Género Bacillus

Características del género Bacillus

• Bacilos grandes G+ (3 a 9 m largo- 1m de
ancho)
• Forma de bastón
• Aerobios estrictos o aero-anaerobios facultativos
• Producen esporas
• Catalasa +
• Oxidasa -
• Bacterias saprófitas
• Ubiquitarias: presentes en el suelo y en la
naturaleza
Clasificación científica
• Reino: Bacteria
• División: firmicutes
• Clase: Bacilli
• Orden: Bacillales
• Familia: Bacillaceae
• Género: Bacillus
 Especies del género Bacillus
• Bacillus anthracis
• Bacillus cereus
• Bacillus coagulans
• Bacillus natto
• Bacillus subtilis
• Bacillus thuringiensis
• Bacillus licheniformis
• Bacillus megaterium
• Etc…
 Clasificación en función de la
morfología de la espora
• Tipo 1: espora oval , central o terminal, no
deformante (no más ancha que la célula madre) a
pared fina (B. subtilis, B. cereus, B. megaterium,
B. thuringiensis )
• Tipo 2: espora oval, central o terminal ,
deformante (más ancha que la célula madre) a
pared gruesa (B. polymyxa)
• Tipo 3: espora esférica terminal deformante (B.
sphaericus, B. pasteurii)
 Variación en la morfología de la
endospora
1- B. megaterium
2- B. thuringiensis
3- B.macerans
4- B. polymyxa
5- B. sphaericus
6- B. laterosporus
Clasificación de los bacilos (según
Priest)
• Grupo I: especies a espora tipo 2, metabolismo
anaerobio facultativo con fermentación ácida
• Grupo II: especies a espora tipo 1, metabolismo
aerobio con fermentación ácida
• Grupo III: especies a espora tipo 2, con
metabolismo aerobio estricto
• Grupo IV: especies a espora tipo 3 (B.
sphaericus)
• Grupo V o grupo de Bacillus termófilos :
especies a esporas generalmente tipo 2
 Tema 7:
Bacillus cereus
 Características morfológicas y
biológicas
• Bacilo Gram +
• Esporógeno (espora central incorporada no
deformante)
-Tipo 1: morfología de esporas
-Grupo II (Priest)
• Aerobio pero crece bien en anaerobiosis
• Móvil
• Encapsulado
• Se presenta en forma de células vegetativas
de gran tamaño en cadenas.
 Características bioquímicas de B.
cereus
Características del género • Citrato v
• Catalasa + • Almidón +
• Oxidasa – • Caseína +
Características propias de la • Gelatina+
especie • Lecitina+
• Ácido a partir de glucosa + • Ureasa v
• Retraso sobre glucosa - • Nitratos +
• Gas a partir de glucosa – • Cultivo a 45ºC v
• Movilidad v (perítricos)
• Cultivo a 55ºC -
• Acetoína +
• Cultivo a 65ºC -
• Indol -
 Factores de crecimiento
• Temp. óptima: 30-37 ºC ( temp. extremas:
5 y 55 ºC )
• pH: 4,5 -9,3
• aw=> 0,95
• Puede crecer hasta [NaCl] de 7,5 %
• Su crecimiento es inhibido por el ácido
sórbico
• Es resistente a la penicilina
 Poder patógeno: Bacillus cereus
produce 2 tipos de toxinas
1- una toxina diarreica 2- una toxina emética
(enterotoxina) termolábil termoestable, responsable
producida durante el de los vómitos; producida
crecimiento vegetativo de por las células que crecen
Bacillus cereus en el en los alimentos.
intestino delgado

Toxiinfección alimentaria Intoxinación alimentaria

 Sintomatología
un síndrome diarreico un síndrome emético
-síntomas: diarrea acuosa y
dolores abdominales sin
-síntomas: náuseas,
fiebre vómitos
-período de incubación: 8 a -período de incubación:
16 horas 1 a 5 horas
-proceso dura 24 horas
-proceso dura 24 horas
-carnes, productos
derivados del pollo, -principal alimento:
sopas deshidratadas, arroz.
embutidos, especias…
Propiedad Toxina diarreica Toxina emética
Peso molecular 50 KDa < 5KDa
Estabilidad al calor Inactivada a 56,5ºC-5 Estable a 126ºC-90
min. minutos
Estabilidad al pH Inestable a pH <4 y Estable a pH entre 2 y
>11 11
Tipo de toxina proteína Péptido cíclico

Sensibilidad a las Pronasa, tripsina y Ningún efecto de

proteasas pepsina Tripsina y pepsina
Temp. óptima 32-37ºC 25-30ºC
Fase de crecimiento Final de exponencial Final de exponencial-
estacionaria
(relacionada con
esporulación)
Propiedades de la toxina de Bacillus cereus
características Síndrome diarreico síndrome emético
Dosis infecciosa 105-107 /g 105-108 /g
(células)
Toxina producida En el intestino Preformada en los
delgado del alimentos
hospedador
Período de incubación 8-16 h (a veces >24) 0,5-5 h
Duración de la 12-24 h (a veces varios 6-24
enfermedad días)
Síntomas Dolor abdominal, Náuseas, vómitos,
diarrea acuosa, a malestar, a veces
veces náuseas diarrea
Alimentos implicados Productos cárnicos, Arroz , pasta
muy frecuentemente sopas, hortalizas,
leche y productos
lácteos

Características de los 2 tipos de enfermedad causados por B. cereus

 Epidemiología
• Ampliamente difundido en la naturaleza:
es huésped normal del suelo, polvo, agua
dulce, sedimentos.
• Medio natural→ alimentos (especialmente
a los de origen vegetal)
• Contaminación cruzada → otros alimentos
Se encuentra también en pequeña
cantidad en la flora intestinal
 Asociación con alimentos
• Los requerimientos
nutricionales son simples →se
encuentran asociados con
alimentos ricos en almidón
como el arriz
• Productos amiláceos:
responsable de la forma
emética (arroz, pasta)
• Puré de patatas, carnes
picadas, legumbres, verduras,
salsas, salchichas, platos
cocinados, etc. responsables de
la forma diarreica.
 Mecanismo de patogenicidad
• Esporas no destruidas por el calor
• Después de ser cocinado, el alimento es enfriado a
temperatura ambiente
• Las esporas pueden germinar y se inicia la reproducción
de la bacteria y la producción de 2 tipos de toxinas:
1- la toxina diarreica: sensible al calor (se produce en el
intestino)
►se puede producir atmbien en el alimento cuando la población
es muy elevada (100 veces > a la necesaria para casuar
intoxinación) y estos alimentos son ser rechazados por el
consumidor →no puede producir TIA
2- la toxina emética : resistente al calor (se produce en el
alimento)
 Bacillus cereus en al leche
Causan problemas en productos lácteos
(naturaleza psicrótrofa empeora
Las esporas se hallan
aún más la situación)
en el suelo (10 5 /g)

germinan
Se propagan hasta
las ubres de las vacas

Sobreviven a la
pasteurización

Son muy hidrófobas

(poseen apéndices y /o pelos)
→se adhieren a las tuberías y
otras superficies sólidas de la lechería
 Medidas preventivas
• Evitar la germinación de las esporas en
alimentos cocinados manteniéndolos bajo
refrigeración (temp < 4ºC )
• Prestar atención a la relación tiempo-
temperatura
• A nivel industrial recurrir a sistemas de
esterilización
• Uso de la nisina como conservante en
algunos alimentos
 Detección, recuento e identificación de
las células de B. cereus
En el caso de la forma diarreica:

se recogen las
heces en un frasco estéril

se procesan lo mas
rápidamente posible
o se mantienen a 4ºC

se siembra la muestra en
las placas de Petri
(medio de Mossel, PEMBA)
 Medio de Mossel g/L
• Extracto de carne 1g
• Peptona 10 g
• Manitol 10 g
• Cloruro de sodio 10 g
• Rojo fenol 25 mg
• Agar 15 g
Después de autoclavar 15 min-120ºC, enfriar a 50ºC y
añadir a 900 mL de medio:
+ 100 mL de una emulsión estéril de yema de huevo (20
%)
+ 100.000 U polimixina
pH 7,2
 Siembra en medio
Mossel 24-48 horas -37ºC
Muestra de heces Formas vegetativas de
Bacillus cereus

B. cereus: manitol -, lecitinasa +

 Variante del medio PEMBA (g/L)
• Peptona 1g
• Manitol 10g
• NaCl 2g
• Sulfato de magnesio 0,1 g
• Fosfato disódico 2,5 g
• Fosfato monopotásico 0,25 g
• Piruvato de sodio 10g
• Azul de bromotimol 0,12g
• Agar 14 g
+ 25 mL de una emulsión estéril de yema de huevo (20 %)
+100 000 U polimixina
pH 7,2 a 25ºC
 Siembra en medio
PEMBA 24-48 horas -37ºC
Muestra de heces Formas vegetativas de
Bacillus cereus
 Pruebas de confirmación
• Propiedades morfológicas por tinción, observación
microscópica, y de movilidad.
• Forma de la espora (Tipo) y Grupo (Priest)
• Capacidad de crecimiento en anaerobiosis (+)
• Reacción de Voges-Proskauer (+)
• Reducción de nitratos (+)
• Restraso sobre glucosa (-)
• Hidrólisis de la lecitina (+)
• Ureasa (+)
• Hidrólisis de la caseina (+)
• Hidrólisis de la gelatina (+)
• Indol (-)
• Citrato simmons (v)
 Capacidad de crecimiento en
anaerobiosis de B. cereus (+)

parafina

Incubación a 40ºC y recuento

YG
Producción de acetoína (reacción
VP)
0,5 mL 0,5 mL
-naftol NaOH 16%

1mL

VP +

color rojizo→
Suspensión Medio presencia de acetoína
bacteriana Clark y Lubs (acetil metil carbinol)
 Reducción de los nitratos (+)
NO3- + 2H+ →NO2- + H2O (nitrato reductasa)
- siembra en caldo + nitrato de potasio
- incubación
- añadir unas gotas del reactivo de Griess-
llosways
- la reacción es instantáneauna coloración
rosa o roja traduce la descomposición de
nitratos en nitritos.
 Retraso sobre glucosa (-)

Medio nutritivo sin glucosa Medio nutritivo con glucosa

La glucosa no inhibe parcialmente el crecimiento B. cereus

 Hidrólisis de la lecitina (+++)
• Yema de huevo compuesta de : lecitina,
triglicéridos y lipoproteína
• Siembra en un medio nutritivo (Mc Clung) +
yema de huevo (10 %)
• Incubación en anaerobiosis 1-5 dias 30-37ºC
• La degradación de la lecitina (lecitinasa) se
traduce por el aclaramiento de la yema de
huevo alrededor de las colonias y la formación
de un halo.
 Búsqueda de ureasa (v)
• Medio stuart: fosfato monopotásico,
fosfato disódico, extracto de levaduras,
urea, rojo fenol- pH: 6,8
• Incubación 30 ºC durante 24 horas
CO (NH2)2 + H2O→2NH3 + CO2
CO2 + 2NH3+ H2O→CO3 (NH4)2
• La presencia de ureasa se traduce por
una alcalinización del medio detectable
por el viraje del indicador en el tubo
Hidrólisis de la caseína (+)
• Medio: leche líquida
• La hidrólisis de la caseína se traduce por
un amarillamiento del medio
Hidrólisis de la gelatina (+)
• Siembra de los microorganismos en un
medio nutritivo con gelatina
• Mantener a temperatura ambiente y
observar 48 h- 2 semanas la hidrólisis de
la gelatina
 Producción de indol (-)

• Las bacterias que poseen la triptofanasa son

capaces de hidrolizar el triptófano en indol,
ácido pirúvico y NH3
• Reactivo de kovacs (amarillo) + indolanillo
rojo

Prueba +
Agua peptonada
+ unas gotas del reactivo de kovacs
 Utilización del citrato como única
fuente de C
Citrato de sodio:fuente de C
Azul de bromótimol: indicador de pH
Fosfato de amonio: fuente N
pH: 6.8

37 ºC
1-10 días

Cultivo en Siembra en medio Crecimiento abundante con

citrato de Simmons viraje del medio al
medio sólido
azul→bacterias citrato +
 Bacilus subtilis
• Implicado en algunos brotes de TIA
• Su presencia en productos de panadería
explica un defecto viscoso de la masa
conocido como “pan filante” consistente
en una mucosidad pegajosa en el centro
de la miga que no siempre impide su
consumo.
 Bacillus thurengensis
thuringiensis
• Emparentada cercanamente à B. cereus
• Produce toxina entérica
• Enfermedad transmitida por alimentos
• Problema grave: el rociado de este
organismo se practica para proteger las
cosechas contra los ataques de los
insectos en varios países
 Bacillus anthracis
• Movilidad –
• Es patógeno para los mamíferos
• Virulencia muy alta
• Agente del carbunco o ántrax.
• Verdadero parásito puede infectar la piel, los pulmones y
el aparto gastrointestinal
• Muy contagioso, pasa a las personas a través de algunos
animales (vacas, cabras, ovejas)
• Las esporas pueden sobrevivir en la tierra y en los
productos animales (lana) durante décadas
• El hombre pude también contraer el bacilo al ingerir carne
contaminada o al inhalar esporas o bacterias
• Algunos casos de ántrax son mortales