Bioquímica General

DBIO1076

Presentación de componente Práctico

Docente:
Correo:
Departamento de Ciencias Biológicas y Químicas

Facultad de Medicina y Ciencia

 Laboratorio 2

“Determinación de proteínas”
Resultados de aprendizaje y Recursos
procedimentales.
• Elaboración de una curva de calibración de
absorbancia versus concentración de
proteínas.
• Cuantifica proteínas
séricas por método • Interpolación de valores en una curva de
colorimétrico calibración de absorbancia versus
utilizando una curva concentración de proteínas.
estándar y relaciona • Determinación de la concentración de
el valor obtenido con proteínas en sueros normal y patológico
posibles patologías. mediante el método de Biuret.
• Interpretación de los resultados obtenidos de
acuerdo con los valores de referencia
normales.
Trabajo Previo
Cuantificación de Biomoléculas
Para la determinación de analitos se utilizan principalmente técnicas
colorimétricas debido a su rapidez, confiabilidad y bajo costo. Estas técnicas se
basan en la obtención de un compuesto coloreado cuando un reactivo reacciona
específicamente con el analito que se desea determinar. Para entender este proceso,
es necesario que comprendamos el concepto de ABSORCIOMETRÍA.
 Método de Biuret
Como las proteínas no absorben luz en el espectro visible, es necesario que
reaccionen con un compuesto específico para formar un compuesto coloreado. Para
esto, se hace reaccionar una disolución de proteínas en medio alcalino (hidróxido de
sodio o de potasio) con una solución de sulfato de cobre, lo que produce un
compuesto de color violeta, y cuya intensidad de coloración es proporcional
a la concentración de la proteína de la disolución.

Esta reacción, es propia de las sustancias que contienen dos grupos amida (-CONH-)
como mínimo. Las proteínas y los péptidos (a partir de los tripéptidos) presentan
dichos grupos funcionales en su estructura y, por lo tanto, reaccionan positivamente.
Este cabio de color se puede medir por absorbancia a una lingitu de onda de 540 nm
Curva de Calibración
Una curva de calibración es la representación gráfica de una señal
(absorbancia) que se mide en función de la concentración de un analito. En el caso
de las proteínas, la señal, es el color desarrollado por la reacción de Biuret, y el
analito corresponde a las proteínas que queremos medir.

Luego, con los valores de concentraciones y absorbancias obtenidas, se

procede a construir una gráfica (curva de calibración), donde obtenemos una línea
recta con su respectiva ecuación de la recta (y = mx).
Donde:
y = Representa la variable dependiente (Absorbancia)
x = Representa la variable independiente (Concentración analito)
m = Pendiente
Concentración Absorbancia
(g/dL) a 546 nm
0 0
0,2 0,130
0,4 0,210
0,6 0,289
0,8 0,398
1,0 0,495
LINKS DE UTILIDAD:

Dilución de disoluciones y diluciones seriadas

• https://www.youtube.com/watch?v=YxxZ3-rVeJ8 (7 min)

Cálculos para dilución de disoluciones

• https://www.youtube.com/watch?v=gIn9yIRTwDE (11 min)

Espectrofotometría.
• Qué es un espectrofotómetro, absorbancia y transmitancia (1 min):
https://www.youtube.com/watch?v=wS0va4G2UMA

Ley de Lambert-Beer y espectrofotometría

• https://www.youtube.com/watch?v=xJZIOOkvTOo&t=2s (7 min)
• https://www.youtube.com/watch?v=1IyWP0r8vew (3 min)
Trabajo experimental:

• Formar grupos de trabajo (5-6 estudiantes)

• Trabajo en el desarrollo de los pasos experimentales (Guía
laboratorio)
• Obtener y recolectar datos
• Desarrollo y entrega Reporte grupal