UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

DEPARTAMENTO ACADMICO DE QUMICA BIOLGICA
Y FISIOLOGA ANIMAL

BIOQUMICA EXPERIMENTAL

T7. Transporte electrnico (cadena respiratoria): Componentes,

inhibidores. Sntesis de ATP (fosforilacin oxidativa): Transporte de
electrones y la fosforilacin estn acoplados. ATPsintasa. Translocasa
de ATP/ADP. Desacoplantes, control respiratorio.

Blgo. Mblgo. Cinthya Lissett Aspajo Villalaz

Fosforilacin oxidativa y
Transporte de electrones
Una persona de 70 Kg requiere aprox.
2000Kcal para realizar act. diarias.

Es decir requiere 83 Kg de ATP. Se

cuenta con 250g: Solucin: Reciclaje
de ADP a ATP. El ATP se recicla
aprox. 300 veces por da.

Este proceso tiene lugar por medio de

la fosforilacin oxidativa.
La fosforilacin oxidativa es el
proceso mediante el cual se
forma ATP por medio de la
transferencia de electrones
desde el NADH FADH2
hasta el O2 por medio de una
serie de transportadores
elctricos. Tiene lugar en la
mitocondria.

Fuente ms importante de
ATP en los organismos
aerobios
 La fosforilacin oxidativa constituye la culminacin de una serie de
transformaciones energticas que, en conjunto, reciben el nombre de
Respiracin.

En la fosforilacin oxidativa

fuerza se convierte fuerza se convierte potencial de

electrn- protn- transferencia de
motriz motriz fosforilo

La fosforilacin oxidativa muestra de manera

fehaciente que en los sistemas biolgicos, los
gradientes de protones constituyen una forma
intercambiable de energa libre.
 I: NADH-Q Oxidorreductasa
La cadena respiratoria II: Succinato-Q Reductasa
consiste de 4 complejos
multienzimticos: III: Q-citocromo c Oxidorreductasa

IV: Citocromo c Oxidasa

Estos complejos enzimticos transmembrana contienen mltiples centros de

oxidacin-reduccin: Quinonas, flavinas, complejos FE-S, hemos y Cu

Cit. C
La Fosforilacin Oxidativa en eucariotas tiene lugar en
las mitocondrias

Las mitoc. contienen el ensamblaje

respiratorio, enzimas del ciclo del
c. ctrico y enzimas de la
oxidacin de los c. grasos.

Delimitada por una doble

membrana: externa e interna
(amplia y plegada: crestas)

Dos compartimientos: matriz y

espacio intermembrana.
 La Fosforilacin Oxidativa en eucariotas tiene lugar en
las mitocondrias

Memb. Externa: permeable a iones y

molc. pequeas: muchas copias de
Porinas mitocondriales (VDAC).
PO4, Cl-, aniones orgnicos,
nucletidos de Adenina.

Memb. Interna: Impermeable a casi

todos los iones y molculas polares.
Se necesita transportadores.
Dos caras: caras N y P)

Las mitocondrias son el resultado de una endosimbiosis:

Las clulas que tienen mitocondrias dependen de estos orgnulos para realizar la
fosforilacin oxidativa y, a cambio, la existencia misma de la mitocondria
dependde de la clula.
 La Fosforilacin Oxidativa depende de la transferencia
de electrones

En la fosforilacin oxidativa el potencial de transferencia de electrones del

NADH FADH2 se convierte en el potencial de transferencia de grupos
fosforilo del ATP.

El potencial de transferencia electrnica de un e- se mide como potencial redox,

potencial de reduccin o potencial de xido-reduccin (Eo).

Si Eo es -: Forma reducida tiene < afinidad por los e- que H2.

Si Eo es +: Forma reducida tiene > afinidad por los e- que H2.

El flujo de electrones a travs de los componentes de la cadena de

transporte electrnico se realiza en orden de potencial de reduccin
creciente.
 NADH (agente reductor fuerte), Eo = -0.32 volts)

O2 (aceptor final de los electrones agente oxidante fuerte,) Eo = +0.82 volts)

Una diferencia de potencial de 1.14V entre el NADH y el O2 impulsa el transporte de e-

a travs de la cadena respiratoria y permite la formacin de un gradiente de protones.
Los grupos prostticos de cada uno de los
componentes tienen diferentes potenciales redox y
pueden intervenir en diferentes pasos en la cadena
de transporte de electrones.
La cadena respiratoria est formada por 4 complejos: 3
bombas de protones y una conexin fsica con el CAC
Los e- se trasladan de un complejo a otro a travs de transportadores
elctricos especiales: Coenzima Q o Ubiquinona (quinona hidrofbica) y
citocromo c (protena pequea e hidrosoluble).
 Ubiquinona (coenzima Q)
Derivado quinona con larga cadena isoprenoide, el numero de unidades de isopreno
depende de la especie.

Puede presentar tres estados de

oxidacin

Sus reacciones de transferencia de

electrones estn acopladas a la unin o
liberacin de protones: propiedad clave a
la hora de transportar protones a travs
de la membrana
 Los electrones de elevado potencial del NADH entran a la cadena respiratoria a
travs de este complejo.

Estructura en forma de L:

- Brazo horizontal anclado en la

membrana interna

- Brazo vertical en la matriz

mitocondrial
 Flavina Mononucletido (FMN)
Presente en las flavoproteinas

Al igual que la ubiquinona, sus reacciones de transferencia de electrones estn

acopladas a la unin o liberacin de protones. Tambin al poder existir en forma de
semiquinona, puede transportar tanto un electrn como un par.
 Centros Fe-S
Fe est presente no en forma de hemo (como en los citocromos) sino en asociacin
con tomos de azufre inorgnico o con tomos de azufre de residuos de Cys de la
protena transportadora, o con los dos al mismo tiempo

Se pueden presentar en tres tipos

[Fe-S] [2Fe-2S] [4Fe-4S]

El Fe de estos complejos alterna entre los estados oxidado Fe3+ y reducido Fe2+

Suelen intervenir en reacciones redox sin aceptar o liberar protones.

La Succinato deshidrogenasa, enzima del ciclo del cido ctrico, forma parte del
complejo y genera FADH2 a partir de FAD por la oxidacin del succinato a
fumarato.

No se produce transporte de H+ hacia el citoplasma a diferencia del complejo I.

 Segunda bomba de H+ de la cadena de transporte.

-citocromo b: contiene 2 bL (baja afinidad)

grupos hemo tipo b
bH (alta afinidad)
En su estructura
podemos encontrar -citocromo c1: 1 grupo
2 citocromos hemo tipo c

-Proteina hierro-azufre:
2Fe-2S (Centro de Rieske)

Mecanismo: CICLO-Q : Canaliza los e- desde un transportador de 2 e- (QH2)

a uno de un e- (Citocromo c) y bombea H+.
 CICLO-Q

Los electrones pasan al citocromo C, protena soluble presente en el espacio

intermembranal, que es una protena hidrosoluble que se asocia mediante interacciones
electrostticas con la parte exterior de la membrana interna de la mitocondria.
Despus de aceptar un electrn procedente del complejo III, el citocromo C difunde hacia
el complejo IV.
 Grupos Hemo

Presentes en los citocromos. Los fuertes colores caractersticos de los citocromos se

deben a la presencia del grupo prosttico hemo.

Grupo prosttico del hemo (cit. B, c1 y c): Ferroproteina IX

Su tomo de hierro oscila entre

Fe3+ y Fe2+.
2 grupos hemo de tipo A: hemo a y hemo a3

Centro A: 2 iones de Cu
3 iones de Cu distribuidos en
dos centros de Cu: A y B .
Centro B: un in Cu.

CuA / CuA aceptor de los electrones del citocromo c reducido.

hemo a aceptor de los electrones de CuA / CuA .

Hemo a3/ CuB forman parte del centro activo donde O2 se reduce a H2O.
 Radicales Libres
O2: excelente aceptor de electrones

RIESGO: produccin de intermediarios anin superxido (O2-) y anin perxido

(O22-) y radical hidroxilo OH , tambin llamados ROS (Reactive oxygen species)
dainos para una serie de componentes celulares.

SOLUCIN: en la cadena de transporte electrnico se opta por unir estos intermediarios

fuertemente hasta su completa conversin en agua (complejo IV)

Sin embargo pueden producirse prdidas, la retencin no es eficiente al 100%:

necesidad de otras estrategias defensivas:

-Superoxido dismutasa (SOD) neutraliza el anin superxido dismutndolo:

2 O2 + 2H+ H2O2 + O2

-Catalasa dismuta el peroxido producido por SOD y otros enzimas

2 H2O2 + 2H+ H2O+ O2

Un gradiente de protones impulsa la sntesis de ATP

El enzima encargado de llevar a cabo la sntesis de ATP: ATP sintasa o

complejo V (ubicada en la membrana interna mitocondrial).

Se crea que para la sntesis de ATP, se formaba un compuesto

intermediario que transfera los fosforilos para la sntesis.

Peter Mitchell en los aos 60 (Premio Nobel 1978): propuso la teora

Quimiosmtica.
 Teora Quimiosmtica
El transporte de e- y la sntesis de ATP se acoplan mediante un gradiente de
H+ a travs de la membrana interna mitocondrial.

Un gradiente de concentracin de protones sirve como almacn de energa que

dirige la formacin de ATP: la fuerza protn-motriz

La fuerza protn-motriz (p) es la energa

almacenada en el gradiente de
concentracin de protones (distribucin
desigual).

Los protones que son translocados al

espacio intermembrana por la cadena de
transporte electrnico, regresan al interior
de la matriz mitocondrial va ATP sintasa.
El bombeo de protones a travs de la cadena de transporte electrnico crea una
fuerza protn-motriz suma de las contribuciones de un gradiente qumico (gradiente
de pH) y un gradiente de carga (potencial de membrana).
Teora quimiosmtica: el gradiente de protones generado
impulsa la sntesis de ATP mediante la ATP sintasa

La cadena respiratoria y la ATP sintasa son dos sistemas bioqumicos distintos,

conectados nicamente por una fuerza protn-motriz.
 ATP sintasa

F1 Unidad cataltica

F0 Unidad transportadora de H+
F1: unidad cataltica

Formada por 5 3 cadenas

cadenas 3 cadenas
polipeptidicas:
cadenas y

y alternadas en anillo hexmerico

-Miembros de la familia de NTPasas con
bucle P
-Ambas unen nucletidos, solo participa
en la catlisis
y forman el tallo central de la
estructura.

rompe la simetria del hexmero 33 : cada subunidad

adopta diferente conformacin debido a su interaccion con
 F0
Segmento hidrofbico que atraviesa la membrana interna mitocondrial
Contiene conducto de H+ del complejo

Formado Anillo: 10-14 subunidades c (incrustadas en la memb.)

por 1 subunidad a en la periferia del anillo
F1 y F0 estn conectadas por el tallo y por una columna externa formada
por b2 y

Podemos considerar que el enzima

esta formado por dos componentes
funcionales:

UNIDAD MOVIL (rotor): anillo c y

tallo

UNIDAD ESTACIONARIA
(Esttica): resto de la molcula
 Mecanismo de la ATP sintasa
La ATP sintasa en si no necesita del gradiente de protones para generar
el ATP PERO por si sola la ATP sintasa no es capaz de liberar este ATP
del centro cataltico una vez formado.

Es decir el flujo de protones favorece la liberacin del ATP de la sintasa,

ms NO su formacin (mecanismo de cambio de unin).

El mecanismo de cambio de unin que se propone tiene en cuenta la

diferente interaccin de la subunidad con las diferentes subunidades ,
de tal manera que dichas subunidades pueden estar en tres
conformaciones.
 Conformaciones de la Subunidad
TENSA (T): cataliza la transformacin de
ADP+Pi en ATP, une fuertemente el ATP
generado sin permitir su liberacin:
demasiado apretado, encajado en el
centro activo.

RELAJADA (L): une ADP y Pi en

conformacin lo suficientemente apretada
para que no se desprenda.

ABIERTA (O): puede tanto unir como

desprender nucletidos al ser la
conformacin ms abierta.
La interconversin entre las tres formas puede ser dirigida mediante
la rotacin de en sentido antihorario.

Por cada rotacin de 120 de : liberacin de ATP y unin de un

nuevo ADP+Pi
La rotacin de es
producida por el paso de
protones a travs de la
subunidad a, que produce
una rotacin del anillo de
subunidades c.
 La subunidad a parece Cada subunidad c esta
contener dos semiconductos formada por dos hlices
que permiten la entrada de transmembrana con un
protones pero no pueden residuo de c. asprtico en la
atravesar completamente la segunda hlice situado en el
membrana. centro de la membrana.
 Mecanismo de rotacin del anillo c
Se supone que los dos residuos Asp en contacto con cada semiconducto han
cedido sus protones pasando a ser aspartato cargado negativamente.
Mecanismo de rotacin del anillo c

Cada protn entra por el

semiconducto citoslico, sigue
una vuelta completa por el
anillo c y sale por el otro
semiconducto hacia la matriz

Segn este modelo: el numero

de protones que se han de
transportar para generar una
molcula de ATP depender
del nmero de subunidades
del anillo c.
 Rendimiento neto de la fosforilacin oxidativa
ATP sintasa requiere la translocacin de 4H+ por cada ATP que produce

El transporte al citoplasma de Pi, ADP and ATP requiere 1 H+

Rendimiento neto: 4 H+ transportados por cada ATP sintetizado para:
NADH: 10 H+ bombeados.
(10 H+/ 4 H+) = 2.5 ATP
FADH2: 6 H+ bombeados
(6 H+/ 4 H+) = 1.5 ATP
 Lanzaderas de electrones del NADH
La membrana interna mitocondrial es impermeable a NADH y NAD+ citoplasmtico,
pero sus electrones deben entrar a la matriz mitocondrial para ser transferidos a la
cadena de transporte electrnico. La clula ha diseado sistemas lanzadera donde se
realiza la transferencia de los electrones del NADH y no de la propia molcula.

Lanzadera
glicerol-3-fosfato

Los electrones son transferidos a

glicerol-3-P, que los transfiere
posteriormente al FAD
Lanzadera glicerol-3-fosfato

Con esta lanzadera el rendimiento

energtico del NADH
citoplasmtico es menor ya que el
aceptor final de los electrones es
FAD: el resultado es un menor
bombeo de protones.

La lanzadera glicerol-3-P es muy

abundante en msculo, lo que
permite realizar la fosforilacin
oxidativa a velocidad muy alta.
 Lanzaderas de electrones del NADH

Lanzadera malato-aspartato

Se usa el malato como transportador de los electrones a travs de la

membrana.
Lanzadera malato-aspartato

Lanzadera ms
compleja, pero ms
eficiente
energticamente, el
resultado final es
NADH en la matriz
mitocondrial

Sistema
especialmente activo
en hgado y corazn.
Transporte ATP/ADP

El ATP que se genera en el

proceso de la fosforilacin
oxidativa esta en el lado de
la matriz mitocondrial.
No puede atravesar la
membrana interna
mitocondrial, al igual que
ADP y la molcula de fosfato
inorganico (Pi). Es necesario
un sistema de transporte de
membrana:

ADP/ATP translocasa:
realiza el intercambio
antiporte entre ADP
citoslico y ATP de la matriz
mitocondrial.
ATP/ADP translocasa: Mecanismo de accin
La velocidad de la fosforilacin oxidativa est determinada
por las necesidades de ATP
Transporte electrnico y sntesis de ATP se encuentran ntimamente ligados: los
electrones no suelen desplazarse a lo largo de la cadena hasta el O2 a menos que al
mismo tiempo ADP se fosforile para formar ATP.
El factor ms importante a la hora de determinar la velocidad de la fosforilacin
oxidativa es el nivel de ADP.

La velocidad de consumo de oxgeno por las

mitocondrias AUMENTA cuando se aade ADP y
recupera su valor inicial cuando este ADP
aadido se convierte en ATP: CONTROL
RESPIRATORIO o control por medio del aceptor.

Significado fisiolgico sencillo: el nivel de ADP aumenta cuando se consume ATP.

Solo se realizar transporte electrnico hacia el O2 cuando se necesite sintetizar ATP .

En definitiva, la carga energtica, la relacin ATP/ADP es la que controla la produccin

de energa por parte de la clula.
Inhibidores de la fosforilacin oxidativa
Inhibidores de la fosforilacin oxidativa
GRACIAS POR
SU ATENCIN