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Transgenicas Resistentes
a Enfermedades Bacterianas
Taller 24 al 26 de Noviembre, 1998
Lima y San Ramon - Peru
l . Lorentz Bulow
2 . Fausto Buitron
Estas Memorias han sido financiadas con los recurses de
3 . Jorge Benavides
Deutsche Gesellschaft fUr Technische Zusammenarbeit
4. Daniel Chirito
(GTZ)
5 . Cesar Giron
6. Ricardo Gutierrez
CENTRO INTERNACIONAL DE LA PAPA {CIP) 7. Patricio Arce-Johnson
Apartado 1558 - Lima, Peru 8 . Eduardo Perez
Tel.: (51-1) 349-5783; 349-6017. Fax: (51-1) 349-5638.
Correo-E : cip@cgiar.org 9. Jorge Tenorio
l 0. Marc Ghislain
l l . Cesar Aguilar
CtP
~'t
C45.A TABLA DE CONTENIDO
PREAMBULO
BIBLIOTECA
/\4ericleth Bonierhale •••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••••• 9
3
los ambientes de laboratorio, bajo condiciones controladas, para
comprobar al utilicjad ~de este sistema ante las distintas variaciones
climaticas y de suelo~· .. :~.
4
• f ' • ~
OBJETIVOS:
Objectives
Objetivos Generales
Objetivos Especificos
5
•!• lCuales son las medidas de seguridad para manejar
apropiadamente plantas transgenicas con tolerancia a
enfermedades bacterianas en el Peru?
Martes 24 de noviembre
Lima
Miercoles 25 de noviembre
San Ramon
Jueves 26 de noviembre
Lima
Merideth Bonierbale *
9
* Centro Internacional de la Papa (CIP). Estacion Central, La Molina. Lima - Peru
mundial, inclusive en America del Sur (Iguazu, Argentina), donde se
analizaron los posibles riesgos de la liberacion de papas transgenicas
en la zona andina (Riesgos ambientales de las plantas transgenicas en
centros de diversidad: la papa como modelo, Parque Nacional Iguazu,
Argentina, junio de 1995). En el caso espedfico de Peru dependiendo
del tipo de mejora que se realiza, por ejemplo, la introduccion de una
planta transgenica de papa con un gen de resistencia a bacterias
implica distintos riesgos y por ende distintas medidas de seguridad
que la introduccion de una planta transgenica de soya con un gen de
resistencia a herbicidas, puesto que dicho cultivo es originario de esta
region andina.
10
RESISTENCIA A ENFERMEDADES DE
PAPA MEDIADA POR PROTEiNAS
ANTIMICROBIANAS
Potato Disease Resistance Mediated by
Anti-microbial proteins
Marc Ghislain *
INTRODUCCION
11
* Centro Internacional de la Papa (CIP). Estacion Central, La Molina. Lima - Peru
Para cumplir con este objetivo, se estan considerando estas dos
enfermedades dentro del proyecto: Ambas son las enfermedades de
mayor importancia en el cultivo de la papa en los pafses en vfas de
desarrollo. Por esta raz6n, el CIP, esta dedicando sus mayores
esfuerzos a la investigaci6n en este campo, a pesar de las dificultades
para mejorar los niveles de resistencia a estas enfermedades.
12
•!• Organizaci6n de talleres sobre manejo de papas
transgenicas en el medio ambiente
13
(f) El rendimiento par pafs fluctua entre las 7 t/ha, en pafses de la
region del sub-Sahara, y las 27 t/ha caracterfsticos de la provincia
de Shandong en la China. El rendimiento promedio mundial esta
en 13 t/ha en pafses en vfas de desarrollo.
(g) En pafses desarrollados, la mayor produccion se presenta en
Holanda, llegando hasta 42 t/ha.
(h) En condiciones 6ptimas de crecimiento, se estima que la
producci6n podrfa sobrepasar las 100 t/ha.
Se ha realizado porque:
14
(b) El gen que codifica para la sarcotoxina ( del mismo ti po que la
cecropina), aislado del insecto Sarcophaga peregrina e introducido
en papa. Este material esta actualmente en proceso de evaluacion
en el campo en San Ramon (proyecto de colaboracion entre el
Weizmann Institute of Science, Israel y el CIP).
( c) Uso de genes codificantes de tioninas (peso de 5000 da, ricas en
cistefnas) presentes en trigo y cebada. Fueron transferidos a
plantas de tabaco (de expresi6n intracelular). Se observe un
aumento en la resistencia a P. syringae en tamizados de hojas
infiltradas, pero no en condiciones de campo. Otras pruebas con
tioninas se hicieron en tomate y papas sin mayor exito.
( d) El gen de un peptido antimicrobiano, tachyplesin, aislado de un
cangrejo asiatico, fue expresado en papas con secrecion dirigida
hacia el espacio intercelular. Una ligera disminucion del grade de
pudricion fue observada luego de la inoculacion con Erwinia spp.
(e) Protefnas de transferencia no espedfica de lfpidos, nsLTP,
(aisladas de plantas de cebolla) fueron introducidas en tabaco
para conferir resistencia a la presencia de Pseudomonas syringae,
resistencia que se manifesto en la forma de una menor presencia
de sfntomas en las hojas infectadas.
(f) El gen que codifica para la enzima glucosa oxidasa del hongo
Aspergillus niger fue introducido en papas. Esta enzima promueve
la produccion de peroxide de hidrogeno (H 20 2), molecula
altamente toxica para las microbios, pero tambien involucrada en
la reaccion local de hipersensibilidad y coma sefial de defensa
celular. Se observaron altos niveles de resistencia a Erwinia
carotovora. Sin embargo, debe evaluarse el efecto de la expresion
de este gen sabre la salud humana por la toxicidad del H20 2 en
eucariotes.
(g) Genes de lisozima fueron tambien introducidos exitosamente en
papas para aumentar la resistencia a enfermedades bacterianas.
Se trata de las genes que codifican la lisozima del bacteri6fago T4,
de la clara de huevo de gallina, y de bovino.
15
Posibles mejoras en la expresion de los genes
antimicrobianos.
16
(j) Defensinas, protelnas aisladas en semillas de rabanito. Fueron
utilizadas exitosamente en tabaco para incrementar su defensa
ante la presencia de hongos.
PERSPECTIVAS
Las construcciones gerncas que se utilizaron podrfan conferir
resistencia a variedades susceptibles a marchitez bacteriana.
Se probaran los genes en cultivares como Achirana INTA,
Amarilis, Tomasa Condemayta y Desiree.
La o las construcciones que demuestren conferir cierto grado de
resistencia a marchitez bacteriana seran utilizadas conjuntamente para
buscar un efecto sinergico de los genes quimericos sobre la resistencia
bacteriana.
POSIBLES LIMITACIONES
• La opinion publica esta todavfa poco preparada a aceptar los
alimentos obtenidos mediante el uso de la biotecnologfa. Se
trata, en mi opinion mayormente de una falta de informacion
sobre la naturaleza de los cambios geneticos producidos por
este metodo en comparaci6n con los metodos convencionales
que tambien generan modificaciones geneticas. En realidad,
el termino genenco de Organismos Modificados
Geneticamente, ya revela la mala informacion del publico,
17
porque cualquier producto del mejoramiento es una modificacion
genetica que nose encuentra en la naturaleza. Tambien existe en
la opinion publica la creencia de que no existe ningun tipo de
regulacion de los cultivos transgenicos. Esto tampoco es verdad, al
igual que las otros productos obtenidos par mejoramiento, estos
se analizan con respecto a varios caracteres conocidos coma
dafiinos para la salud humana. Sin embargo, algunos riesgos
ambientales necesitan una regulaci6n espedfica que en muchos
casos todavia no existe en los paises en desarrollo.
La desconfianza del consumidor hacia los cultivos
geneticamente modificados podrfa interferir con la inversion que se
realiza en este tipo de investigaci6n, atrasando el desarrollo de esta
tecnologfa en los pafses donde se venden estos productos y afectando
a los productores envueltos en esta actividad.
Tambien, un efecto perverse de esta actitud podrfa ser que se
promuevan los productos que no hayan sido modificados
geneticamente y mantener el sistema actual de producci6n asistido por
numerosos aportes en productos fitosanitarios. Todos sabemos que
estos contaminan el media ambiente, son peligrosos para la salud
humana, tanto para el agricultor coma para el consumidor, y
mantienen una dependencia del agricultor hacia las empresas de
agroqufmicos.
• La regulacion de la bioseguridad referente a los cultivos
transgenicos es tambien un factor limitante para el desarrollo
de esta tecnologia. En general, la obligaci6n de establecer
normas nacionales de bioseguridad conduce a una demora
para el desarrollo de este tipo de productos en los pafses en
desarrollo. Par esta razon, es muy importante que en pafses
coma el Peru se establezca a la brevedad posible normas y
regulaciones, que permitan el desarrollo de esta tecnologfa
bajo la supervision de instancias nacionales donde las sectores
industriales, de proteccion del media ambiente y de la
investigacion agrfcola esten representados.
18
respaldo financiero suficiente como para entablar acci6n judicial en
contra de estas companfas. Entonces, los derechos de propiedad
intelectuales podrfan limitar esta tecnologfa fuera de pafses en vfa de
desarrollo por carecer estos de legislaciones adecuadas para
protegerlos.
1
Estimado a partir de Walker y Collion, 1997
2
Estimado en base a la depreciacion y las costos par insecticidas para gorgojo de las
Andes de la papa, mosca minadora y polilla de papa. Tornado de Walker y Collion,
1997
19
"
,I
Sylvie Priou *
MATERIALES Y METODOS
21
* Centro Internacional de la Papa (CIP). Estacion Central, La Molina. Lima - Peru
Los datos fueron transformados a:
RESULTADOS
Concentraci6n de inoculo
5 x 108 ufc/ml 2.5 x 109 ufc/ml
DL12 (T4) 2.5 a 3.7 a
WIKAA15 (C2) 3.2 b 3.9 a
WIKAA09 (C2) 3.9 b 4.1 a
DLlO (T4) 5.2 c 4.8 b
Desiree cs, NT) 10.8 d 12.8 c
Dunnett, P = 0.05
S = Susceptible; NT = Clan no transgenico.
22
Tabla 2. Porcentaje relativo de pudricion blanda (PRPB) en clones de papa
transgenicas (Sarcotoxina IA) inoculadas por el metodo del sacabocado
con dos concentraciones de Etwinia carotovora subsp. carotovora.
Concentracion de inoculo
Clon 8
5 x 10 ufc/ml 2.5 x 109 ufc/ml
PS-12 (Achirana INTA) 2.6* b 6.7 e
PS-8 (TS-10) 2.9 b 3.8 b
PS-1 (Achirana INTA) 3.6 c 4.8 c
TS-14 (Desiree) 4.0 c 3.9 b
PS-9 (TS-10) 4.1 c 5.6 d
PS-6 (TS-10) 4.2 c 4.7 c
Desiree (S, NT) 9.7 d 10.5 f
Yana Puna (MR, NT) 0.12 a 0.49 a
TS-10 (S, NT) 10.8 e 14.2 g
Dunnett, P = 0.05
MR = Moderadamente resistente; S = Susceptible;
NT= Clon no transgenico.
23
'7
6oos~~~~~~~~~~~-----,
MEJORAMIENTO PARA OBTENER
RESISTENCIA A MARCHITEZ
BACTERIA NA
Breeding for Resistance to Bacterial Wilt
Sylvie Priou *
25
* Centro Internacional de la Papa (CIP). Estacion Central, La Molina. Lima - Peru
alto contenido de alcaloides), valor de comercializacion pobre y sus
tuberculos son infectados en estadfo de latencia por Ralstonia
so/anacearum (Rs).
El programa de mejoramiento para la resistencia a marchitez
bacteriana fue iniciado en 1972 en la Universidad de Wisconsin por
Rowe y Sequeira despues de la identificaci6n de la resistencia en los
clones colombianos de So/anum phureja (Sequeira y Rowe, 1969).
26
El Grupo III (serie 3805 del CIP) fue producida entre 1979 y
1980 para restaurar la resistencia a marchitez bacteriana y tiz6n tardfo
que se perdieron cuando las Grupos I y II fueron creados. La
autopolinizaci6n se convirti6 en un procedimiento imprescindible
debido a las restricciones de material que surge de la necesidad de
prevenir el uso de plantas infectadas con PS1V.
27
maduracion tardfa. Esos clones fueron enviados a las Filipinas de los
cuales se seleccionaron 27 (series BP) como resistentes a la marchitez
bacteriana con un nivel mas alto de resistencia que los clones Phureja
(entraron en el PTL del CIP). Sin embargo, estos clones eran
susceptibles al tiz6n tardfo.
28
CONSECUENCIAS DE LAS ESTRATEGIAS DE MEJORAMIENTO
29
resistencia constitutiva (e.g., no dependiente del media ambiente;
Wang et al., 1998).
30
La clasificacion de las biovares se basa en lo siguiente (Hayward,
1991):
1. Bv 1 = utilizacion de disacaridos negativa, oxidacion de alcoholes
negativa;
2. Bv 2 = utilizacion de disacaridos positiva, oxidacion de alcoholes
negativa;
3. Bv 3 = utilizacion de disacaridos positiva, oxidacion de alcoholes
positiva;
4. Bv 4 = utilizacion de disacaridos negativa, oxidacion de alcoholes
positiva;
5. Bv 5 = utilizacion de disacaridos positiva, oxidacion solo de
manitol.
31
las lfneas de la Division II son de las Americas. Al final, la lfneas de los
biovar 1 y 2 fueron separadas en dos grupos. Dentro del grupo del
biovar 2 se separaron aquellas lfneas que proceden del biovar 2A de
las tierras altas de los Andes de aquellas que proceden del biovar 2T
indfgenas de los valles de la tierras bajas en Peru y Brasil lo que es
consistente con la especializacion de la papa dentro del biovar 2A.
32
Actualmente se realizan las siguientes actividades en el CIP
relacionadas con la investigacion en resistencia a Marchitez
Bacteriana:
33
REFERENCIAS
Anguiz R.J. & Mendoza H.A. 1997. General and specific combining
abilities for resistance to bacterial wilt (Pseudomonas solanacearum
E.F. Smith) in PVX and PVY immune autotetraploid potatoes.
Fitopatologia 32(1): 71-80.
34
Laferriere L. T., Hegelson J. P. and Allen C. 1998. Solanum tuberosum
- S. commersonii somatic hybrids are resistant to brown rot caused by
Ralstonia so!anacearum. In Bacterial wilt disease: Molecular and
ecological aspects (Prior P., Allen C. and Elphinstone J. eds.) p. 316-
320. INRA edn, Springer Verlag, Berlin (Germany).
35
Van Der Wolf J. M., Bonants P. J. M., Smith J. J., Hagenaar M., Nijhuis
E., Van Beckhoven J. R. C. M., Saddler G. S., Trigalet A. and Feuillade
R. 1998. Genetic diversity of Ralstonia solanacearum race 3 in
Western Europe determined by AFLP, RC-PFGE and Rep-PCR. In
Bacteria/ wilt disease: molecular and ecological aspects (eds. Prior,
Ph., Allen, C. and Elphinstone, J.) p. 44-49. INRA edn, Springer
Verlag, Berlin (Germany).
36
Figura 1. Pedigrfs de varios clones BR derivados de S. phureja con resistencia
a marchitez bacteriana (Schmiediche, 1985).
Atzilmba 1 . n - i t a- - - - - - .
(1968) i
Kathadin(4x) x 316.3
~ (1969)
A -1 (4X)
I I (1970)
r
~
't
BR69.84
Molinerall (1978) Peru
Domoni (1983) Fiji
Poblaci6n 2x NCSU
x
Poblaci6n MBN
37
DESARROLLO DE ESTRATEGIAS DE
INGENIERIA GENETICA PARA LA
RESISTENCIA A BACTERIAS
FITOPATOGENICAS
Development of genetic engineering strategies
for resistance to phytopathogenic bacteria
Petra Porsch *
INTRODUCCION
40
Dos lfneas (DL 4 y DL 5) fueron finalmente cultivadas en campo
en dos localidades: en Quedlinburg en Alemania Central y en GroB
Lusewitz al norte de Alemania en los afios 1997 y 1998.
41
En una segunda fase nuestro proyecto, el promotor constitutivo
Ubi3 fue utilizado junta con otros promotores para obtener la
expresi6n temporal o localizada de lisozima: el promotor Mas de
Agrobacterium (inducido par heridas), y el promotor Wun de papa; el
promotor GapC4 de mafz (inducido par anaerobi6sis) y el promotor
Pat de papa especffico de tuberculos.
42
fueron realizadas en el MPI en Cologne en el grupo de Werner
Gieffers. Se midi6 el largo de las tubas germinativos de las hongos
luego de un periodo de incubacion de varias horas de conidias con
lisozima T4 • En el caso de Phytophthora nicotianae/ Fusarium
oxysporum y Botiytis cinerea las tubas germinativos fueron mas
cortos.
ANTICUERPOS
43
. ~
I
'\ 0
EXPERIMENTOS CON PAPAS
TRANSGENICAS EN INVERNADERO Y
CAMPO EN EL PERU
Experiments with transgenic potato plants at
field and greenhouses in Peru
Ali Golmirzaie *
INTRODUCCION
45
* Centro Internacional de la Papa (CIP). Estacion Central, La Molina. Lima - Peru
entre los anos 1986 y 1995, y el 40% en los dos ultimas anos. La
mayorfa de los ensayos se han llevado a cabo en los EEUU y Canada
(72%). Otros lugares en los que se han realizado ensayos son:
Europa, America Latina, Asia y Sudafrica.
Cuba 18 Portugal 5
46
REQUISITOS PARA El MANEJO DE PLANTAS TRANSGENICAS
EN PERU
47
Tabla 2. Plantas transgenicas producidas/evaluadas en el CIP entre 1994 y 1998.
Cultivo
Caracteristica Genes Pa ea Ca mote
G F G F
Gen marcador GUS x x
Intr6n GUS x x
Resistencia a
viroides
PSTVd antisense x
Resistencia a
bacterias
Atacina E x x
Cecropina B x x
Lisozima de pollo x x
Lisozima C2 x x
Sarcotoxina IA x x
Lisozima T4 x x
G: Invernadero
F: Campo
48
Para poder llevar a cabo experimentos en campo y/o invernadero se
deben tener en cuenta algunas reglas de seguridad basicas:
49
construcciones geneticas fueron preparadas por LSU y el CIP
realiz6 la transformaci6n genetica y las pruebas de resistencia a
nivel de invernadero. Durante las pruebas de resistencia a PSTV
se guardan todos los cuidados necesarios para evitar
contaminaci6n con este viroide. Resultado: 2 Ifneas tolerantes a
PSTV. Estas lfneas no pueden ser utilizadas porque se pueden
comportar como portadores sanos de este pat6geno.
50
TRABAJOS REALIZADOS PARA OBTENER RESISTENCIA A PTM
51
TRANSFORMACION DE PLANTAS DE PAPA
CON GENES DE LISOZIMA, ATACINA Y
CECROPINA PARA CONFERIR RESISTENCIA
A BACTERIAS
Potato Plants Transformation for Anti-Bacterial
Resistance with Lysozyme/ Attacin and Cecropine
Genes
RESUMEN
PRESENTACION
54
desarrollar pie negro en esquejes de plantas transgenicas de papas
tratadas con Erwinia spp. en concentraciones de 5.8xl04 y 5.8x10 6
unidades formadoras de colonias par mililitro de cultivo (ufc/ml).
55
En el caso de las llneas transgenicas de lisozima, cecropina y
atacina que presentaron alto nivel de resistencia a Erwinia,
encontramos generalmente una alta correlaci6n con el nivel de
expresi6n del transgen. En aquellos cases en los que esto no ocurri6,
el nivel de resistencia fue atribuido a las diferencias fisiol6gicas
propias de las plantas y tuberculos, que son dificiles de controlar
cuando se realiza el ensayo de resistencia.
56
HIBRIDIZACION ENTRE Y DENTRO DE
VARIEDADES CULTIVADAS Y
SILVESTRES DE PAPA
Hibridization within and between cultivated
and wild species
Bodo Trognitz *
58
mismo loci genetico (Bernacchi y Tanksley, 1997). El polen de
genotipos diploides autoincompatibles frecuentemente puede crecer
con exito dentro de los estilos de una planta autocompatible, mientras
que el cruce redproco usualmente no llega a su fin (Trognitz y
Schmiediche, 1993). Los estilos de papas tetraploides (5. tuberosum
ssp. tuberosum y ssp. andigena) frecuentemente no apoyan el
desarrollo de los tubes de polinizaci6n de sus parientes silvestres
(Tabla 2). Sin embargo, los experimentos en polinizaci6n han
demostrado que el polen de papa comun puede crecer hacia el ovario
a lo largo de los estilos de varies parientes tetraploides (Figura 1).
59
Tabla 2. Grado de crecimiento del tuba polfnico de un diploide silvestre y
polinizadores tetraploides de papa dentro de los estilos de cultivares de
papa.
Fem. Masculino
Acg abz amb bue ber Chq chm cmm Cnd lxs mcc
Cruz a 7* 12 3 9 2 15 3 10 2 15
148
Molinera 3 3 1 9 1 9 2 10 1 12 10
Perricholi 1 2 15 5 1 3 3 3
Fem. Masculino
oxc Phu pcs pur sol uru San mol lpt brd etb
Cruza 10 10 3 18 16 10 10 6 3 12 13
148
Molinera 10 2 16 9 10 9 3 2 2 13 13
Perricholi 16 3 9 9 12 2 9 11
Grados de crecimiento del tubo polfnico entre 1-3 son suficientes para la fertilizacion y el desarrollo de la
semilla, los valores entre 4-9 raramente resultan en fertilizacion y valore entre 9-18 previenen eficazmente el
contacto de los tubos polfnicos con el ovario, y asf excluyendo la posibilidad de polinizacion.
Para las abreviaciones de los nombres de la especies, ver Huaman y Ross (1985).
60
producci6n, en el area de distribuci6n de parientes del cultivo debe
ser considerada cuidadosamente bajo un sistema de estudio de las
riesgos caso a caso.
REFERENCIAS
Johnston SA, TPM den Nijs, SJ Peloquin, RE Hanneman Jr. 1980. The
significance of genie balance to endosperm development in
interspecific crosses. Theor Appl Gen 57: 5-9.
61
Figura 1. Incompatibilidad unilateral entre especies solanaceas tetraploides,
expresada por el grado de crecimiento del tubo polfnico dentro de un
estilo.
Yalaes:
rrtrn 10-13
1-3 irtibid6n &bil o ma, r:ffibilic:Ecl c:E fertilizadOn.
a::i 10-13 9-18 irtiad6n fu:rte en la p:irte SLµrior cl2I estigra,
sin r:ffialic:Ecl c:E fertilizad6n.
tt.qO 13
Especiesde .2>'.nmErtreouzaclas:
Jxt 13
:d sdisii
h.q2 11 oxc oxyGJrpun
rrtrn rmt:amn
i:x:;i cd craie
h.q tup:rrense
a1J 13 Jxt jB:uia (a 4x hbicb)
JXj {J3Uiju;µn
trr a1J arrig:na
trr lliErrELm
62
INVESTIGACION EN BIOSEGURIDAD EN
ALEMAN IA: PAPAS CON LISOZIMA T4 Y SUS
IMPLICACIONES EN LA COMUNIDAD
MICROBIANA COMO UN CASO DE ESTUDIO
Biosafety Researh in Germany: T,, Lysozyme Potatoes
and Their Implications on the Microbial Community
as a Case Study.
Andreas Mahn *
INTRODUCCION
PROYECTO:
"Efecto del cultivo de papas transgenicas (con lisozima T4 )
sobre Los microorganismos en el campo"
64
b) Federal Biological Research Centre for Agriculture and Forestry,
Braunschweig. Colaboradores: Cornelia Samalla, Holger Heuer.
•!• Efectos en las comunidades bacterianas de la riz6sfera
(incluyendo bacterias no cultivables)
c) Universidad de Oldenburg. Colaboradores: Wilfried Wackernagel,
Johann de Vries, Klaus Harms.
•!• Liberacion de la lisozima T4 y su actividad en el suelo
•!• Liberacion del AON vegetal y su persistencia en el suelo
•!• Transferencia genetica horizontal
d) University of Restock. Colaborador: Inge Broer
•!• Efectos en Rhizobia. Nodulaci6n y fijaci6n de nitr6geno en
leguminosas
e) University of Restock. Colaboradores: Gabriele Berg, Jana
Lottmann.
•!• Efectos de las bacterias beneficiosas y sus antagonistas.
65
•!• Se tomaron muestras bacterianas de la riz6sfera de plantas
transgenicas y controles sembrados en campo. Se aisl6 una
fracci6n bacteriana y se establecieron cultivos axenicos. Para
investigar aquellas bacterias que pudieron cultivarse, se aisl6
la fracci6n total del ADN bacteriano y los fragmentos 16S del
rADN fueron amplificados por PCR. El uso de DGGE
(Denaturating Gradient Gel Electrophoresis) evidenci6 un
"fingerprint" caracterfstico; el secuenciamiento posterior de las
bandas halladas no mostr6 diferencias entre las plantas
transgenicas y los controles, pero sf una disminuci6n de los
acti nom icetos.
66
En resumen, los datos obtenidos de los experimentos de campo
han permitido demostrar que no siempre estos resultados coinciden
con aquellos obtenidos bajo condiciones controladas de laboratorio.
67
ROL DEL SENASA EN LA SANIDAD
VEGETAL DEL PERU
SENASA: It's role on Peruvian
agriculture health
lQUE ES EL SENASA?
70
elaboro un Proyecto de Ley de Seguridad de la Biotecnologfa que ya
ha sido elevado al Congreso de la Republica para su revision.
71
4. Determinaci6n del Predio (Aprobaci6n o no aprobaci6n).
5. Emisi6n de los requisites fitosanitarios para la importaci6n.
6. Autarizaci6n par parte de SENASA de las estudias de campa y
distribuci6n de las cultivas.
7. El Camite de Biaseguridad informara peri6dicamente al SENASA
acerca de las avances y alternativas alcanzadas en la siembra de
estas cultivas.
72
COMO LIBERAR PLANTAS
TRANSGENICAS RESISTENTES A
PLAGAS EN CAMPO
How to Set Free in Held Transgenic Plants
Resistant to Pests
Jorge Benavides *
INTRODUCCION
PROYECTO COLABORATIVO
73
* Centro Internacional de la Papa (CIP). Estacion Central, La Molina. Lima - Peru
RESULTADOS
74
Tabla 1. Relacion de plantas transgenicas de papa par variedad.
Pais
Variedad Origen Atributos #
Lineas
transg.
Revoluci6n Peru Peru, Bolivia 27
Perricholi CIP Peru, Bolivia, Guatemala, LB, FT 2
Burundi, Etiopfa, Uganda
Cruza-148 Mexico Burundi, Ruanda, LB, BW 115
Uganda, Zaire
Achirana lnta Argentina China, Nepal, Kenia, PLRV, LB, H 83
Madagascar
Sangema Rwanda Burundi, Ruanda, Zaire LB 46
75
, C\
EXPERIMENTO EN CAMPO:
PAPAS RESISTENTES AL ATAQUE
DE BACTERIAS
Field Trial:
Potato plants resistant to bacterial attack
Luis Nopo *
OBJETIVO
77
* Centro Internacional de la Papa (CIP). Estacion Central, La Molina. Lima - Peru
Por otro lado, en invernadero se producen tuberculos de cada
una de las lfneas transgenicas y de los respectivos controles (plantas
no transformadas). Todos estos tuberculos son infectados
experimentalmente con cepas bacterianas aisladas en laboratorio,
para evaluar el nivel de resistencia al pat6geno, Erwinia carotovora o
Ralstonia solanacearum segun se evalue el dafio.
EXPERIMENTO EN CAMPO
78
no sobreviviran al ataque de Pseudomonas, Ralstonia o Erwinia. Como
norma de bioseguridad, cada dos dfas se realiza la eliminaci6n manual
y posterior autoclavado de todos las botones florales que pudieran
desarrollarse coma medida de protecci6n al germoplasma natural y
compatible que pudiera encontrarse cerca al area experimental, y
coma prevenci6n de bioseguridad hasta que se demuestre la ausencia
de riesgo al ecosistema.
79
Figura 1. Tuberculos de papa del genotipo Desiree, transformados con el gen
de lisozima c2. El control no transformado es Desiree CIP.
(Fuente: trabajo de tesis Big. Edda Echeandfa, UNALM)
80
Figura 3. Extracci6n de botones florales de las plantas transgenicas.
(Fuente: trabajo de tesis Big. Edda Echeandfa, UNALM)
81
Figura 5. Quema post-cosecha de desechos transgenicos en un campo
sembrado con papa en el anexo de La Libertad, Huancayo, a 3,800
msnm. Marzo 1998.
82
(' ,.)
f ~QL· .----~~~~~~~~~~~~~~~~~
\Q \_
EXPERIMENTO DE CAMPO:
MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD EN EL
CENTRO INTERNACIONAL DE LA PAPA
Field Experiment.·
Biosafety at the International Potato Center
Jorge Tenorio *
Experimentaci6n en el campo
83
* Centro Internacional de la Papa (CIP). Estacion Central, La Molina. Lima - Peru
2. Autorizacion especial para realizar experimentos fuera del
CIP
3. Documentacion en el campo
Ejemplos:
84
•!• Todos los campos deben identificarse con un panel pequefio que
indique el material de la planta y el nombre del investigador
principal.
•!• Las flares deben retirarse para evitar la polinizacion entre plantas
del mismo cultivo o de la parcela aledafia. Se debe impedir que el
polen llegue a las especies afines que se sepa esten presentes en
el ambiente, o a otros clones del mismo cultivo.
85
•!• El almacenamiento del material transgenico cosechado no
requiere de condiciones especificas; sin embargo, debe rotularse
segun el protocolo del CIP: variedad/ transgen/ N° de don.
•!• Esto debe incluir una rotaci6n de cultivos sistematica en todos las
lugares donde se haya sembrado material transgenico (es decir: la
papa transgenica, el perlodo de descanso, el camote transgenico ).
86
Referencias:
87
RECOMENDACIONES Y
CONCLUSION ES
89
enfermedades bacterianas. Aun asf, serfa deseable que se llevara
a cabo un experimento de flujo de polen hacia especies silvestres
en los lugares donde las hibridizaciones interespecfficas podrfan
ocurrir con el fin de establecer las normas de bioseguridad para
estas areas.
90
LISTA DE PARTICIPANTES
Participants
91
Ing. Agr. Fausto Buitron
Agrotec
Jose Marfa Eguren 156, Magdalena, Lima, Peru
Tel. +(51-1) 4616871
92
Dr. Marc Ghislain
Centro Internacional de la Papa (CIP)
Av. La Universidad 795, La Molina, Lima, Peru
Tel. +(51-1) 349-6017
Correo electronico: m.ghislain@cgiar.org
93
Big. Luis Nopo
Centro Internacional de la Papa (CIP)
Av. La Universidad 795, La Molina, Lima, Peru
Tel. +(51-1) 349-6017, anexo 2124
Correo electr6nico: l.nopo@cgiar.org
94
Unidad de Capacitaci6n, Centro Internacional de la Papa
95
Unidad de Capacitaci6n, Centro Internacional de la Papa
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95
-: las Memorias :
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. Peru .1998
Departamento de Capacitaci6n y
Comunicaciones, CIP
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CIP G4 C45.1