CADENA RESPIRATORIA Y FOSFORILACIÓN OXIDATIVA

QUE ES LA FOSFORILACIÓN OXIDATIVA

Lo primero a tener en cuanta es que el NADH y el FADH2 formados en los procesos de degradación,
contienen electrones de alta energía. La fosforilación oxidativa es un proceso mediante el cual estas
moléculas anteriormente nombradas se oxidan, transfiriendo sus electrones al oxígeno. La energía
resultante se utiliza para la síntesis de ATP. Todos los pasos oxidativos en la degradación de glúcidos,
grasas y aminoácidos convergen en esta etapa final de la respiración celular, en la que la energía de la
oxidación impulsa la síntesis de ATP.

1 FADH2 CICLO DE KREBS

2 NADH GLUCÓLISIS
3 NADH CICLO DE KREBS
1 NADH PDH

QUE ES LA CADENA RESPIRATORIA

Existe un flojo de electrones desde el NADH y FADH2 al oxigeno mediante una serie de transportadores
insertados en la membrana interna. Al conjunto de reacciones se le denomina Cadena Respiratoria o
cadena de transporte de electrones.

Esta permite:

- Recuperación de las coenzimas en su forma oxidada

- Conducción de los electrones de las coenzimas reducidos a su aceptor final, el oxigeno

Donde ocurre:

- Este proceso se da en la membrana mitocondrial interna (MMI). Todos los componentes de esta
vía se encuentran insertados o sobre la bicapa lipídica de la MMI.

Hay 3 fases en la respiración celular:

1) Oxidación de glucosa, AG y algunos AA para producir acetil-CoA

2) Los grupos acetilo se incorporan al ciclo de Krebs, se oxidan a dióxido de carbono y la energía
liberada se conserva en forma de ATP y en las coenzimas reducidas NADH y FADH2.
3) Los electrones transportados por el NADH y el FADH2 se transfieren a la cadena de transporte de
electrones para formar H2O y ATP en la fosforilación oxidativa.

CADENA DE TRANSPORTE DE ELECTRONES

Los electrones pasan por la MMI a través de una serie de trasportadores de membrana, los cuales
pueden transportar electrones en forma de átomos de hidrogeno o como electrones únicamente. Este
transporte es la transferencia desde componentes con menor potencial de reducción a componentes
con mayor potencial de reducción. El de mayor potencial es el oxígeno, por eso es el aceptor final. Por
otro lado, el NADH es el de menor potencial, es el agente reductor fuerte. Los transportadores de
electrones están organizados en complejos multi enzimáticos.
 Complejo 1: NADH deshidrogenasa

Complejo 2: Succinato deshidrogenasa

Complejo 3: Q-citocromo con oxido reductasa

Complejo 4: Citocromo con oxidasa

QUIENES PUEDEN ACEPTAR ELECTRONES

UBIQUINONA (Q) CITOCROMOS CENTROS COFACTORES

HIERRO-AZUFRE
Es el único componente de la cadena Son transportadores Se generan por la NADH+/NADP+:
respiratoria de naturaleza lipídica. de electrones. Son coordinación de coenzimas solubles
Molécula pequeña, liposoluble, esto le proteínas con grupos átomos de hierro de enzimas
permite moverse con velocidad dentro de prostéticos hemo y azufre de las deshidrogenasas.
la MMI. Transporta electrones captando capaces de captar y cisteínas de las FMN/FAD: grupos
un electrón y un protón. Presenta ceder electrones. Hay proteínas. prostéticos unidos
diferentes formas: 5 tipos: covalentemente a
- Ubiquinona (Q): también llamada - Citocromo a flavoproteína.
coenzima Q, es la forma oxidada - Citocromo a3
- Radical semiquinona (QH): capta - Citocromo b
un electrón y un protón - Citocromo c1
- Ubiquinol (QH2): es la forma - Citocromo c
reducida de la ubiquinona.

La transferencia de electrones implica la liberación de energía libre. Esta energía liberada permitirá
generar un trabajo de transporte; se bombean protones fuera de la MMI para generar un gradiente
electroquímico. Este gradiente aportará la energía necesaria para la síntesis de ATP.
NAD+/NADH

Actúan como proteínas deshidrogenasas. Eliminan dos protones (H+) de los sustratos, uno genera NADH
y el otro se libera al medio.

Entregan sus electrones a la cadena respiratoria a nivel del complejo 1.

FALVOPROTEÍNAS, FAD/FADH2 – FMN/FMNH2

Contienen un nucleotrido de falvina (FMN o FAD) fuertemente unido. El nucelotido e flavina oxidado
puede aceotar un electron (forma de semiquinona) o 2 electrones (generando FADH2 o FMNH2). La
transferencia electronica se da gracias a que la flavoproteina tiene un potencial de reduccion estandar
superior al del compuesto oxidado.

Potencial de reduccion= medida cuentitativa de la tendencia relativa de una especia quimica

determinada para aceptar electrones es una reaccion oxidacion-reduccion.

UBIQUINONAS

Liposolubles, pueden aceptrar un electron o dos electrones, formando una semiquinona estable y se
puede mover a traves de la membrana plasmatica. Puede difundir y llevar libremente los electrones de
complejo a complejo, entre los complejos que estan menos moviles.

CITOCROMOS

Tienen un grupo hemo unido fuertementeque acepta un electron, el atomo de hierro es el trasnportador
de electrones.

El citocromo c es pequeño y solo puede aceptar un electron.

Los citocromos a y b son proteinas integrales de membrana.

CENTROS DE HIERRO AZUFRE

Proteinas con residuos que coordinan los atomos de hierro, aceptan generalmente un electrón.
Transiferen electrones mientras se oxida o se reduce el atomo de hierro.
COMPLEJO 1, NADH DESHIDROGENASA

Oxida NADH y reduce a la ubiquinona (Q). El NADH oxidado a NAD+ podrá volver al ciclo de Krebs a
colectar protones y electrones. Contiene como grupo prostético FMN y 7 centros Fe-S que actúan como
transportadores de electrones

En este primer complejo se genera un primer punto de bombeo de protones al espacio intermembrana
(espacio positivo ya que se genera un gradiente que será menos negativo que el y mas negativo en la
matriz).

El NADH transfiere 2 electrones y los entrega a una mol de FMN, regenerándose NAD+ y FMNH2. El
FMNH2 transfiere los electrones de a 1 a los centros hierro-azufre y estos se transfieren los electrones de
a uno a la Q, generándose HQ y posteriormente QH2. La energía liberada por el flujo de electrones hace
un trabajo, bombear protones. Durante la oxidación se bombean 4H+ desde la matriz al espacio
intermembrana.

COMPLEJO 2, SUCCINATO DESHIDROGENASA

El succinato se oxida y la ubiquinona se reduce. Participa la enzima succinato deshidrogenasa, es la única

enzima del ciclo de Krebs que se encuentra en la MMI. Se forma la coenzima completamente reducida,
el complejo 1 y 2 son compuertas de entrada de los electrones. No es una bomba de protones, es la
única proteína o complejo de la cadena respiratoria que no tiene la capacidad de bombear protones.

Cuando el succinato se oxida a fumarato gracias a la succinato deshidrogenasa, se liberan electrones y

son captados por el FAD, el cual se reduce a FADH2. El FADH2 transfiere los electrones a los centros de
hierro-azufre, estos transfieren los electrones de a uno a la ubiquinona (Q) generándose QH y
posteriormente a ubiquinol (QH2). Si los electrones entran por este complejo, se salteará el primer
punto de bombeo de protones, que se da en el complejo 1, esto tendrá consecuencias en el balance
final.
COMPLEJO 3, CITOCROMO BC1

Es un complejo transmembrana formado por el citocromo b y c1. Se produce la transferencia de

electrones desde la ubiquinona al citocromo c acoplada por el bombeo de H+. Esta compuesto por
diferentes tipos de transportadores de electrones: citocromos y proteínas hierro-azufre. Este complejo
canaliza los electrones desde un transportador de dos electrones a uno de un electrón y bombe
protones mediante el ciclo Q.

La QH2 completamente reducida entrega electrones al citocromo c, este citocromo solo puede aceptar 1
electrón y la QH2 trae 2. Cada electrón hace un camino.

Primer etapa

1 electrón es transferido al centro hierro-sulfato, citocromo c1 y finalmente al citocromo c que se reduce

y este luego al complejo 4. El otro electrón es transferido a citocromo b que luego transfiere a Q
generando semiquinona (Q-)

Segunda etapa

Una QH2 diferente se une al complejo. Un electrón es transferido hasta el citocromo c de igual manera.
El segundo electrón es transferido hasta Q- que capta 2 H+ para generar QH2. Básicamente el ubiquinol
pasa ser ubiquinona y puede aceptar electrones nuevamente, por eso se da el ciclo.

COMPLEJO 4, CITOCROMO OXIDASA

El oxígeno es el aceptor final de electrones. En este complejo, que es una bomba de protones al espacio
intermembrana, se cataliza la reducción de oxigeno a H2O, el cual es uno de los productos finales de la
respiración celular. El bombeo de protones requiere energía, la misma es tomada de la transferencia de
electrones desde el citocromo c al oxigeno para dar agua. También se produce energía, el ingreso de
protones a la matriz libera energía utilizada en la síntesis de ATP.

Contiene citocromo a y a3 y 2 centros cúpricos (iones de cobre presentes en los centros activos de
proteínas) CuA y CuB como transportadores de electrones.
Los electrones son transferidos al centro CuA al citocromo a. De aquí son transferidos al centro
citocromo a3-CuB, desde donde se transfieren al oxígeno. En la reducción del oxigeno se requieren 4
electrones y se toman 4 protones de la matriz para formar la molécula de agua.

Al sumar, en los complejos 1,3,4 parte de la energía se conserva en un gradiente de protones. Los
complejos 1 y 2 pasan electrones a la Q reduciéndola a QH2. El complejo 3 transfiere electrones de Q al
citocromo c (oxidando el Q a QH2) y este transfiere los electrones al complejo 4.

Si los electrones entran por el complejo 1, habrá 3 puntos de liberación de protones, si entran por el
complejo 2, habrá 2 puntos de liberación de protones.

Complejo 1 Capta solo electrones y bombea protones. Capta los electrones del NADH.
Complejo 2 El FAD capta electrones del succinato, reduciéndose a FADH2. El FADH2 le
transmite los electrones al complejo 2. No bombea protones.
Complejo 3 Capta los electrones del ubiquinol y bombea protones
Complejo 4 Puede captar 4 electrones y bombear protones
Q Toma 1 o 2 electrones y capta protones de la matriz
Citocromos Transportan electrones únicamente. El citocromo c lleva un electrón a la vez al
complejo 4.
INHIBIDORES DE LA CADENA RESPIRATORIA

Estos inhiben el flujo de electrones entre los transportadores, no se produce ATP porque no se genera el
gradiente protónico, ni el agua porque los electrones no llegan a reducir el oxígeno, la cadena esta
interrumpida.

- Rotenona y amital: bloquea el complejo 1, impidiendo la transferencia de electrones desde el

NADH hasta la Q
- Antimicina A: Afecta el complejo 3, bloque la transferencia de electrones desde el complejo 1 al
4, evitando la reducción del oxígeno.
- Cianuro, Azida, monóxido de carbono: Se unen de manera fuerte al complejo 4, evitan la
reducción final del oxigeno y bloquean la respiración celular.

AGENTES DESACOPLANTES

La cadena respiratoria está a acoplada a la síntesis de ATP mediante el gradiente de protones. Estos
agentes se encargan de desacoplar estos procesos. Estos agentes promueven el transporte de electrones
para mantener un gradiente de protones, por lo que aumentan el consumo de oxígeno, pero inhiben la
síntesis de ATP. En otras palabras, introducen los protones hacia el interior mitocondrial, lo que interfiere
con la generación del gradiente.

El desacoplamiento regulado (se da bajo condiciones específicas) es un proceso en el cual se interrumpe

la acoplacion de la cadena respiratoria y la fosforilación oxidativa de la mitocondria. Este interrumpe la
síntesis de ATP. En ciertas condiciones de frio, se produce este desacoplamiento regulado que produce la
oxidación de combustible para regular la temperatura corporal y generar calor.

INHIBIDORES DE ATPASA (COMPLEJO 5, FOSFORILACIÓN OXIDATIVA)

Inhiben la función del complejo 5. Actúan inhibiendo el pasaje de protones a favor del gradiente hacia la
MM. Los protones se acumulan en el impidiendo que continue su bombeo, por lo tanto, no se podrán
transportar electrones y se inhibirá el consumo de oxígeno y la síntesis de ATP.

INHIBIDORES DE LOS COMPLEJOS

Se interrumpe el transporte de electrones, por lo que no se generará el gradiente de protones y, por lo

tanto, no habrá consumo de oxígeno ni síntesis de ATP.

REGULACIÓN DE LA CADENA RESPIRATORIA

Esta regulada a nivel de la glucolisis y el ciclo de Krebs. La PFK es uno de los puntos centrales de la
regulación de la velocidad de este proceso. La carga energética regula la respiración, el ATP inhibe y el
ADP/AMP activa.

En presencia de oxigeno y altas concentraciones de ADP aumenta el flujo de electrones en la cadena

respiratoria. Generan que se sintetice el ATP en la ATP sintasa, ingresando a la matriz el H+ más rápido y
acelerando todo.
FOSFORILACION OXIDATIVA

TEORÍA QUIMIOSMOTICA

Describe como se genera la energía necesaria para la síntesis de ATP en la membrana celular durante la
respiración celular. Según esta teoría, la generación de ATP ocurre a través de la fosforilación oxidativa.
Esta se basa en el establecimiento de un gradiente electroquímico a través de la membrana. Estos
gradientes son creados gracias a las cadenas de transporte de electrones, que transportan electrones
desde donantes a aceptores.

Esta teoría propone que, a medida que los electrones pasan a través de la cadena de transporte, se
bombean protones desde el interior hacia el especio mitocondrial externo través de una enzima llamada
ATP sintasa. Este gradiente de concentración de protones sirve como almacén de energía que dirige la
formación de ATP: fuerza protón-motriz.

La fuerza protón-motriz es la energía almacenada en la gradiente de concentración de protones. Estos

protones son translocados al especio intermembrana por la cadena respiratoria y regresan al interior de
la matriz mitocondrial vía ATP sintasa (proteína transmembrana de la MMI).

ATP SINTASA O COMPLEJO V

La energía conservada en el gradiente de protones es la energía protón-motriz que permite llevar a cabo
la síntesis de atp. Esto se da en un complejo a veces denominado complejo 5. Esta enzima
transmembrana cataliza la síntesis de ATP a partir de ADP y un grupo fosfato utilizando la energía
almacenada en el gradiente de protones cuando estos fluyen hacia la matriz mitocondrial a favor de su
gradiente. Está compuesto por dos dominios.

Dominio F0 - Forma un canal por el que fluyen los H+ a favor de su gradiente

(Unidad - Compuesto por subunidades a, b, c
bombeadora de H+) - Las subunidades c forman un anillo que rota
- Insertado en la MMI
Dominio F1 - Sitios de unión de ADP y ATP
(Unidad catalítica) - Formada por 3 dímeros alfa y beta
- En beta ocurre actividad catalítica
- Las subunidades ƴ, Ɛ giran impulsadas por el anillo c en F0.
- Hacia el interior de la MMI
- Es una ATPasa (cataliza la hidrolisis de ATP en ADP)
MECANISMO DE LA ATP SINTASA

Cataliza la formación de ATP a partir del ADP y Pi, acompañado por el flujo de protones. El sitio en donde
se da la reacción es la subunidad beta. Cada subunidad beta de la ATP sintasa puede adoptar 3
conformaciones diferentes

- Beta-ADP + Pi
- Beta-ATP (síntesis de ATP)
- Beta-vacío (liberación de ATP)

Frente a la entrada de protones a la matriz mitocondrial, se genera un cambio conformacional que

hace que el ADP + Pi se una al sitio vacío y pase al ATP. Esto se da gracias al movimiento de F0 por el
bombeo de protones.

La catálisis rotacional es clave para el mecanismo de unión y cambio de la síntesis de ATP. En este
mecanismo los tres sitios activos situados sobre F1 alternan en la catálisis de la síntesis de ATP. Una
subunidad beta determinada empieza en conformación beta-ADP que une ADP y Pi del medo. Luego la
subunidad cambia de conformación, adoptando la forma beta-ATP que une y estabiliza fuertemente el
ATP. Finalmente, la subunidad cambia hacia la conformación beta-vacía, que tiene afinidad muy baja con
el ATP, por lo que el ATP recién sintetizado se libera de la superficie de la enzima. Cuando esta subunidad
vuelve a adoptar la conformación beta-ADP y se una ADP+Pi, se inicia otra ronda de catálisis.

Los cambios de conformación están impulsados por el paso de protones a través del poro F0 de la ATP
sintasa. Este paso hace que el cilindro formado por las subunidades c y la subunidad y anclada giren. Las
tres subunidades beta interaccionan de tal modo que cuando una adopta la conformación beta-vacía, la
vecina de al lado ha de adoptar la conformación beta-ADP y la del otro la beta-ATP. Por lo tanto, una
rotación completa de la subunidad y provoca que cada subunidad beta se cicle a través de sus tres
conformaciones posibles, y en cada rotación se sintetizan y se liberan de la superficie de la enzima 3
moléculas de ATP.
ROTACIÓN DE LA SUBUNIDAD Y

Las subunidades individuales F0 están dispuestas en un circulo alrededor de un núcleo central que esta
relleno de lípidos de membrana. En cada subunidad c hay un residuo Asp (es clave porque puede recibir
o ceder un protón) localizado aproximadamente en el centro de la membrana. Los protones cruzan la
membrana a través de una ruta formada por subunidades a y c. La subunidad a tiene un semicanal
protónico que va desde el lado p (concentración alta de protones), (citosol), al centro de la membrana,
donde termina cerca del residuo Asp de la subunidad c vecina. Un protón va a través de este semicanal y
se une al residuo Asp, eliminando la carga negativa del grupo carboxilo, se establece una interacción con
el Asp de la subunidad c vecina y este protón sale a través del segundo semicanal al lado n, en donde la
concentración de protones es relativamente baja, lo que completa la transferencia de un equivalente de
protones desde el exterior al interior de la matriz. En ese omento otro protón ha entrado en el
semicanal, en la lado p, se ha desplazado hasta el Asp de la siguiente unidad c, la ha protonado, y
desplaza el protón de la siguiente subunidad c y así sucesivamente.

Se requiere que 3 protones sean translocados para liberar 1 atp, para completar un ciclo de las
conformaciones de subunidad beta

El movimiento rotacional del anillo c se da gracias a la gran diferencia en la concentración de protones a

través de la membrana.
SALIDA DEL ATP A LA MITOCONDRIA

El ATP sintetizado se necesita en diferentes lugares, por lo que debe salir de la mitocondria. Esto lo hace
mediante transportadores, utilizan la energía del gradiente de protones para este transporte.

- TRANSPORTADOR DE ADENINA TRANSLOCASA: Transporta ATP hacia afuera de la MMI y ADP

hacia adentro utilizando el gradiente.
- FOSFATO TRANSLOCASA: El fosfato utiliza el gradiente de protones para poder entrar.

Con estos transportadores entra ADP + Pi y sale ATP. Al utilizar la energía del gradiente de protones, se
ahorra la utilización de ATP.

Un protón adicional se consume en el transporte del ATP de la matriz al citoplasma, entonces 4 protones
son necesarios que regresen a la matriz para la liberación de 1 atp.

SISTEMAS DE LANZADERA

La MMI es impermeable al NAD+, por lo que el NAD+/NADH del citosol (producto de la glucolisis) y la
matriz mitocondrial no se intercambian mediante transportadores, lo que hay son sistemas de lanzadera
para generar equivalentes de reducción (cantidad de electrones transferidos por molécula de una
especie química durante una reacción de reducción-oxidación). Estos sistemas envían indirectamente
NADH citosólico a la mitocondria para su oxidación.

La lanzadera de NADH mas activa, que funciona en las mitocondrias del hígado, riñón y corazón, es la
lanzadera del malato-aspartato.

1) Reducción del oxalacetato a malato: Los equivalentes de reducción del NADH citosólico (2
electrones) se transfieren en primer lugar al oxalacetato citosólico obteniendo malato y NAD+
por acción de la malato deshidrogenasa citosólica.
 2) El malato formado pasa a través de la membrana interna mediante el sistema de transporte del
malato-alfa-cetoglutarato. A la vez, se transporta alfa-cetoglutarato al citoplasma para regenerar
oxalacetato.
3) El malato pasa por acción de la malato deshidrogenasa mitocondrial y se oxida a oxalacetato en
la mitocondria. Los electrones son captados por ll NAD+ formando NADH
4) Este NADH puede pasar electrones de forma directa a la cadena respiratoria
5) Al pasar el par de electrones al O2, se generan unas 2,5 moléculas de ATP.

El musculo esquelético y el cerebro utilizan una lanzadera diferente del NADH, la lanzadera de glicerol-3-
fosfato. La diferencia que tiene con la lanzadera anteriormente vista es que cede los equivalentes de
reducción desde el NADH a través del FAD de la glicerol-3-fosfato deshidrogenasa a la Q y de ella al
complejo 3, no al complejo 1, con lo que solo proporciona energía para 1,5 moléculas de ATP por par de
electrones.

1) A partir del NADH formado en la glucolisis, la dihidroxiacetona fosfato (DHA-P) se reduce a

glicerol 3P mediante la enzima citosólica y el NADH cede sus electrones.
2) Por acción de la enzima mitocondrial, el glicerol 3P se oxida a dihidroxiacetona fosfato.
3) Los electrones liberados son captados por el FAD y este se reduce a FADH2 y luego le transfiere
los electrones a la Q.
4) Esto quiere decir que entran por el complejo 2. Por cada NADH que ingrese a la lanzadera
glicerol 3P, se formara un FADH2 y 2 mol de ATP.
Si el NADH proviene del CK, la oxidación de AG o de la PDH, simplemente transferirá los electrones al
complejo 1 ya que estos procesos se dan en la MM.

BALANCE ENERGETICO

Por cada molécula de NADH se forman 2,5 de ATP y por cada FADH2 se forman 1,5 de ATP, por lo que la
oxidación completa de una molécula de glucosa genera 32 ATP, salvo que los dos NADH citosólicos
entren por la lanzadera de glicerol 3P, formándose 4 ATP y un total de 30 ATP.

REGULACIÓN DE LA FOSFORILACIÓN OXIDATIVA

La fosforilación oxidativa sintetiza la mayor parte del ATP que se produce en las células aeróbicas. Esta se
encuentra regulada por las necesidades celulares de energía, esta limitada generalmente por la
disponibilidad de ADP como sustrato de la fosforilación.

- Con más ADP disponible para la fosforilación oxidativa aumenta la velocidad de la respiración, lo
que da lugar a la regeneración de ATP. A su vez la disponibilidad del NAD+ y el FAD controlan la
velocidad del ciclo de Krebs.
- En condiciones normales los electrones no suelen desplazarse a lo largo de la cadena de
transporte de electrones hasta el oxigeno amenos que al mismo tiempo el ADP se fosforile por
ATP.
- En las células hipóxicas un inhibidor proteico bloquea la hidrolisis de ATP por la ATP sintasa
operando en sentido inverso, impidiendo así una caída drástica en la concentración de ATP.