Tema 02 - Enzimas

Tema 2.
Cinética
enzimática
Grado de Química Tema 2. Cinética enzimática

Curso 3º
Indice
1. Cinética enzimática. Aproximación de Michaelis-Menten

2. Concepto y sentido fisiológico de la Km y de la Vmax
3. Inhibición enzimática
4. Regulación enzimática

Curso 3º
1. Cinética enzimática
[ES]
S + E P + E
Velocidad de la
reacción catalizada
¿cómo podemos medir la

actividad enzimática?
Cantidad de sustrato consumido en la unidad de tiempo, o

la cantidad de producto formado en la unidad de tiempo.

Curso 3º
[ES]
S + E P + E
Velocidad = Cantidad de enzima que:
µmol S consumido / minuto mol S consumido / segundo
µmol P obtenido / minuto mol P obtenido / segundo
1 Unidad (U) = 1 µmol /min 1 katal = 1 mol /segundo
1 katal = 6·107 U
Avtividad enzimática

Curso 3º
[ES]
S + E P + E
Velocidad = Actividad enzimática
U /ml extracto crudo
Si conocemos el Volumen (ml): U totales
Si conocemos la proteína (mg/ml):

U/mg proteína (Actividad Específica)

Curso 3º
[ES]
S + E P + E
Tª y pH
Determinar la actividad de una enzima (en U/mg proteína), de una

preparación enzimática con una proteína de 1,56 mg/ml, sabiendo que:
a) El tiempo de reacción fue de 10 min de reacción a 35 ºC

b) El volumen total de ensayo fue de 3 mL y se utilizaron 0,25 mL de la
preparación enzimática.
c) Se obtuvo un incremento de absorbancia a 526 nm de 0,437 (referidos a la
formación del producto de la reacción).
d) El coeficiente () de extinción molar del producto (P) a 526 nm es de 0,286
mM-1·cm-1.
Ecuación de Lambert –Beer
Abs = ·L·c
Solución: 1,17 U/mg

Curso 3º
1913
Cinética de Michaelis-Menten
Victor Henri (1902)

hidrólisis de la sacarosa
(sacarasa)
[ES]
S + E P + E
V0
Leonor Michaelis Maud Leonora Menten
Representando V0 frente a la [S]

Curso 3º
Saturación
Velocidad de reacción (U)
Actividad enzimática
E
SP
Cinética de
Michaelis-Menten
Concentración de sustrato (mM)

Curso 3º
(Actividad enzimática)
Ecuación de Michaelis-Menten

Curso 3º
Si [S] >>> Km  Km + [S]  [S]
Si [S] <<< Km  Km + [S]  Km

Curso 3º
Indice
GS, imagen estereoscópica


Curso 3º
¿Qué significado tiene la Km?
• Significado cinético: nos indica la

concentración de sustrato necesaria para
alcanzar la mitad de la velocidad máxima.
• Significado fisiológico: es una medida de la

afinidad del enzima por el sustrato. Así,
cuanto más pequeña es la Km, mayor
afinidad del enzima por el sustrato.

Curso 3º
LEUCEMIA LINFOIDE
Asn  Asp + NH4+

Asparraginasa
Fuente Animal
Vegetal
la de menor Microbiana
Km
(mayor afinidad)

Curso 3º
¿ Cómo obtener los parámetros cinéticos. Km y Vmax ?

Curso 3º

Curso 3º
y = ax + b
Representación de
dobles inversos o de
Lineweaver-Burke

Curso 3º
y = ax + b
Representación de
Eadie y Hofstee

Curso 3º
Indice


Curso 3º
INHIBIDOR: sustancia que interacciona con la

enzima e interfiere en su actividad catalítica
1) INHIBIDORES REVERSIBLES:
Competitivo
No Competitivo
Acompetitivo
2) INHIBIDORES IRREVERSIBLES:
Uniones covalentes

Curso 3º
• En la inhibición competitiva
El inhibidor compite
con el S por el sitio
activo
K1 K2
E+S ES E+P
K-1
Ki
E+I EI

Curso 3º
La Vmax no varía
Lineweaver-Burke
El inhibidor compite
con el S por el sitio
activo
K1 K2
E+S ES E+P
K-1
Ki
E+I EI
La Km aparentemente aumenta - 1/Km

Curso 3º
La Vmax no varía
ap
ap
Km = Km (1+[I]/Ki)
K1 K2
E+S ES E+P
K-1
Ki
E+I EI
La Km aparentemente aumenta - 1/Km

Curso 3º
Los inhibidores competitivos se utilizan normalmente

como fármacos
IBUPROFENO actúa sobre la ciclooxigenasa
ASPIRINA actúa sobre la ciclooxigenasa

Curso 3º

como fármacos

Curso 3º

como fármacos

Curso 3º
La amoxicilina inhibe la
síntesis de la pared
celular bacteriana durante
la fase de crecimiento
mediante la inhibición
competitiva de la
transpeptidasas.
Cada comprimido contiene:

Amoxicilina (trihidrato)..............................500 mg
Acido clavulánico (sal de potasio)............125 mg

Curso 3º

Curso 3º
• En la inhibición NO competitiva
el inhibidor interacciona
con la enzima por una
zona distinta al sitio
activo
K1 K2
E+S ES E+P
K-1
Ki
E+I EI
Ki2
ES+I EIS

Curso 3º
Inhibición no competitiva
el inhibidor interacciona
con la enzima por una 1/V Con I
zona distinta al sitio
ap activo
Vmax = Vmax / (1+[I]/Ki) 1/V ’max Sin I
K1 K2
E+S ES E+P
K-1 1/Vmax
Ki
E+I EI
- 1/Km 0 1/[S]
Ki2
ES+I EIS
La Km no varía y la Vmax si varia
La Vmax aparentemente disminuye

Curso 3º
Ag+
Hg2+ Pb2+

Curso 3º

Curso 3º
• En la inhibición Acompetitiva
S
El inhibidor interacciona
sólo con el complejo
[ES], evitando la
reacción
X P
I
K1 K2
E+S ES E+P
K-1
Ki
ES+I EIS

Curso 3º
El inhibidor interacciona
sólo con el complejo
[ES], evitando la
reacción
K1 K2
E+S ES E+P
K-1
Ki
ES+I EIS
Afecta a la Vmax y a la Km (ambas disminuyen)
Curso 3º
El glifosato es el principio
activo del herbicida Roundup,
que inhibe acompetitivamente
la síntesis de aminoácidos
aromáticos en las plantas

Curso 3º
1/Act
1/Act 1/Act
1/[S] 1/[S] 1/[S]

Curso 3º
INHIBIDOR: sustancia que interacciona con la

enzima e interfiere en su actividad catalítica
1) INHIBIDORES REVERSIBLES:
Competitivo
No Competitivo
Acompetitivo
2) INHIBIDORES IRREVERSIBLES:
Uniones covalentes

Curso 3º
• En la inhibición Irreversible
El inhibidor se une S
covalentemente al
enzima, evitando la
reacción
K1 K2
E+S ES E+P
K-1
I
Ki
ES+I EIS
K*i Similar a la inhibición competitiva
E+I EI

Curso 3º
• En la inhibición competitiva irreversible
El ácido clavulánico es un
inhibidor Competitivo
irreversible de la
penicilinasa bacteriana
Cada comprimido contiene:

Amoxicilina (trihidrato)..............................500 mg
Acido clavulánico (sal de potasio)............125 mg

Curso 3º
(Penicilasa)
(Penicilasa)

Curso 3º
• En la inhibición Irreversible
Los inhibidores competitivos se parecen a los sustratos
O Sustrato O Inhibidor
C H2N S NH2
HO NH2
PABA Sulfanilamide
PABA precursor del ácido fólico en bacterias

PABA: ácido paraaminobenzóico

Curso 3º
• Inhibición competitiva irreversible
acetilcolina
Gas Sarín

Curso 3º
Indice


Curso 3º
• A nivel de síntesis enzimática (regulación genética)

• A nivel de actividad ([S], [E], I, Tª, pH, otros)
Tª óptima
Actividad (U)
Temperatura
Desnaturalización térmica

Curso 3º

• A nivel de actividad ([S], [E], I, pH, Tª , otros)
Ln k (Actividad enzimática)
10
Tª óptima
8
Actividad (U)
Ln k
4
y = -6,4308x + 27 ,027
2
0
2,95 3,00 3,05 3,10 3,15 3,20 3,25 3,30
Temperatura (1/K)*1000

Curso 3º

pH óptimo
Cada enzima
tiene su pH
Actividad (U)
óptimo de trabajo
Tamponar el proceso:
• fosfato
pH
• Tris-HCl
• MOS, MES, …..

Curso 3º
• A nivel de síntesis enzimática (regulación

genética)
• Enzimas regulatorias
Retro-inhibición

Curso 3º

genética)
Enzimas alostéticas
Están especializadas en
regularse respondiendo de
forma muy sensible a
señales externas

Curso 3º

genética)

Curso 3º
•Enzimas regulatorias
Moduladores
(positivo y negativo)
Si el modulador coincide con el sustrato (regulación homotrópica)

Si el modulador es distinto al sustrato (regulación heterotrópica)

Curso 3º
•Enzimas regulatorias (Enzimas alostética)
Enzima alostérica
Vo (µmol/min)
Enzima no alostérica
[S] ( mM)

Curso 3º
•Enzimas regulatorias (Enzimas alostéticas)
Modulador positivo
Enzima alostérica
Vo (µmol/min)
Modulador negativo
[S] ( mM)
S0,5
Curso 3º
Modulador Positivo
Modulador positivo

Curso 3º
Modulador negativo
Modulador negativo

Curso 3º
Archibal Hill (1913) Indice de Hill (n)
n > 1, la cooperatividad positiva

n < 1, la cooperatividad negativa
n=1 Michaelis-Menten.

Curso 3º
y = ax + b
S0,5
n=2,3
Dobles inversos

Curso 3º

• Enzimas interconvertibles (por unión covalente)
Fosforilación/desfosforilación
Enzima - Pi Inactiva
Piruvato
deshidrogenasa
Piruvato Piruvato Piruvato

deshidrogenasa deshidrogenasa deshidrogenasa
quinasa
ATP fosfatasa
Pi
Piruvato
deshidrogenasa
Enzima Activa

Curso 3º

• Enzimas interconvertibles
• Zimógenos
Regulación por eliminación proteolítica de

pequeños segmentos peptídicos

Curso 3º
Zimógenos (Pepsina)

Curso 3º
Tema 2.
Cinética
enzimática

Curso 3º
Otras imágenes estereoscópicas

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1. Cinética enzimática. Aproximación de Michaelis-Menten

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Cantidad de sustrato consumido en la unidad de tiempo, o

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µmol S consumido / minuto mol S consumido / segundo

µmol P obtenido / minuto mol P obtenido / segundo

1 Unidad (U) = 1 µmol /min 1 katal = 1 mol /segundo

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Velocidad = Actividad enzimática

U /ml extracto crudo

Si conocemos el Volumen (ml): U totales

Si conocemos la proteína (mg/ml):

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Determinar la actividad de una enzima (en U/mg proteína), de una

a) El tiempo de reacción fue de 10 min de reacción a 35 ºC

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Representando V0 frente a la [S]

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Si [S] <<< Km  Km + [S]  Km

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• Significado cinético: nos indica la

• Significado fisiológico: es una medida de la

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INHIBIDOR: sustancia que interacciona con la

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La Km aparentemente aumenta - 1/Km

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La Km aparentemente aumenta - 1/Km

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Los inhibidores competitivos se utilizan normalmente

ASPIRINA actúa sobre la ciclooxigenasa

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Los inhibidores competitivos se utilizan normalmente

ASPIRINA actúa sobre la ciclooxigenasa

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Los inhibidores competitivos se utilizan normalmente

ASPIRINA actúa sobre la ciclooxigenasa

Grado de Química Tema 2. Cinética enzimática

Cada comprimido contiene:

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