Nombre

Staphilococcus Aureus

Agar Diferencial o Selectivo Agar Sal y Manitol

Composicin

Fundamento

Frmula (en gramos por litro) Extracto de carne Pluripeptona d-Manitol Cloruro de sodio Agar Rojo de fenol 1.0 10.0 10.0 75.0 15.0 0.025

Una alta concentracin de sal promueve el crecimiento de algunos organismos mientras inhibe el crecimiento de otros. AMS es un medio diferencial porque contiene el azcar manitol y el indicador de pH rojo de fenol. Los organismos que pueden fermentar el manitol liberan subproductos cidos, que causan un cambio de color. El rojo de fenol presenta un color rojo cereza por arriba de pH 8.5, un color amarillo rojizo desde un pH 6.9 a 8.5, y un amarillo brillante por debajo de un pH de 6.9. Aunque tanto el Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus aureus puede tolerar el alto contenido de sal en el AMS, solamente S. aureus puede fermentar el manitol, causando que el rojo de fenol vire al amarillo. Microorganismos Crecimiento Staphylococcus aureus ATCC 25923 Excelente Staphylococcus epidermidis ATCC Bueno 14990 Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido Klebsiella pneumoniae ATCC Inhibido 700603 Caractersticas de las colonias Amarilla Roja Inhibido Inhibido

Gram (+)

Salmonella spp.

Agar Verde Brillante

Frmula (en gramos por litro) Pluripeptona 10.0 Extracto de levadura 3.0 Cloruro de sodio 5.0 Lactosa 10.0 Sacarosa 10.0 0.08

Gram (-)

Rojo fenol

Escherichia Coli

Agar de Acetato

Gram (-)

Frmula (en gramos por litro) Acetato de sodio 2.0 Sulfato de magnesio 0.2 Cloruro de sodio 5.0 Fosfato de amonio 1.0 Fosfato dipotsico 1.0 Azul de bromotimol 0.08 Agar 14.8

Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella spp., En el medio de cultivo, la pluripeptona y el extracto de levadura, constituyen la fuente de nitrgeno, vitaminas y minerales. La lactosa y la sacarosa son los hidratos de carbono fermentables, el rojo fenol es el indicador de pH, que vira al amarillo cuando hay produccin de cido a partir de la fermentacin de azcares, el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el verde brillante acta como agente selectivo.} Microorganismos Caractersticas de las colonias Escherichia coli ATCC 25922 Amarillo-verdosas sobre fondo amarillento Rosas, blancas o transparentes sobre fondo Salmonella enteritidis ATCC 13076 rojo Salmonella typhi Crecimiento inhibido Rosas, blancas o transparentes sobre fondo Salmonella typhimurium ATCC 14028 rojo Shigella flexneri. ATCC 12022 Crecimiento inhibido Staphylococcus aureus ATCC 25923 Crecimiento inhibido Es un medio de cultivo que contiene una mezcla de sales en la cual, el acetato de sodio es la nica fuente de carbono. No posee azcares ni tampoco inhibidores del crecimiento bacteriano Un microorganismo que es capaz de usar acetato como su nica fuente de carbono, utiliza tambin las sales de amonio como su nica fuente de nitrgeno. Debido a la utilizacin de sales de amonio, se libera amonaco, que alcaliniza el medio, y esto produce un viraje del indicador azul de bromotimol del color verde al color azul. La mayora de las enterobacterias utilizan el acetato como nica fuente de carbono, excepto Shigella spp., Proteus spp., y Providencia spp. Escherichia coli y Shigella spp., son enterobacterias que presentan gran homologa entre s, y este medio de cultivo es til para diferenciarlas, especialmente a Escherichia coli,biotipo A-D, inmvil, anaerognico, de Shigella spp.

Bacillus subtilis

Agar Yema de Huevo o Agar Selectivo B.cereus

Frmula (en gramos por litro) Manitol 10.0 Cloruro de sodio 2.0 Sulfato de magnesio 0.1 Fosfato disdico 2.5 Fosfato monopotsico 0.25 Azul de bromotimol 0.12 Piruvato de sodio 10.0 Agar 14.0

Gram (+)

Microorganismos Crecimiento Apariencia E. coli ATCC 25922 Bueno a excelente Azul K. pneumoniae ATCC 700603 Bueno a excelente Azul S. typhimurium ATCC 14028 Bueno a excelente Azul S. flexneri ATCC 12022 Pobre a bueno Verde En el medio de cultivo, el contenido de peptona es bajo (0.1%), y la adicin de piruvato de sodio y emulsin de yema de huevo mejora el aislamiento y esporulacin de esta bacteria. Para verificar la utilizacin del manitol, se usa un indicador de pH, azul de bromotimol. Este medio es selectivo, por el agregado del suplemento para Bacillus cereus (cdigo B03-60632) con el que se obtiene una concentracin final de 100 U de Polimixina B por ml de medio.El diagnstico primario se basa en la morfologa y color de la colonia, en la precipitacin de la lecitina hidrolizada y en la falta de utilizacin del manitol por Bacillus cereus. Las colonias tpicas de B. cereus son crenadas, filamentosas de aproximadamente 5 mm de dimetro a las 24 horas de incubacin, y tienen un color turquesa (peacock blue) rodeado por un precipitado de hidrlisis de yema de huevo. A las 48 horas de incubacin presentan el color con centro grisceo. Estos hallazgos diferencian B. cereus de B. subtilis y B. licheniformis, pero pueden no diferenciar B. cereus de otras especies de Bacillus, tales como B. thuringiensis, B. anthracis, B. mycoides, y en estos casos, ser necesario realizar mas ensayos para su identificacin. Microorganismos

Klebsiella pneumonae

Agar Verde Brillante

Frmula (en gramos por litro) Pluripeptona 10.0 Extracto de levadura 3.0 Cloruro de sodio 5.0 Lactosa 10.0 Sacarosa Rojo fenol 10.0 0.08

Gram (-)

Crecimiento Bacillus cereus ATCC 10876 Bueno Staphylococcus aureus ATCC 25923 Bueno Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido Bacillus subtilis ATCC 6633 Bueno, Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella spp., En el medio de cultivo, la pluripeptona y el extracto de levadura, constituyen la fuente de nitrgeno, vitaminas y minerales. La lactosa y la sacarosa son los hidratos de carbono fermentables, el rojo fenol es el indicador de pH, que vira al amarillo cuando hay produccin de cido a partir de la fermentacin de azcares, el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico, y el verde brillante acta como agente selectivo.} Microorganismos Caractersticas de las colonias Rosas, blancas o transparentes sobre fondo Salmonella typhimurium ATCC 14028 rojo Klebsiella pneumonae ATCC 13883 Colonias mucoides amarillas a verdes. Shigella flexneri. ATCC 12022 Crecimiento inhibido Staphylococcus aureus ATCC 25923 Crecimiento inhibido

Shigella Flexneri

Agar Mac Conkey

Gram (-)

Frmula (en gramos por litro) Pluripeptona 5.0 Extracto de 5.0 carne Lactosa 10.0 Mezcla de sales 8.5 biliares Citrato de sodio 8.5 Tiosulfato de 8.5 sodio Citrato frrico 1.0 Agar 13.5 Verde brillante 0.00033 Rojo neutro 0.025

Enterobacter cloacae

Agar Eosina Azul de Metileno

Gram (-)

Frmula (en gramos por litro) Agar 13.5 g Azul de 0.065 g metileno Eosina Y 0.4 g Fosfato 2.0 g dipotsico Lactosa 5.0 g Peptonas 10.0 g Sacarosa 5.0 g

Es un medio de cultivo selectivo y diferencial. La selectividad, esta dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayora de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp. Es diferencial debido a la fermentacin de la lactosa, y a la formacin de cido sulfhdrico a partir del tiosulfato de sodio. Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obtenindose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo. Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.. La produccin de cido sulfhdrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formacin de sulfuro de hierro. Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar previamente la muestra en Selenito caldo (B02-120-05). Microorganismos Colonias Salmonella typhimurium ATCC 14028 Transparentes, centro negro Shigella flexneri Incoloras Shigella sonnei Incoloras Proteus mirabilis ATCC 43071 Transparentes, centro negro Escherichia coli ATCC 25922 Rosadas a rojas con halo turbio Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas cremosas y mucosas Enterococcus faecalis ATCC 29212 Incoloras, de muy escaso crecimiento El medio de cultivo eosina y azul de metileno agar es selectivo y diferencial para el aislamiento de bacilos entricos que permite una diferenciacin entre las colonias de organismos fermentadores de lactosa y aquellos que no la fermentan. La presencia de sacarosa permite para ciertos miembros del grupo coliforme, fermentarla con ms facilidad que la lactosa. Las colonias lactosa positivas son verdes con brillo metlico o poseen centros oscuros con periferias transparentes incoloras , mientras que aquellas que son negativas en lactosa o sacarosa son rosa plido translucidas. Microorganismos Escherichia coli ATCC 25922 Enterobacter aerogenes ATCC 13048 o Enterobacter cloacae ATCC 13047 Salmonella typhimurium ATCC 14028 o Shigella flexneri ATCC 12022 9199 Proteus mirabilis ATCC 43071 Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Staphylococcus aureus ATCC 25923 o Enterococcus faecalis ATCC 29212 Crecimiento Colonias medianas azul a morado con brillo metlico verdoso. Colonias grandes con centro oscuro y bordes rosados, generalmente sin brillo metlico Colonias medianas transparentes , incoloras a rosa Transparentes o rosadas Colonias mucosas rosadas- purpuras Inhibicin total o colonias puntiformes

Leuconostoc

Agar Sangre Gram (+)

Frmula (en gramos por litro) Infusin de msculo de 375.0 corazn Peptona 10.0 Cloruro de sodio 5.0 Agar 15.0

Leuconostoc se desarrolla bien en placas de agar sangre, es de forma esfrica o lenticular y mide de 0,5 a 0,7 de ancho por 0,7 a 1 de longitud. La temperatura ptima para su desarrollo es entre 20 y 30 C, con un pH entre 4,4 y 5. En la superficie del agar son ahemolticas o no hemoltica, por lo que puede confundirse con otros Streptococcus grupo viridans -razn por la que el laboratorio evalu resistencia a vancomicina por difusin-, Enterococcus o Lactococcus sp. El 30% de estas bacterias pueden reaccionar con 2,8 antisueros contra grupo D .

Proteus mirabilis

Agar Sulfito de Bismuto

Gram (-)

Frmula (en gramos por litro) Agar 20.0 g Dextrosa 5.0 g Extracto de 5.0 g carne Fosfato de 4.0 g sodio Peptonas 10.0 g Sulfato ferroso 0.3 g Sulfito de 8.0 g bismuto (indicador)

Agar CNI Yersinia enterocolitica

Gram (-)

Frmula (en gramos por litro) Peptona de caseina 10.0 Peptona de carne 10.0 Extracto de levadura 2.0 Manitol 20.0 Cloruro de sodio 1.0 Sulfato de magnesio 0.01 Piruvato de sodio 2-0 Agar 12.5 Mezcla de sales biliares 1 Rojo Neutro 0.03 Cristal violeta 0.001

La presencia de sulfito de bismuto y de verde brillante inhiben el crecimiento de bacterias Gram positivas y de la mayora de las bacterias Gram negativas. La produccin de sulfuro de hidrgeno se manifiesta en el centro de la colonia por un precipitado negro y un halo negro grisceo con brillo metlico por la reaccin de los iones bismuto con el sulfuro de hidrgeno. Microorganismos Crecimiento Colonias con centro negro y bordes Salmonella typhi ATCC 19430 claros, a las 48 h con halo negro grisceo y brillo metlico. Salmonella enteritidis ATCC 13076 Colonias negras a verdes Salmonella typhimurium ATCC 14028 Colonias negras a verdes. Colonias pequeas sin Proteus mirabilis ATCC 12453 Swarming (crecimiento en olas) verde plido a veces mucoides Escherichia coli ATCC 25922 Crecimiento inhibido o colonias verdes Varios antibiticos (Suplemento selectivo para Yersinia (CIN) as como el Violeta cristal y el desoxicolato inhiben ampliamente la flora acompaante perturbante. Por otra parte, una base nutritiva de alto valor favorece, conjuntamente con el piruvato, el crecimiento de las Yersinias. stas degradan el manitol existente formando cido, de tal forma, que sus colonias toman un color rojo debido al viraje del indicador Rojo neutro. Las Yersinias crecen como colonias con un centro rojo oscuro y un halo transparente. El tamao de las colonias, la anchura del borde de las mismas y la estructura superficial, pueden variar dependiendo del serotipo. Ciertos grmenes acompaantes (por ejemplo algunas Enterobactericeas y Pseudomonas) tambin pueden aparecer en el medio pero con un crecimiento escaso. Microorganismos Yersinia enterocolitica ATCC 9610 Yersinia enterocolitica ATCC 35669 Crecimiento Centro rojo en las colonias Bueno/muy bueno Positivo

Escherichia coli ATCC 25922

Nulo

Salmonella typhimurium ATCC 14028 Nulo Enterobacter cloacae ATCC 13047 Nulo/ligero

Staphylococcus aureus ATCC 25923 Nulo Frmula (en gramos por litro) Pluripeptona 10.0 Extracto de carne 5.0 Lactosa 10.0 Mezcla de sales 8.5 biliares Citrato de sodio 8.5 Tiosulfato de sodio 8.5 Citrato frrico 1.0 Agar 13.5 Verde brillante 0.00033 Rojo neutro 0.025 Es un medio de cultivo selectivo y diferencial. La selectividad, esta dada por las sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Grampositivas, de la mayora de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteusspp. Es diferencial debido a la fermentacin de la lactosa, y a la formacin de cido sulfhdrico a partir del tiosulfato de sodio

Diferenciacin Salmonella y Shiguella

Agar Salmonella Shiguella

NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Enfriar a 45-50C y distribuir unos 20 ml por placa. Secar la superficie del medio unos minutos en la estufa.

Diferenciacin de Enterobacterias

Agar TSI (Triple Sugar Iron)

Frmula (en gramos por litro) Agar 20.0 g Dextrosa 5.0 g Extracto de 5.0 g carne Fosfato de 4.0 g sodio Peptonas 10.0 g Sulfato ferroso 0.3 g Sulfito de 8.0 g bismuto (indicador)

Microorganismos Caractersticas de las colonias Escherichia coli ATCC 25922 Cremiento de colonias rosadas o rojas Klebsiella Pneumonae ATCC 700603 Colonias rosadas cremosas y mucosas Salmonella typhimurium ATCC 14028 Colonias Transparentes, centro negro Shigella flexneri. ATCC 12022 Colonias Transparentes Proteus mirabilis Colonias Transparentes, centro negro El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el +3 sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico. Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio cido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro.

Tubo Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5 Tubo 6 Tubo 7

Microorganismo Sin inoculo Escherichia coli Enterobacter cloacae Klebsiella pneumonae Pseudomona aeruginosa Shalmonella Thyphi Shiguella sonnei

Bibliografia Consultada http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/sangreagarbase.htm http://www.articlearchives.com/manufacturing/food-mfg-dairy-product-cheese/1294421-1.html http://www.biol.unlp.edu.ar/microbiologiagral/problemas01-08.doc http://tegra.lasalle.edu.co/dspace/bitstream/10185/1222/1/13961076.pdf http://80.37.246.49/ScharlabDades/Productos/descargarpdf.php?pag=38&pm=803 http://www.alimentariaonline.com/apadmin/img/upload/MLC006_quesoprobioWSF.pdf http://www.farmacopea.org.mx/consulta/dispmed/DMD016.pdf http://www.farmacopea.org.mx/consulta/dispmed/DMD016.pdf

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