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A
Tema 20
Evolución histórica de la Microbiología
Generación espontánea
Microbiología
Métodos de estudio
Relación de microorganismos con otros seres vivos
Métodos de estudio
Aislar
Medios de cultivo
Técnicas asépticas
ÍNDICE
Observación
Tinciones
Procariotas
Protistas
Protozoos
Algas
Hongos
Virus
Viriones
Priones
EVOLUCIÓN
HISTÓRICA DE
LA
MICROBIOLOGÍ
A
Filósofos
Lucrecio y Fracastoro. Intuían la existencia de seres invisibles causantes de
enfermedades.
Hipócrates. Los denominó “Miasmas”
Siglo XIX
Desarrollo de las técnicas microscópicas
Métodos de estudio
Manipulación de organismos
La microbiología emerge como ciencia alrededor de 2 cuestiones:
La Teoría de la Generación espontánea
La Teoría microbiana de las enfermedades infecciosas
Teodor Experimentos
Leeuwenhooek
Schwann de Pasteur
Generación ESPONTÁNEA
Louis Pasteur
Cada proceso de
fermentación es realizado
por un microorganismo
distintos.
Demuestra la falsedad de
la teoría de la generación
espontánea demostrando
que los microbios estaban
en el aire.
Desarrollo de la
microbiología
1837 Theodor Schwann.
Levaduras responsables de la
fermentación alcohólica.
Microbiología industrial
Sg. XVI
Relación entre microorganismos
y enfermedades
1835 Bassi
Responsable de una
enfermedad que afectaba a los
gusanos de seda.
Desarrollo de la microbiología
1845 Berkeley
Otro hongo causante del tizón de la patata
Louis Pasteur
Pebrina y el carbunco (ántrax)
Primeras vacunas contra el carbunco y la rabia
Robert Koch
Especificidad microorganismo-enfermedad
Las bases de la teoría microbiana de la enfermedad
Importancia de cultivos puros o axénicos
Se esteriliza el
asa y luego se
toma una Crecimiento de colonias confluentes
muestra del tubo al comienzo de la siembra por estría
Colonias
aisladas al final
de la siembra
por estría
En la zona 3 deberían
aparecer colonias aisladas
Aislamiento por
dilución y
siembra en
profundidad.
Aislamiento por
dilución y
siembra en
profundidad.
Aislamiento directo
Para los microorganismos de mayor tamaño
(algas, protozoos) que se pueden aislar
utilizando pipetas Pasteur y una lupa binocular.
Medios de cultivo
CULTIVO: Un cultivo es un conjunto de células microbianas creciendo sobre un medio. En
microbiología, medio es una solución acuosa con los nutrientes que los organismos precisan
destinada al cultivo de microorganismos
MEDIOS DE CULTIVO: Los medios de cultivo pueden ser sólidos o líquidos y están constituidos por
una solución acuosa con los nutrientes que los microorganismos precisan.
MEDIOS SÓLIDOS:
UTILIDAD: Los medios sólidos son particularmente adecuados para cultivos de bacterias u
hongos.
PREPARACIÓN: se preparan mezclando una solución de uno o varios nutrientes líquidos con
un agente gelificante, generalmente agar-agar. Se produce así el medio-agar. El agar no
actúa de nutriente ya que es un polisacárido complejo que no es fácilmente digerido por los
microorganismos
MEDIOS LÍQUIDOS:
UTILIDAD: Los medios líquidos, o caldos de cultivo, son útiles para controlar el crecimiento
de poblaciones.
PREPARACIÓN: Pueden introducirse en un tubo de ensayo o un matraz Erlenmeyer, tapados
por un tapón. El medio debe estar esterilizado antes de usarse para el crecimiento de un
cultivo celular; esto permitirá el crecimiento de cultivos puros formados por una única
especie de microorganismo.
Curva de crecimiento de un
cultivo bacteriano
Al ser muy elevado el número de bacterias de un cultivo,
no se puede utilizar su número real para representar el
crecimiento del cultivo. Por tanto, se utiliza el logaritmo
en base diez del número de células para construir la
curva de crecimiento del cultivo.
FASES DEL CRECIMIENTO DE UN CULTIVO
BACTERIANO: Toda la población bacteriana pasa por las
siguientes cuatro fases:
FASE DE LATENCIA: Es el período comprendido entre la
inoculación del microorganismo en el medio de cultivo y el
comienzo del crecimiento. Durante esta fase hay poco
aumento en el número de células. El número de bacterias
crece muy poco porque hay pocas bacterias
Curva de crecimiento de un
cultivo bacteriano
FASE DE LATENCIA
FASE DE LATENCIA
FASE EXPONENCIAL
Fase estacionaria
Al no haber renovación de nutrientes se agotan
y se acumulan los productos de deshecho.
Fase de muerte
El número de células cae graduablemente
Métodos de estudio:
Cultivo continuo
Quimiostato. Se suministra al cultivo una
cantidad controlada de medio fresco,
eliminando al mismo tiempo el exceso
equivalente de medio «utilizado».
Serratia marcescens
Cultivada en Agar
MaConkey
Pseudomonas aeruginosa
Cultivada en
Agar Tripticasa-soja
Shigella
flexneri
Cultivada
en Colonias de Bacillus subtilis que
Agar han crecido en medios con pocos
MacConkey nutrientes
Técnicas de
esterilización
Eliminar microorganismos del medio de
cultivo, del material y de los utensilios del
laboratorio.
Más común: ESTERILIZACIÓN POR CALOR
La leche, nata y ciertas bebidas alcohólicas (cerveza y vino), los zumos, se someten a
tratamientos de calor controlado que sólo matan a ciertos tipos de microorganismos pero
no a todos.
La temperatura seleccionada para la pasteurización se basa en el tiempo térmico mortal
de microorganismos patógenos. Es el tiempo más corto necesario para matar una
suspensión de bacterias a una temperatura determinada.
Hay tres tipos
Pasteurización tradicional: 63 a 65°C por 30 min.
Pasteurización Flash: el líquido se calienta a 72ºC por 15 seg y rápidamente se
enfría. Puede ser adaptada a flujos continuos.
Ultrapasteurización: 150ºC por 1-3 seg
Observación de microorganismos
Estudios de microscopía
• Diferencian por la morfología
• Se utilizan tinciones (Gram)
Métodos bioquímicos
• Según la utilización de diferentes
sustratos
Tinciones
Tinciones diferenciales
Tinción simple
Un único colorante
Safranina, cristal violeta, azul de metileno
Se tiñe toda la bacteria por igual
Tinción negativa
Una gota de nigrosina o tinta china, depende de lo que se
quiera observar
Se extiende sobre la muestra
Se deja secar
Se observa
Presencia de cápsulas o capas mucosas, flagelos
Observación de
microorganismos
Tinciones diferenciales
Tinciones que tiñen de forma diferente,
distintas bacterias
2 colorantes
La importancia de distinguir las bacterias gram positivas de las gram negativas estriba
en que las primeras son sensibles a la penicilina o las cefalosporinas, mientras que las
segundas suelen ser más resistentes a estos antibióticos. La observación se realiza a
microscopio
Microorganismos
DIVERSIDAD MICROBIANA
La microbiología estudia organismos muy heterogéneos pero que tienen en
común:
• El tamaño
• Desarrollan todas las funciones vitales
• La metodología empleada para su estudio
Procariota
• Reino Monera
• Escherichia coli
• Streptococcus sp
Eucariota
• Reino protista
• Protozoos
• Paramecium multinucleatum
• Esqueleto radiolaria
• Hongos mucosos
• Algas microscópicas (Diatomeas)
• Reino hongo
• Saccharomyces sp.
• Panicillium sp
Virus
• Hepatitis B
• Rabia
Clasificación de los microorganismos
Bacterias
Protozoos
Algas
Hongos
(levaduras)
DIVERSIDAD
MICROBIANA
Todos los SV de tamaño
microscópico son
MICROORGANISMOS
Excepto larvas de metazoos o
nematodos
Han sido muy difíciles de situar en
el árbol evolutivo universal debido
a:
Hay muy poco registro fósil
Los datos sobre su evolución son
recientes
Por estudios en la secuencia de
RNAr todos los SV evolucionaron a
partir de un ancestro común
PROCARIOTAS
Eubacterias • Grupo amplio, con varias ramas
evolutivas.
• Gran capacidad adaptativa.
Bacterias purpureas y
• Son la mayor parte de las
verdes
bacterias conocidas
Cianobacterias
Proclórofitas
Bacterias nitrificantes
Espiroquetas
Micoplasmas
Arqueobacterias
Halofílicas
Termofílicas
Metanógenas
• Mayoría de anaerobias
• Membranas sin ac.
grasos
• Pared sin
peptidoglucanos
PROCARIOTAS
Microorganismos 0,1-50μm
Nanobacterias o ultra μbacterias. Diámetro menor 0,1 μm
Oscillatoria, Diámetro mayor de 7 μm
PRESENCIA EN ORGANISMOS: puede faltar, solo está presente en algunas bacterias, especialmente las patógenas
Agua
Proteínas
• Circular
ADN • Bicatenario
• Plegado
bacteriano
• Asociado a proteínas no
histónicas
• Sirven de anclaje.
• Las fimbrias son cortas y numerosas.
• Los pili atraviesan la membrana (las
fimbrias no) y permiten el paso de material
genético.
Funciones:
Sistema de anclaje
Participan en la conjugación
Flagelo bacteriano
Monótricas
Perítricas
Procariotas: NUTRICIÓN
Fuente de carbono
Fuente de
Fuente de carbono
carbono
orgánica
inorgánica
Fuente de
energía Luz Fotoautótrofos Fotoorganótrofos
Energía
Quimioautótrofos Quimioorganótrofos
química
Procariotas
Procariotas
Procariotas:
RELACIÓN
Fototactismo y Quimiotactismo
Sensibilidad a la luz o sustancias
químicas
Se desplazan con flagelos o
reptan
Fabricación de endosporas
Estructuras de resistencia que
fabrican en condiciones adversas
Resisten Tª de 80ºC, sequedad,
acción de agentes químicos o
radiaciones
Muchas bacterias tienen movilidad, ya sea
por flagelos, contracción o reptación,
acercándose o alejándose de los estímulos
ambientales (luz, alimentos…)
Pueden responder modificando su
metabolismo, adaptándolo a las condiciones
concretas.
Si no pueden moverse y el ambiente es
desfavorable originan formas de resistencia,
las endosporas, formas de vida latente
protegidas por una gruesa membrana,
capaces de resistir condiciones extremas.
Cuando el ambiente es favorable, germinan y
originan bacterias funcionales.
Procariotas:
REPRODUCCIÓN
R. ASEXUAL
Bipartición
Gemación
Duplicación del cromosoma
Estrangulación
Se generan 2 células hijas idénticas
Reproducció
Conjugación
n
Transformaci
Parasexual
ón
Transducció
n
Bipartición
• Si el plásmido se integra en el
cromosoma bacteriano se
llama episoma y puede
transportar genes de este
cromosoma.
Transformación
Fermentativas
Bacterias lácticas. Producen ácido láctico por
fermentación. Presentan importancia industrial.
Respiración y Fermentación
Bacillus y Clostridium-----ENDOSPORAS
Micoplasmas
Bacterias pleomorfas (varias formas según las
condiciones)
Sin PC
Parásitos obligados (animales y plantas)
Enfermedades ( vías urinarias y respiratorias)
Esteroles en su membrana
Entre las bacterias de mayor tamaño
Eubacterias:
ACTINOMICETOS
Gram + con alto contenido en C+G:
ACTINOMICETOS
Formas bacilares o filamentosas a menudo
ramificadas
A veces forman MICELIOS FÚNGICOS
(hongos y actinomicetos)
Se incluyeron erróneamente en HONGOS
Género Streptomyces
Producen Ab
Eubacterias: GRAM -
Fotosintéticas oxigénicas (Cianobacterias)
Clorofila a
Fotosintéticas anoxigénicas (Bacterias rojas o
púrpuras y verdes)
Bacterioclorofila (exclusiva de bacterias)
Quimiolitotrofas
Bacterias oxidantes del Fe y del S
Obtienen su E del Fe2+ o compuestos reductores
del S (H2S)
Bacterias nitrificantes
NH3+ o nitritos como fuente de E
Quimiorganotrofas
Género Pseudomonas
Útiles para descontaminar el medio ambiente
Metabolizan gran variedad de compuestos
orgánicos
Enterobacterias
Bacterias asociadas al tracto intestinal
Pueden ser beneficiosas o no (Salmonelosis)
Bacterias formadoras de yemas y/o apéndices o
prostecas: ciclos celulares complejos.
ARQUEOBACTERIA
S
Diferentes al resto de procariotas
Características más importantes
Procariotas
PC no mureínicas, sin PG
MP con lípidos exclusivos del grupo (el glicerol
se une por enlace de tipo éter a las cadenas
laterales).
No tienen ácidos grasos, sino hidrocarburos
Metabolismo respiratorio A/AN
En ambientes extremos
Arqueas halófilas: en ambientes hipersalinos.
Arqueas termófilas y termoacidófilas: en
ambientes extremos de temperatura y, en
ocasiones extremadamente ácidos.
Bacterias metanógenas: producen metano a
partir de H2 y CO2, se encuentran en
ambientes anaerobios.
PROTOCTISTAS
Son Eukarya
Generalmente móviles y de vida
libre o parásita
Unicelulares
PROTOCTIST Coloniales
AS No forman tejidos. No
diferenciación celular.
Protozoos, algas microscópicas y
hongos mucosos.
1º Células ancestrales
LOS PROTOZOOS
Microorganismos eucariotas con movilidad.
Heterótrofos y Organotrofos
Fotosintéticos (cloroplastos)
No presentan PC
Asexual
Escisión binaria
Sarcodinos
• Tienen pseudópodos. Se alimentan por fagocitosis. Son
de vida libre y forman parte del plancton.
• Ejemplos: Foraminiferos, radiolarios, amebas
Flagelados
• Tienen flagelos. Pueden ser parásitos o formas libres.
• Ejemplos: Leishmania, Tripanosoma
Ciliados
• Cuerpo cubierto de cilios. Muchos disponen de dos
núcleos. Realizan procesos de conjugación
• Ejemplos: Paramecium, Vorticellas
Esporozoos
• Inmóviles, parásitos y se reproducen por esporulación
• Ejemplos: Plasmodium (malaria)
LAS ALGAS
• Son Eukarya
• Autótrofos fotolitótrofos. Fotosintéticas (Cloroplastos)
• Reproducción asexual y sexual
• Protistas sólo las unicelulares o colonias
microscópicas
• Se mueven por flagelos------Protozoos fitoflagelados
• Inmóviles---Algas conjugadas y diatomeas con valvas
o caparazones
• PC de celulosa o quitina
• Los polímeros de reserva son variados, sólo en
algunas se sintetiza el almidón
• Acuáticos
• Forman el fitoplancton, en rocas, suelos, troncos o
superficies húmedas
LAS ALGAS
• Tienen importancia ecológica como productores
de oxígeno y ser la base de las cadenas tróficas
en ecosistemas acuáticos (fitoplacton)
HONGOS MUCOSOS Enteridium lycoperdon
Eucariotas
Quimiorganotrofos/Heterótrofos
Ciclo de vida complejo
Fases flageladas o ameboides de células aisladas
Fases de plasmodio o pseudoplasmodio=masa celular en el que
las células conservan su independencia pero se mueven como
un todo
Condiciones adversas
Cuerpos fructíferos en los que
se diferencian esporas
Se incluyen en PROTISTAS AMEBOIDES
HONGOS
• Son Eukarya heterótrofos,
• Unicelulares o pluricelulares
(filamentosas)
• PC tienen principalmente quitina.
• Se alimentan por absorción de
nutrientes
• Producen enzimas extracelulares
para hidrolizar polímeros complejos
HONGOS • En todo tipo de hábitats,
fundamentalmente terrestres
• Suelo o materia en descomposición
• Altas concentraciones de sal, de
azúcar,…
• Importancia agrícola y sanitaria
(parásitos)
• Biodeterioro de alimentos
Grupos de hongos
Micelio reproductor
Algunas hifas se diferencias del resto
Micelio aéreo
Suele erguirse por la superficie
Donde se originan las esporas o estructuras reproductoras
Hongos
REPRODUCCIÓN
Asexual
Levaduras u hongos unicelulares
Bipartición o Gemación
Hongos filamentosos
Esporas asexuales
Producidas por Mitosis a partir de :
CONIDIÓFORO(extremo de una hifa especial)
ESPORANGIO (estructura característica)
Las esporas suelen ser pigmentadas dando al micelio un color característico
Sexual
Fusión de gametos unicelulares o hifas especializadas (GAMETANGIOS)
Esporas sexuales, que proceden de:
Extremo de una hifa (Basidio): BASIDIOSPORAS
En el interior de una estructura con forma de saco (Asca): Ascosporas
Por fusión de 2 hifas: ZIGOSPORAS
Fusión de 2 gametos (hembra inmóvil, macho móvil): OOSPORA (inmóvil)
HONGOS
VIRUS
LOS VIRUS
Descubiertos por Pasteur (1884)
Formas acelulares
0,002-0,3 µm
Son parásitos intracelulares obligados que
utilizan metabolismo y reproducción del
huésped.
Poseen ADN ó ARN como material genético y
una envoltura proteica que rodea el ácido
nucleico.
Son metabólicamente inertes y carecen de
maquinaría para generar energía o sintetizar
moléculas.
Fuera del huésped no tienen vida (viriones)
LOS VIRUS
Dirigen su propio proceso de replicación
Ciclo de vida
Fase extracelular inerte
Fase intracelular activa
Simplicidad estructural
Los virus: Morfología
• Cápsida proteica
Nucleocápsida
• Ácido nucleico Virión
El ácido nucleico
forma una espiral. Los Cabeza icosaédrica y
Helicoidales Complejos
capsómeros tienen cuello helicoidal
simetría helicoidal
Generalmente
Reproducción Requiere huésped
independiente
Según el Según el
Por su
organismo material
morfología
infectado genético
ADN doble
Bacteriofagos Helicoidales
cadena
Lisi
s
CICLO
LÍTICO
Síntesis de
Replicación
proteínas y
del ADN vírico
ensamblaje de
partículas víricas
Inyección
del ADN
vírico
Maduración
Liberación
Al finalizar el ciclo los nuevos viriones salen de la célula por lisis o por
gemación
1.ADSORPCIÓN
La proteína de adhesión viral reconoce receptores
específicos en el exterior de la célula. Las células que
carecen de los receptores apropiados no son susceptibles
al virus.
2. PENETRACIÓN
LA
Virus envueltos
(A) Entran por fusión con la membrana plasmática.
(B) Entada vía endosomas en la superficie celular
CACIÓN
endosomas. Si son transportados en endosomas,
luego cruzan (o destruyen) la membrana de
dichas estructuras.
3. PÉRDIDA DE LA CÁPSULA (fase de ECLIPSE)
Virus desnudos
Virus:
Ciclo
Lítico
Virus:
Ciclo
Lítico
Virus:
Ciclo
Lítico
Virus: ciclo lisogénico
No se producen partículas virales
Virus atemperados (DNA)
Incorporan su MG en el del hospedador (ESTADO DE
PROPAGO)
Se replica pero no se sintetizan proteínas víricas
Agentes inductores (dañan el DNA) provocan la separación
del ácido nucleico, que seguirá entonces un ciclo lítico
Ciclo lisogénico
BACTERIÓFAGOS
Virus complejos
Icosaédricos/Helicoidales
Mayoría desnudos
MG: DNA/RNA
Lítico / Lisogénico
Mayoría son
virulentos-----Ciclo lítico
Virus de animales y vegetales
Simetría icosaédrica o helicoidal
Muchos con envoltura
Animales: Todo tipo de MG
Vegetales: RNA
Infección lítica: Destruye al huésped
Infección persistente: Partículas liberadas lentamente por gemación
Infección latente: Multiplicación inapreciable y con una baja de defensas se
reactivan (animales)
Animales
Capacidad de transformar la CH en cancerosa (V. oncogénicos)
Relacionados con el cáncer---DNA
Herpesvirus
Hepoatits B
Retrovirus ----RNA
Vegetales
Infecciones con síntomas visibles
Mosaicos
Moteados
Anillos necróticos
Alteraciones
Brotes
Desarrollo
Ciclo de un
retrovirus: VIH
Penetración en la célula y
perdida de envoltura
Paso de ARN a ADN gracias
a la transcriptasa inversa
Formación de ADN de doble
cadena
Integración en el
cromosoma celular
Transcripción
Traducción de proteínas
víricas
Envuelta
Capsulas
Transcriptasa inversa
Ensamblaje
Salida de la célula
VIRUS-----CÁNCER
VIRODES
RNAmc.
Forma de varillas
No asociado a proteínas
En plantas----Enfermedades relacionadas con el crecimiento
Atrofia en tomate
Enfermedad del tubérculo fusiforme en patata
No codifican proteínas
PRIONES
Partículas subvirales
VIRIODES
PRIONES
Proteínas
Enfermedades degenerativas
Desarrollo lento
SNC
Tembladera de ovejas (scrapie)
Las vacas locas
Enfermedad de Creutzfeldt-Jacob---Demencia
Infectivos. Se transmiten de unos individuos a otros
Proteínas anormales, su estructura 3D no es normal
Modifican proteínas celulares normales
Proteína priónica modifica un cammbio químico o conformacional
Viroides
Son los agentes infecciosos más pequeños
conocidos.
No poseen proteínas ni virus.
Son secuencias de ARN circular que interfieren
con el ARN celular.
Tienen una fases extracelular (metabólicamente
inactivos) y otra intracelular
Se han encontrado sólo en núcleos de células
vegetales, sobre todo, en cítricos.
Pueden actuar como ribozimas y catalizar su
propia replicación.
Se las considera las secuencias más antiguas,
anteriores a las células más primitivas, es decir,
antes de la formación del primer ser vivo.
Priones
Cultivo
• De bacterias susceptibles
• Los animales sobre tejidos o células
(animales)
• Los vegetales sobre hojas o tejidos
Recuento