La Cadena Respiratoria y

Fosforilación Oxidativa
BIOQUÍMICA
NUTRICIONAL Dra. Mayra Logroño
 Importancia

 Organismos aerobios captan una proporción mucho mayor de la energía

libre disponible de los sustratos respiratorios que los organismos anaerobios.
 La mayor parte de este proceso tiene lugar dentro de las mitocondrias
(centrales de
energía) de la célula.
 La respiración está acoplada a la generación del intermediario de alta energía, ATP,
por medio de fosforilación oxidativa-
 Diversos fármacos (p. ej.,amobarbital) y venenos (p. ej., cianuro, monóxido de
carbono) inhiben la fosforilación oxidativa, por lo general con consecuencias
mortales.
 Se han señalado varios defectos hereditarios de las mitocondrias, que
afectan componentes de la cadena respiratoria y la fosforilación oxidativa
ESTRUCTURA DE LA MITOCONDRIA
Enzimas: Adenilil cinasa y ADN mt
creatina cinasa, PDHC ARN mt
Rx Ácido Cítrico
Rx B- oxidación Glicerol fosfato acil
transferasa
Acil – CoA sintasa
Enzimas:

Recepción de protones
provenientes del
Selectivamente permeable
bombeo de los
complejos enzimáticos

Enzimas
Acarreadoras de
Transportadores de electrones
membrana ( complejos I al IV)
LA CADENA
RESPIRATORIA
Energía
liberada
en oxidación • Disponible en
mitocondria como Eq.
HC, aa´ y reductores –H o e-
AG

Enzimas de CK • Reúne y
y β-oxidación transporta Eq,
junto Cadena reductores para
respiratoria Rx con O2 y
(mitocondria) formar H2O

• Atrapa la
Maquinaria Energía libre
de liberada Actúa como Bomba
Fosforilación como de Protones
Fosfato de
oxidaiva alta energía
 COMPLEJOS PROTEÍNICOS DE LA
MMI
e- fluyen Potencial Redox
(intervalo COMPLEJO I
Medida de actividad de
Redox) (NADH-Q C OMPLEJO III Q- los e-. Relacionado con
oxidorreductasa) citocromo c el
NAD+/NAD oxidorreductasa)
Transfieren pH y contenido de O 2.
H e- desde Pasa los
hacia NADH electrones hacia Análogo al pH (mide
O2/2H2O ha cia la el Citocromo c actividad de protones)
c oenzima Q
y potencial redox
COMPLEJO II (Ubiquinona) (mide actividad de
(succinato- Q e-)
reductasa) C OMPLEJO IV
(citocromo c
Pasan e- hacia Q en oxidasa)
sustancias con
Completa la cadena,
potencial redox más pasa e- hacia O2
positivos para que se reduzca
FAD / FADH2 (succinato) a H2O
FLUJO DE
ELECTRONES
 COMPLEJOS PROTEÍNICOS DE LA
MMI
Q y
Citocromo
c son
móviles

4 complejos
Flujo de e- por
complejos I, III
están Q se
yIV resulta en
elbombeo de
embebidos difunde con
rapidez
protones (matriz
– MMI -
en la dentro de
intermembran
espacio membrana la
membrana
a
mitocondrial
interna
Citocromo c
es una
proteína
soluble
FLAVOPROTEÍNAS Y PROTEÍNAS Fe - S

FLAVOPROTEÍNAS PROTEÍNAS Fe -
S
COMPLEJOS I Y II Contienen 1,COMPLEJOS
2 o 4 átomos I,
deII
FeYenlazados
III
Proteínas que contienen un
con Si o por medio de grupos cisteína-SH a la
nucleótido proteína,
derivado de la vitamina B2 o ambos.
FMN o FAD se reducen para Reacciones de transferencia
formar de 1 sólo e-
FMNH2 o FADH2 (transfieren 2e-)
Puede formar Semiquinona
(FMNH) al aceptar 1 e-
Oxidorreducción de Fe²a
Fe³
 Q ACEPTA e- MEDIANTE COMPLEJOS I
Y II
NADHQ oxidorreductasa o Complejo I (proteína grande, en forma de L,
de múltiples subunidades) cataliza la transferencia de e- desde NADH
hacia Q, junto con la transferencia de cuatro H+ a través de la
membrana :

Inicialmente los e- se transfieren desde NADH hacia FAD

después hacia una serie de centros FeS y por último hacia Q

Complejo II (succinatoQ reductasa), forma FADH2 en la conversión

de succinato en fumarato, y a continuación los electrones se pasan
por medio de varios centros FeS hacia Q

El glicerol3fosfato (de desintegración de triacilgliceroles o de la

glucólisis) y la acilCoA también pasan e- hacia Q mediante vías
diferentes en que participan flavoproteínas
Q ACEPTA e- MEDIANTE COMPLEJOS I Y
II
CICLO Q ACOPLA TRANSFERENCIA DE e-
T
ARANSPORTE DE PROTONES EN EL COMPLEJO
III
Proceso incluye
citocromos c1, bL y bH, Q existe en 3 Semiquinona se
y un Fe-S Rieske formas, la transitoriamente en
forma
( proteína hierro-azufre ciclo, el cual se
el
componente del complejo del Quinona oxidada, de 2QH2 a Q y
oxida
citocromo bc₁ y del complejo Quinol reducido 4H+ (espacio
libera
del citocromo b₆f descubierta y Semiquinona
y aislada por John S. Rieske ) intermembrana
)

Ciclo Q
Los e- se pasan desde
QH2 hacia el citocromo c
Cuando Q acarrea dos e-, Y reduce una Q
por medio del complejo los citocromos a carrean
III (Qcitocromo sólo 1. aQH2, y hace
que 2H+
c oxidorreductasa) La oxidación de un QH2
captados
sean desde
se a copla a la reducción
de 2 molé culas de la
citocromo c mediante el matriz
cic lo Q.
CICLO Q ACOPLA TRANSFERENCIA DE e-
TRANSPORTE DE PROTONES EN EL COMPLEJO
A
III
 REDUCCIÓN DE O2 A AGUA
MEDIO DEL COMPLEJO
POR
IV
▶ El complejo IV (citocromo c oxidasa) oxida el citocromo c reducido, con la
reducción concomitante de O2 hacia dos moléculas de agua:

▶ Esta transferencia de cuatro electrones desde el citocromo c hacia O2 comprende

dos grupos hem (a y a3) y Cu

▶ Por ca da par de electrones que

pasa por la ca dena desde NADH
o FADH2, el complejo IV
bombea 2H+ a través de la
membrana.
GRUPOS
HEMO
TRANSPORTE DE e- MEDIANTE LA
CADENA
RESPIRATORIA CREA UN GRADIENTE DE PROTÓN
QUE IMPULSA LA SÍNTESIS DE ATP

Teoría Fuerza motriz Bombas de

Quimiosmótic de protón protones
a • Diferencia de • Complejos
• Peter Mitchel potencial I, III y IV
1961 electroquímico • MMI impermeable
(negativa en hace que se
• 2 procesos
matriz) acumulen H+ en
acoplados mediante • Impulsa síntesis
Gradiente de espacio
protón de ATP intermembrana,
creando fuerza
motriz
TEORÍA
QUIMIOSMÓTICA
▶ Propuesta por Peter Mitchell en los años 60 (Premio Nobel
1978)
▶ Teoría Quimiosmótica: Un gradiente de concentración de
protones sirve como almacén de energía que dirige la
formación de ATP: la fuerza protón motriz
▶ La fuerza protón motriz(Δp) es la energía almacenada en el
gradiente de concentración de protones
▶ Los protones que son translocados al espacio
intermembrana mitocondrial por la cadena de transporte
electrónico regresan al interior de la matriz mitocondrial vía
ATP sintasa
TEORÍA
QUIMIOSMÓTICA
 TEORÍA
QUIMIOSMÓTICA
▶ El bombeo de protones a través de la cadena de transporte electrónico
crea una fuerza protón motriz suma de las contribuciones de un
potencial químico y un potencial eléctrico.
TEORÍA
QUIMIOSMÓTICA
 ATP SINTASA DE
MEMBRANA
▶ La fuerza motriz de
protón impulsa una
ATP sintasa ubicada
en la membrana que
en presencia de Pi +
ADP forma ATP.
▶ La ATP sintasa está
embebida en la
membrana interna,
junto con los
complejos de la
cadena respiratoria
 ATP SINTASA DE
MEMBRANA
▶ Varias subunidades de la proteína forman una estructura parecida a bola alrededor de
un eje conocido como F1, que se proyecta hacia la matriz y contiene el mecanismo de
fosforilación.
 ATP SINTASA DE
MEMBRANA
▶ El complejo enzimático consta de un
subcomplejo
F0 que es un disco de subunidades de proteína
“c”. Hay una subunidad γ fija en forma de un
F “eje doblado”.
▶ Los protones que pasan por el disco de
1 “c” hacen rotar el disco y la subunidad γ fija,
unidades
esta se adapta dentro del subcomplejo F1 de
tres subunidades α y tres subunidades β, que
están fijas a la membrana y no rotan.
▶ Las subunidades β ca ptan de manera
secuencial ADP y Pi para formar ATP, que se
expulsa a medida que la subunidad γ rotatoria
saca cada subunidad β a la vez y cambia su
F conformación.
▶ De este modo, se generan tres moléculas de
0 Canal de protones ATPpor cada
revolución.
F1: UNIDAD α y β alternadas
Formada por
CATALÍTICA 5 cadenas
anillo hexamérico
en
Miembros de la
polipeptÍdica
s: familia de
NTPasas
3 cadenas α
Ambas unen
3 cadenas β nucleótidos, solo
β participa en la
Cadenas γ, δ,
catálisis
ε
γ rompe la
γyε simetría del
hexámero
forman el α3β3 :
tallo C ada subunidad
β adopta
central de diferente
la conformación
estructura debido a su
interacción con
γ
F0: BOMBA DE
H+
▶ Segmento hidrofóbico que atraviesa la membrana interna
mitocondrial
▶ Contiene conducto de H+ del complejo
▶ Formado por: 10 -14 subunidades c
▶ 1 subunidad a en la periferia del anillo
 MECANISMO DE LA ATP
SINTASA
▶ Tener en cuenta:
1. La ATP sintasa en si no precisa del gradiente de protones para generar el ATP (comprobado por
experimentos de marcaje)
2. Por si sola la ATP sintasa no es capaz de liberar este ATP del centro catalítico una vez
formado.
3. SOLO cuando existe el flujo de protones se produce esa liberación

▶ El mecanismo que se propone tiene en cuenta la diferente interacción de la subunidad γ con las
diferentes subunidades β, de tal manera que dichas subunidades pueden estar en 3 conformaciones:
TENSA (T)
RELAJADA (L)
ABIERTA (O)
 CONFORMACIONES DE LA UNIDAD
β
▶ TENSA (T): cataliza la transformación
de ADP+Pi en ATP, une fuertemente
el ATP generado sin permitir su
liberación: demasiado apretado,
encajado en el centro activo
▶ RELAJADA (L): une ADP y Pi en
conformación lo suficientemente
apretada para que no se
desprenda
▶ ABIERTA (O): puede tanto unir como
desprender nucleótidos al ser la
 CONFORMACIONES DE LA UNIDAD
β
▶ La interconversión entre las tres formas puede ser dirigida mediante la rotación de
γ

Por cada rotación de 120ºde γ: liberación de ATP y unión de un nuevo

ADP+Pi
 SUBUNIDADE
S
▶ C ada subunidad c está formada
▶ La subunidad a por dos hélices transmembrana
parece contener con un residuo de aspártico en la
2 semiconductos segunda hélice situado en el
que permiten la centro de la membrana
entrada de
protones pero no
pueden
atravesar
completamente
la membrana
 MECANISMO DE ROTACIÓN DEL ANILLO
C
▶ C/ protón entra por el
semiconducto citosólico, sigue
una vuelta completa por el anillo
c y sale por el otro semiconducto
hacia la matriz
▶ Según este modelo: el número de
protones que se han de
transportar para generar una
molécula de ATP dependerá del
número de subunidades del
anillo c
▶ Si el anillo tiene 10
subunidades(ATP sintasa de
levadura): cada vuelta del anillo
generará 3 ATP y fluirán10
 LA CADENA RESPIRATORIA PROPORCIONA LA
MAYOR
PARTE DE LA ENERGÍA CAPTADA DURANTE
EL CATABOLISMO
▶ El ADP forma ATP, se denomina Moneda de energía – pasa energía libre para impulsar
procesos que requieren energía.
▶ Hay captación directa neta, según el siguiente detalle:
* 2 ATP en Rxs. Glucolíticas
* En el Ciclo de Krebs 2 ATP x mol de Glu – SuccinilCoA/Succinato
* c/mol de sustrato oxidado (I, III y IV) 2,5 mol ATP/0,5 mol O2 consumido
* c/mol de sustrato oxidado (II, III y IV) 1,5 mol ATP/
▶ Estas reacciones se conocen como fosforilación oxidativa en el ámbito de la cadena
respiratoria.
▶ C erca de 90% de los fosfatos de alta energía producidos a partir de la oxidación completa
de 1 mol de glucosa se obtiene mediante fosforilación oxidativa acoplada a la cadena
respiratoria
FORMACIÓN DE ATP EN EL
DE LA
CATABOLISMO
GLUCOSA
EL CONTROL RESPIRATORIO
UN APORTE CONSTANTE DE
ASEGURA
ATP
La disponibilidad de ADP controla el
índice de respiración de las
mitocondrias, se debe a que la
oxidación y fosforilación están
firmemente acopladas

La oxidación no puede proceder por

la cadena respiratoria sin
fosforilación concomitante de ADP
Cinco condiciones controlan el índice
de respiración en las mitocondrias.
ESTADOS DE CONTROL
RESPIRATORIO
 ESTADOS DE CONTROL
RESPIRATORIO
Al incrementar
Células en reposo Energía libre restante
respiración (ejercicio)
• Se encuentran • Estado 3 o estado 5, • La energía que no
la capacidad de la se capta como ATP
en estado 4 cadena respiratoria se libera como
• La queda saturada o la calor.
disponibilidad PO2 disminuye por • No se
de ADP controla debajo de la Km considera
la respiración para el hem a “desperdicio”,
• El transportador de permite el flujo
ADP/ATP se unidireccional
ATP ADP convierte en el continuo y
Trabajo limitante de la suministro
velocidad. constante de
ATP.
• Contribuye al
 MUCHOS VENENOS INHIBEN LA
RESPIRATORIA
CADENA
Informa
ción de
Cadena
respira- Uso de
inhibidores
toria

Mecanismo de
acción de Invers
a
venenos

Clasifi- Inh. C adena

ca ción respiratoria
Inh. Fosforilación
Desacopladores de
Fosforilación
INHIBIDORES DE LA CADENA
RESPIRATORIA
Antimicina A y H2S, monóxido de
Dimercaprol carbono y cianuro
inhiben el
inhiben la Complejo IV
cadena Suspenden
respiratoria en por co mpleto
el Complejo III la respiración

Inhiben
transporte de
El malonato es
e-: Bloquea un inhibidor
transferencia de competitivo
FeS hacia Q Produce del Complejo
(Complejo I) inhibición II
en
Barbitúricos Complejos
INHIBIDORE
S
INHIBIDORES DE LA
FOSFORILACIÓN OXIDATIVA

OLIGOMICINA

Bloquea el flujo de
protones por medio
de la ATP sintasa

ATRACTILÓSIDO
Inhibe el transportador
de ADP hacia dentro de
la mitocondria, y de
ATP hacia afuera.
 LOS
DESACOPLADORES
DESACOPLADORES
DESACOPLADORES CÓMO
FRECUENTES
ACTÚAN
Disocian la
oxidación en Disipan el
la cadena 2,4-dinitrofenol gradiente de
respiratoria de protones (inhibe
producción de
la fosforilació ATP)
n
Son tóxicos in Termogenina se Moléculas
y la respiración encuentra en el hidrofóbic as co n
vivo tejido adiposo un protón
torna
se pardo (genera calor disociable,
(índice no
incontrolada co rporal para RN y pueden atravesar
por [ADP o
limitado en la hibernación) la MMI
Pi]) transportando
protones
 LOS
DESACOPLADORES
▶ En presencia de
estas moléculas
el transporte de
e- se realiza de
manera normal.
▶ Se consume
NADH, FADH2, y
O2 pero no se
produce ATP.
▶ Los
desacopladores
disipan la fuerza
protón motriz.
▶ La energía se
libera
LOS
DESACOPLADORES
LA TEORÍA QUIMIOSMÓTICA PUEDE EXPLICAR EL
CONTROL
RESPIRATORIO Y LA ACCIÓN DE
DESACOPLADORES

▶ Los desacopladores son anfipáticos y aumentan la permeabilidad de la MMI

lipoide a protones, lo que reduce el potencial electroquímico y suscita
cortocircuito de la ATP sintasa, de este modo, la OXIDACIÓN PUEDE PROCEDER
SIN FOSFORILACIÓN.
LA IMPERMEABILIDAD RELATIVA DE LA
MMI
REQUIERE TRANSPORTADORES DE INTERCAMBIO
Sistemas de difusión de intercambio
• Proteínas transportadoras presentes en la membrana para intercambio
de aniones contra iones OH– y cationes contra iones H+
• Se necesitan para captación y salida de metabolitos ionizados,
mientras preservan los equilibrios eléctrico y osmótico.

Membrana Mitocondrial Interna

• Permeable a moléculas pequeñas no cargadas, como O2, H2O, CO2, NH3 y
ácidos monocarboxílicos (no disociada y liposoluble)
• Ácidos grasos de cadena larga se transportan a mitocondrias por medio de
Carnitina
• Acarreador especial para el Piruvato que utiliza el gradiente de protones
(simporte)

Aniones dicarboxilato, tricarboxilato y los aminoácidos

• Sistemas transportadores o acarreadores específicos para facilitar su paso a través
de la membrana
LA IMPERMEABILIDAD RELATIVA DE LA
REQUIERE TRANSPORTADORES DE
MMI
INTERCAMBIO
Transportador Dicarboxilato
• La captación neta de malato por el transportador dicarboxilato necesita
Pi
• Provoca intercambio en la dirección opuesta.

Transportador Tricarboxilato
• La captación neta de citrato, isocitrato o cisaconitato requiere malato a
cambio
• El transporte de α-cetoglutarato también exige un intercambio con malato

Transportador de nucleótidos
• El transportador de nucleótido adenina permite el intercambio de ATP y ADP, no de AMP.
• Permite que el ATP salga de las mitocondrias a los sitios de utilización extramitocondrial y
que
regrese de ADP para la producción de ATP dentro de la mitocondria
SISTEMAS MITOCONDRIALESDE
TRANSPORTE
LANZADERAS DE ELECTRONES DEL
NADH
LA OXIDACIÓN DE NADH EXTRAMITOCONDRIAL ESTÁ
MEDIADA POR TRANSBORDADORES DE SUSTRATO

NADH no puede penetrar en La transferencia de equivalentes

la membrana mitocondrial,
sino que se produce de
manera continua en el citosol
por la 3fosfogliceraldehído
deshidrogenasa
reductores a través de la
membrana mitocondrial requiere
pares de sustrato, enlazados por
deshidrogenasas idóneas a cada
lado de la membrana mitocondrial.

Condiciones aeróbicas, el
NADH extramitocondrial no
se acumula, y se cree que la
cadena respiratoria lo oxida
en las mitocondrias.
LANZADERA GLICEROL-3-
FOSFATO
LANZADERA MALATO-
ASPARTATO
 LA OXIDACIÓN DE NADH
ESTÁ MEDIADA POR
EXTRAMITOCONDRIAL
TRANSBORDADORES
▶ El transbordador malato es de
utilidad más universal. La
complejidad de este sistema
se debe a la
impermeabilidad de la
membrana mitocondrial al
oxaloacetato, que debe
reaccionar con el glutamato
para formar aspartato y α-
cetoglutarato mediante
transaminación antes de
transporte a través de la
membrana mitocondrial y
reconstitución hacia
oxaloacetato en el citosol.
Transporte ATP/ADP
ATP/ADP
TRANSLOCASA
LOS IONÓFOROS PERMITEN QUE
ESPECÍFICOS
CATIONES PENETREN EN LAS
MEMBRANAS
▶ Los ionóforos son moléculas lipofílicas que forman complejos con
cationes específicos y facilitan su transporte a través de membranas
biológicas.
▶ Ejm: Valinomicina (K+). En realidad los desacopladores clásicos como el
dinitrofenol, son ionóforos de protón.
 EL TRANSBORDADOR DE CREATINA FOSFATO FACILITA
EL
TRANSPORTE DE FOSFATO DE ALTA ENERGÍA
DESDE MITOCONDRIAS
▶ Incrementa las funciones de la creatina fosfato
como un amortiguador de energía al actuar como
un sistema dinámico para la transferencia de
fosfato de alta energía desde mitocondrias en
tejidos activos como el corazón y el músculo
estriado.
▶ Una isoenzima de la creatina cinasa (CKm) se
encuentra en el espacio intermembrana
mitocondrial, que cataliza la transferencia de
fosfato de alta energía hacia creatina desde ATP
que surge a partir del transportador de nucleótido
adenina.
▶ A su vez, la creatina fosfato se transporta hacia el
citosol por medio de poros de proteína en la
membrana mitocondrial externa, y queda
 ASPECTOS CLÍNICOS

▶ La enfermedad conocida como miopatía

mitocondrial mortal infantil con disfunción renal
comprende decremento grave o falta de casi
todas las oxidorreductasas de la cadena
respiratoria.
▶ En el síndrome MELAS (del inglés mitochondrial
encephalopathy, lactic acidosis and stroke,
encefalopatía, acidosis láctic a y apoplejía
mitocondriales) es una enfermedad hereditaria
debida a deficiencia de NADHQ oxidorreductasa
(complejo I) o citocromo oxidasa (complejo
IV). Se produce por una mutación del DNA
mitocondrial, y se cree que está involucrada en
la enfermedad de Alzheimer y la diabetes
mellitus.
▶ Diversos fármacos y venenos actúan por
ACTIVIDAD DE EVALUACIÓN
 Describir la estructura de doble membrana de las mitocondrias, e indicar la ubicación de
diversas enzimas
 Describir los cuatro complejos proteínicos involucrados en la transferencia de
electrones por la cadena respiratoria, y explicar los papeles de las flavoproteínas, las
proteínas hierro azufre y la coenzima Q.
 Escribir las reacciones netas de cada complejo.
 Explique cómo se forma el agua a partir de los sustratos energéticos
 Describa la función de lanzaderas glicerol 3 fosfato y malato aspartato.
 Explicar el transporte de electrones por la cadena respiratoria y la generación de
gradientes de protón a través de la membrana mitocondrial interna.
 Acción de la ATP SINTASA
 Indicar ejemplos de venenos comunes que bloquean la respiración o la fosforilación
oxidativa, e identificar su sitio de acción.
 Explicar la importancia biomédica y nutricional de la fosforilación oxidativa.