Agar EMB

Historia
Agar EMB se basa en una fórmula que originalmente fue descrita por Holt-Harris y Teague en
1916; posteriormente fue modificada por Levine. La principal diferencia entre las 2 es la inclusión
de sacarosa en el medio de Holt-Harris y Teague; ciertos microorganismos entéricos fermentan
con mayor facilidad la sacarosa que la lactosa. Ahora el medio de cultivo combina las fórmulas de
Holt-Harris y Teague con la de Levine, para así obtener un mejor rendimiento en el aislamiento
selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos.

Este agar es nutritivo por la presencia de peptona que favorece el desarrollo microbiano, la
diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son
incapaces de hacerlo. Está dada por los indicadores eosina y azul de metileno, estos ejercen un
efecto inhibitorio sobre una amplia variedad de bacterias Gram positivas. El agar es el agente
solidificante, muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp presentan un característico brillo
metálico; las cepas que utilizan la lactosa poseen un centro oscuro con periferia azulada o rosada
mientras que las que no lo hacen son incoloras

Casas Comerciales
Britania

Merck Millipore

MDM Científica

Condalab

Dibico

Fundamento
Es un agar sólido de color púrpura, deshidratado, homogéneo, con libre deslizamiento, selectivo y
diferencial. El agar EMB es sutilmente selectivo, porque contiene los colorantes anilínicos (eosina y
azul de metileno), los cuales actúan como inhibidores, impidiendo el crecimiento de la mayoría de
las bacterias Gram positivas y de algunos bacilos Gram negativos exigentes. Sin embargo, en este
agar algunas bacterias Gram positivas pueden resistir la presencia de las sustancias inhibidoras y
crecer como pequeñas colonias puntiformes incoloras, tal como el Enterococcus faecalis y algunos
Staphylococcus. También pueden crecer algunas levaduras como el complejo Candida albicans,
que dará colonias rosadas muy pequeñas; incluso se pueden desarrollar clamidosporas a partir de
esta levadura si la muestra es sembrada por profundidad.

Por otra parte, el agar EMB también es un medio diferencial, ya que la combinación de los
colorantes que posee (eosina y azul de metileno) tienen la propiedad de formar un precipitado en
pH ácido. Por ello, las bacterias débilmente fermentadoras de lactosa o sacarosa producen
colonias de color púrpura de 24 a 48 horas. Por ejemplo, los géneros Klebsiella, Enterobacter y
Serratia. Aquellas bacterias que fermentan fuertemente la lactosa, como Escherichia coli, o la
sacarosa, como Yersinia enterocolítica o Proteus penneri, forman un precipitado negro verdoso,
dando un aspecto de brillo metálico característico en estas especies. Cabe destacar que si se usa el
medio EMB Levine (sin sacarosa), Yersinia enterocolítica y Proteus penneri producirán colonias
transparentes.

Las bacterias que no fermentan la lactosa ni la sacarosa, se nutren por la presencia de peptonas,
que proporcionan los aminoácidos y el nitrógeno necesario para el desarrollo bacteriano y
producen colonias transparentes; por ejemplo, los géneros Salmonella y Shigella, entre otros.
Además, el género Acinetobacter puede presentar colonias de color azul lavanda, aun cuando no
es fermentador de lactosa ni sacarosa, eso sucede porque tienen la propiedad de fijar el azul de
metileno en su pared celular. De la misma forma puede ocurrir en otras bacterias oxidativas (A.
baumannii, A. calcoaceticus).

Composición
Componente Gramos por Litro
Peptona 10g
Lactosa 5g
Sacarosa 5g
Fosfato Dipotásico 2g
Eosina 0.4g
Azul de Metileno 0.065g
Agar 13.5g
pH Final 7.2 ± 0.2

Peptona

Son una mezcla de aminoácidos y péptidos que resultan de la hidrólisis de proteínas o materiales
proteicos (carne, vegetales, caseína o gelatina). Se utilizan como fuente de nitrógeno, fósforo y
azufre orgánicos y algunos de sus componentes se pueden usar como factores orgánicos de
crecimiento o como fuente de carbono y energía.

Lactosa

Es un disacárido formado por la unión de una molécula de glucosa y otra de galactosa. Es un

fermentador de carbohidratos que ayuda a la diferenciación.

Sacarosa

Es un disacárido formado por glucosa y fructosa, al igual que la lactosa es un fermentador de

carbohidratos que ayudan a la diferenciación. El cristal de sacarosa es transparente el color blanco
es causado por la múltiple difracción de la luz en un grupo de cristales.

Fosfato Dipotásico

Es una sal altamente soluble en agua, a su vez es una fuente común de fosforo y potasio, se usa
como anticoagulante, controlador de acidez y estabilizante.
Eosina

Es un colorante que se presenta en forma de polvo de color rojo insoluble en agua, benceno o
cloroformo, es soluble en alcohol o soluciones alcalinas

Azul de Metileno

Es un colorante orgánico, conocido como un tinte a base de anilina. Esta sustancia tiene forma de
cristales o polvo cristalino y presenta un color verde oscuro, con un brillo bronceado, si se disuelve
el agua y alcohol se torna de color azul intenso; es fácilmente soluble en agua y en cloroformo y es
moderadamente soluble en alcohol

Agar

Es el agente solidificante más común, es un polisacárido de galactosa y galactomanano que se

obtiene de algas rojas. Contiene un 70% de agarosa y un 30% de agaropectina, su composición
química es indefinida y solidifica con mayor dificultad a medida que desciende el pH.

Resultados
Interpretación de los Resultados:

 Microorganismos fermentadores de lactosa y/o sacarosa:

Colonias de color negro azulado o amarronado. Pueden tener centro oscuro y brillo metálico.

 Microorganismos no fermentadores de lactosa y/o sacarosa:

Colonias del color del medio, incoloras.

Control de Calidad
MICROORGANISMOS CRECIMINETO Características de las colonias
Escherichia coli Satisfactorio Negro azuladas con brillo
ATCC 25922 metálico
Escherichia coli Satisfactorio Negras azuladas con brillo
ATCC 8739 metálico
Klebsiella pneumoniae Satisfactorio Mucosas confluentes, con
ATCC 700603 centro oscuro
Proteus mirabilis Satisfactorio Incoloras
ATCC 43071
Salmonella typhimurium Satisfactorio Incoloras
ATCC 14028
Shigella flexneri Satisfactorio Incoloras
ATCC 12022
Pseudomonas aeruginosa Satisfactorio Incoloras
ATCC 27853
Enterococcus faecalis Inhibición parcial Rosadas Puntiformes
ATCC 29212
Candida albicans Inhibición parcial Rosadas Puntiformes
ATCC 10231
Staphylococcus aureus Inhibido ---
ATCC 25923

Control de Esterilidad RESULTADO

Medio sin inocular Sin cambios

Consideraciones
 Solamente para uso diagnostico in vitro. Uso profesional exclusivo
 No utilizar el producto si al recibirlo su envase está abierto o dañado
 No utilizar el producto si existen signos de contaminación o deterioro, así como tampoco
si la fecha de vencimiento expiró
 Utilizar guantes y ropa protectora cuando se manipula el producto
 Considerar las muestras como potencialmente infecciosas y manipularlas siguiendo las
normas de bioseguridad establecidas en el laboratorio
 Las características del producto pueden alterarse si no se conserva apropiadamente
 Todos los desechos y el producto que no ha sido utilizado se deben descartar acatando las
reglamentaciones vigentes

Limitaciones
 En el caso de los microorganismos fermentadores, no se puede diferenciar el carbohidrato
metabolizado.
  Este medio de cultivo es moderadamente inhibitorio ya que las cepas de Enterococo y
Candida se pueden desarrollar en el mismo medio, observándose como colonias de
tamaño puntiforme.
 Para la identificación de género o especie microbiana se deben realizar pruebas
bioquímicas adicionales.
 Algunas cepas de Salmonella y Shigella no crecerán en el agar.
 Durante la esterilización el azul de metileno puede precipitar, es importante resuspender
el precipitado mientras se distribuye el medio preparado en placas de Petri estériles.
 Se debe conservar el medio preparado en placas a 2-8°C y protegido de la luz, ya que los
indicadores presentes son fotosensibles y pueden inhibir el desarrollo de algunas especies
de Proteus si no se conservan apropiadamente.

Bibliografía
https://es.slideshare.net/Suldery/agar-emb

https://www.lifeder.com/agar-emb/

https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a28240e1c004.pdf

http://www.probiotek.com/wp-content/uploads/2014/01/1011-E_AGAR-CON-EOSINA-Y-AZUL-DE-
METILENO-EMB.pdf

Glosario
Clamidosporas

Son un tipo de esporas de paredes gruesas, se encuentran en los hongos. Generalmente son de
color oscuro, esféricas y con una superficie lisa. Son el resultado de la reproducción asexual
mediante los conidios llamados clamidoconidios o (en casos más raros) por reproducción sexual.

Precipitado

Es la creación de un sólido a partir de una solución. Cuando la reacción ocurre en una solución
liquida, el sólido formado se llama precipitado

Acinetobacter baumannii

Es un cocobacilo Gram negativo, no fermentador y resistente a la mayoría de antibióticos. La

enfermedad que produce esta bacteria es neumonía severa e infecciones de tracto urinario.

https://es.wikipedia.org/wiki/Precipitado

https://es.wikipedia.org/wiki/Clamidospora

https://es.wikipedia.org/wiki/Acinetobacter

https://es.wikipedia.org/wiki/Acinetobacter_calcoaceticus

https://es.wikipedia.org/wiki/Acinetobacter_baumannii