Escuela Profesional de Ingeniería

Biotecnológica.

Práctica N° 11

FERMENTACIÓN
ALCOHOLICA
 INTRODUCCIÓN
 Las fermentaciones son procesos anaeróbicos
 Liberan energía para la formación de ATP en un proceso conocido como
“fosforilación a nivel de sustrato”
 Usan a compuestos orgánicos como aceptores de electrones en vez del
oxígeno.
 La fermentación alcohólica es una biorreacción que permite degradar azúcares
en alcohol y dióxido de carbono. La conversión se representa mediante la
ecuación
La conversión de acetaldehído en etanol es
llevada a cabo por la alcohol
deshidrogenasa, la cual es una enzima que
requiere de NADH + H+ y que cataliza la
reacción de arriba hacia abajo cuando esta
se lleva a cabo en un medio ligeramente
ácido ( pH de 5 a 6 ), por el contrario en
medio ligeramente alcalino (pH 8) esta se
realiza de abajo hacia arriba
Parte experimental

1. Formación de Acetaldehído y Etanol a partir de glucosa en presencia de Saccharomyces cerevisiae.

• a) Identificación de acetaldehído

• b) Cuantificación de etanol
FERMENTACION DE LA GLUCOSA POR Saccharomyces cerevisiae HASTA ACETALDEHIDO Y ETANOL

Añadir capa Añadir capa

de parafina de parafina
SUSTRATO

10 mL Solución de glucosa 10 mL Solución de glucosa

al 5 %, recién preparada y a
M-1 M-2 al 5 %, recién preparada y a
pH 5.5 pH 8
1 g. de Saccharomyces
cereviseae 500 mg de Sulfito
de calcio

Incubar en baño de agua a 37 ºC

durante 60 minutos
 En el sobrenadante de la muestra de incubación el sulfito
Identificación del acetaldehído FUNDAMENTO de calcio atrapa al acetaldehído, el cual puede observarse
por el cambio de color que se produce al reaccionar con
el nitroprusiato de sodio y la piperidina

M-1 0.5mL
nitroprusiato
de sodio

  T-1 T –2 T–3
1. Sobrenadante de M – 1 1.0 ml --- ---
T-1 T-1
2. Sobrenadante de M – 2 --- 1.0 ml ---
Baño hirviente
3. Agua destilada --- --- 1.0 ml 1mL M1 por 5 min

4. Nitroprusiato de Sodio 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml

Mezclar y colocar los tubos en baño de agua hirviente por 5 min. Observar
5.Observar. Anotar el color y olor       color
característico del acetaldehído

Así mismo preparar la M2 y el blanco

 La mezcla oxidante Dicromato-ácido sulfúrico actúa sobre el
CUANTIFICACION DEL
alcohol etílico transformándolo en ácido acético, a la vez que se
ETANOL FUNDAMENTO
forma sulfato cromoso con una coloración que varía del amarillo al
(Método de Shefftel
verde, en forma proporcional a la concentración de etanol existente
modificado)
en la muestra, susceptible a ser medido por fotocolorimetría
Reactivo Muestra

Mezcla
sulfocrómica: Verter
lentamente el ácido
HO
sulfúrico a la solución 2
h
12 asta
de dicromato 0,2mL .5m
l
3mL

Leer en
fotocolorímetro
578 nm

Estufa 100°C – 10min

Así mismo analizar los estándares 0.5 mg/ml, 1.0 mg/ml y 2 mg/ml y el blanco
 CALCULOS
Calcular los Factores de calibración respectivos en base a los
datos indicados

Absorbancia Absorbancia Factor de

Fc
( D.O ) neta Calibración Promedio Concentración

Blanco 0.001 ------ ------ ----- FC = 0.5/0.024

Estándar 1  ( 0.5 mg/ml ) 0.025    

Estándar 2 ( 1.0 mg/ml ) 0.052

------

Estándar 3 ( 2.0 mg/ml ) 0.098  

Muestra 1 - ------

Muestra 2 - ------
 Complete la siguiente tabla

  T–1 T–2 T–3

Identificación de acetaldehído      
Coloración obtenida
Cantidad de etanol (mg % )      

INTERPRETAR LOS RESULTADOS OBTENIDOS

Completar cuestionario
Identificación del acetaldehído Cuantificación del etanol