10.1177 x V 1=C2 x V 2
std Ppm NO2- Abs
(Real)
1 0 0
2 0.0506 0.018
3 0.1012 0.037
4 0.1517 0.061
5 0.2024 0.078
6 0.2529 0.095
Muestra 0.022
10.1177 x 0.75=C 2 x 50
C 2=0.1517
 CONCENTRACIÓN DEL 5° GRUPO:
10.1177 x V 1=C2 x V 2
10.1177 x 1=C 2 x 50
C 2=0.2024
 CONCENTRACIÓN DEL 6° GRUPO:
10.1177 x V 1=C2 x V 2
10.1197 x 1.25=C 2 x 50
C 2=0.2529

7. Lecturas obtenidas en el espectrofotómetro para estándares y muestra

Volumen de muestra de agua tomada para análisis = 10 mL
CÁLCULOS:

1. Construir la recta de calibración para el Nitritos:

Std. ppm NO−¿¿

2 Abs
1 0 0
2 0.0506 0.018
3 0.1012 0.037
5 0.2024 0.078
6 0.2529 0.095
Muestra 0.022

2. Determinar la concentración de Nitritos y Nitratos en el agua residual

examen.
Y =0.3814 ( X )−0.0007
Asb=0.3814 ¿
0.022=0.3314 ¿
0.022+0.0007
−¿= ¿
0.3814
ppm NO 2
−¿¿
ppm NO
ppm NO−¿=0.0595 2 ¿
2

−¿=0.0595 ( 5010 )¿
ppm NO 2
−¿¿
NO
ppm NO−¿=0.2976 2 ¿
2
VI. CONCLUSIONES

 En el caso de los nitritos, se genera una reacción con aminas y amidas lo cual
forman nitrosominas de un poder cancerígeno.

 Se concluye que los resultados arrojados en las muestras tanto de nitritos como
nitratos están en el rango de concentraciones trabajado.

 En el caso de los nitratos, se adecua para una determinación rápida de NO 3 ¿ , y

−¿

específicamente para aguas.

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

 Cabrera, E.; Hernández, L.; Gómez, H.; Cañizares, M. (marzo del 2003)
Determinación de nitratos y nitritos en agua. Comparación de costos entre un
método de flujo continuo y un método estándar. Revista de la Sociedad Química
de México. Obtenido de: https://www.redalyc.org/pdf/475/47547114.pdf
 Lenntech (s. f) Nitratos y nitritos. Obtenido de: https://www.lenntech.es/nitratos-y-
nitritos.htm
 Lenntech (s. f) Nitratos. Obtenido de: https://www.lenntech.es/nitratos.htm
 Abril, N., Bárcena A. Fernandez E., Galván A., Jorrín J., Péinado J.; Toribio F.,
Túnez I.(s. f) Espectrofometría: Espectros de absorción y cuantificación
colorimétrica de biomoléculas , Obtenido de:https://www.uco.es/dptos/bioquimica-
biol-mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETRIA.pdf