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Seminario

Prctica 14: Pruebas bioqumicas

Primera parte
LIA
Fundamento
reaccin
Sustrato
Enzima
Rango de pH
Productos de degradacin
*Va a ser una diapositiva por fundamento de cada
una de las pruebas que ser hagan en ese medio.
Ejem. MIO: Movilidad, Indol, Ornitina (1 diapositiva
p/ prueba)
LIA
Caractersticas
pH inicial:
Estado fsico:
Siembra:
Tiempo y temperatura de incubacin
LIA
Preparacin
Reactivos necesarios (orden de adicin y
volumen)

*Tambin puede ir la tabla de la composicin


con cada uno de los ingredientes y slo explicar
en que orden se agregan y otros detalles de la
preparacin.
LIA
Interpretacin
Tiempo mximo de lectura:

*Tambin va a ser una diapositiva de


interpretacin por cada una de las pruebas del
medio.
LIA
Utilidad del medio

*Para qu tipo de bacterias o para qu


determinaciones se usa este tipo de medio o
prueba. Ejem. KIA: diferenciacin de
enterobacterias, Muller Hinton: antibiograma.
KIA
TSI
Medio universalmente empleado para la
diferenciacin de enterobacterias, en base a la
fermentacin de glucosa, lactosa, sacarosa y a
la produccin de cido sulfhdrico
Fundamento
La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de
carbono fermentables.

El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la


produccin de cido sulfhdrico, el sulfato de hierro y
amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se
combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro
de hierro, de color negro

Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que


se detectan por medio del indicador rojo de fenol,el
cual vira al color amarillo en medio cido.
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

Extracto de carne 3.0

Pluripeptona 20.0

Cloruro de sodio 5.0

Lactosa 10.0

Suspender 62,5 g del polvo por litro de agua destilada.


Sacarosa 10.0 Mezclar bien y calentar con agitacin frecuente, hervir 1 o 2
minutos hasta disolucin total. Llenar hasta la tercera parte
Glucosa 1.0 de los tubos de ensayo. Esterilizar a 121C por 15 minutos.
Enfriar en pico de flauta profundo.

Sulfato de hierro y amonio 0.2

Tiosulfato de sodio 0.2

Rojo de fenol 0.025

Agar 13.0

pH final: 7.3 0.2


Siembra
A partir de un cultivo puro, sembrar en TSI,
picando el fondo y extendiendo sobre la
superficie del medio
Incubacin
A 35-37C durante
24 horas, en
aerobiosis.
Resultados
1. Pico alcalino/fondo cido (pico rojo/fondo amarillo): el
microorganismo solamente fermenta la glucosa.
2.
Pico cido/fondo cido (pico amarillo/fondo amarillo): el
microorganismo fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.
3.
Pico alcalino/fondo alcalino (pico rojo/fondo rojo): el
microorganismo es no fermentador de azcares.
4.
La presencia de burbujas, o ruptura del medio de cultivo, indica
que el microorganismo produce gas.
5.
El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo
produce cido sulfhdrico.
Microorganismo Pico/Fondo Produccin de gas Produccin decido
sulfhdrico

E. coli ATCC 25922 A/A + -

K. pneumoniae ATCC 700603 A/A + -

P. mirabilis ATCC 43071 K/A + +

S. typhimurium ATCC 14028 K/A - +

S. enteritidis ATCC 13076 K/A + +

S. flexneri ATCC 12022 K/A - -

P. aeruginosa ATCC 27853 K/K - -


Caractersticas del medio
Medio preparado: rojo
MIO
Rojo de Fenol ms Carbohidratos