INGENIERÍA DE PROCESOS

UPSTREAM
MEDIO DE CULTIVO
 MEDIO DE CULTIVO
FUENTE COMPONENTE g/L Soluciones TEMPERATURA DE
DESCOMPOSICIÓN.
(°C) /min
Glucosa 55 Solución I 160
Carbono 400 ml
Ácido Butírico 4 Solución II Se 163.5
añade al medio
en una solución
de 100 ml
Buffer KH2PO4 0.5 Solución III 400
fosfato K2HPO4 0.5 En 100 ml de 340
agua
Nitrógeno Extracto de levadura 1 Solución IV no existen datos
en 100 ml de disponibles
Triptona 0.5 agua no existen datos
disponibles
NaCl 0.1 801
MgSO4.7H2O 2 Solución V >150
Minerales En 100 ml de
MnSO4 H2O 0.1 agua 850
FeSO4 7H2O 0.1
Ácido p- 100 285
aminobenzoico mg Solución VI
Vitaminas (Factor de En 100 ml de
crecimiento) agua destilada
Tiamina 100 >70
mg
Biotina 1 Reacción con agente
mg oxidante fuerte

Tabla 1. En la tabla se enlistan los componentes del medio de cultivo, así como una breve descripción de la
temperatura de descomposición o desnaturalización y de las soluciones que deberán de prepararse para
esterilizar el medio de cultivo.

Solución I.
Fuente de carbono.
El compuesto de esta solución es únicamente la glucosa y basándonos en una revisión
bibliográfica, se conoce que es susceptible a reacciones de Maillard.
La reacción de Maillard es una interacción proteína-carbohidrato. de un grupo amino.
Ocurre principalmente en aquellos alimentos que contienen azúcares reductores o lípidos
oxidados y grupos amino de un aminoácido, péptido o proteína, que sufren un procesado
térmico. (Quitral V., 2017).
La solución de glucosa se preparará con 137.5 g diluidos en 400 ml de agua destilada, se
esterilizará por separado y con el conocimiento de que la temperatura de descomposición
química de la glucosa es arriba de los 160°Centígrados; no se tendrá ningún problema al
ser esterilizado mediante el autoclave ya que la temperatura que se usa mediante este
método no supera los 120°C.
Solución II
El ácido butírico se esterilizará por autoclave en una concentración de 40 ml en 100 ml de
agua destilada.

Solución III
Los componentes de esta solución son sales de fosfato; fosfato de magnesio y fosfato de
manganeso, se añadieron a una solución de 100 ml de agua destilada en cantidades de
5g por cada sal, esto con el fin de evitar la interacción con iones divalentes y, por lo tanto,
la formación de precipitados inolubles, que no pueden ser asimilados por el
microorganismo. (Ferreyra M., Abril 2014). La esterilización se realizará por autoclave
dado que la temperatura de descomposición de estas sales se da entre los 340 y 400°.
Solución IV
En esta solución se encuentran los compuestos de extracto de levadura y la Triptona los
cuales se añadieron a una solución de 100 ml de agua destilada, en concentraciones de
10g para el primero y 5g para el segundo compuesto. Estos componentes se esterilizarán
en autoclave dado que no son compuestos termolábiles.
Solución V
Esta solución contiene metales en los compuestos de las sales que son susceptibles a
reacciones de Maillar como el Fe, por lo tanto, esta solución se esterilizará mediante
filtración. La solución a esterilizar se preparará con las siguientes concentraciones: 1 g
NaCl, 20 g MgSO4.7H2O, 1 g MnSO4 H2O y 1 g FeSO4 7H2O en una solución de 100 ml
de agua destilada.
Solución VI
Compuesta por las vitaminas; Tiamina y biotina, el factor de crecimiento; Ácido p-
aminobenzoico, estos compuesto son termolábiles, por lo tanto, no es posible
esterilizarlos mediante fuentes de calor como el autoclave, así que su esterilización se
hará mediante filtración. Con las siguientes concentraciones 1000 mg de Ácido p-
aminobenzoico, 1000 mg de Tiamina y 10 mg de Biotina en una solución de 100 ml de
agua destilada.

Solución II
El ácido butírico se esterilizará por autoclave en una concentración de 40 ml en 100 ml de
agua destilada.
Las soluciones III y IV se mezclarán con la solución I de 400 ml de glucosa estéril,
posteriormente se añadirán las soluciones V y VI. Se añadirá al final La solución II de
ácido butírico con volumen final de 100 ml.
La composición del inoculo es de 1 g de inoculo por 100 ml de cultivo; si se tiene un
cultivo de 1000 ml la composición final del inoculo será de 0.1 g/l

Por lo tanto, el mezclador tendrá siete entradas las cuales se dividirán para el inoculo; la
fuente de carbono solución I, la solución II de ácido butírico, la solución III fuente de
fosfatos, la solución IV fuente de nitrógeno, la solución V fuente de minerales y la solución
VI fuente de vitaminas.
  5 ml Acido
 butírico en 100  1 g de Inoculo por
ml cada 100 ml.

Fuente de carbono
(400 ml)

 137.5 g Glucosa

Fuente de Fosfatos
(100ml) REACTOR
MEZCLADOR
 5g KH2PO4
 5g K2HPO4

MC1 (900 ml)

Glucosa 55 g/l

Ácido butírico 0.5 g/l

Fuente de Nitrógeno Extracto de levadura 1 g/l

(100 ml)
Triptona 0.5 g/l
 10g Extracto
de levadura KH2PO4 0.5 g/l
Fuente de Minerales Fuente de Vitaminas
 5g Triptona (100 ml) (100 ml) K2HPO4 0.5 g/l
 20g MgSO4  1000 mg p- MgSO4 7H2O 2 g/l
 1g MNSO4 aminobenzoico
 1g NaCl  1000 mg Tiamina MNSO4. H2O 0.1 g/l
 1g FeSO4  10 mg de Biotina
 1g FeSO4 NaCl 0.1 g/l

FeSO4 7H2O 0.1 g/l

Inóculo 0.01 g/l

 M.C. 3 (9 L)
M.C. 2 (900 ml)
Glucosa 55.77 g/l
Glucosa 55.57 g/l
Fuente de nitrógeno
Fuente de nitrógeno
Extracto 1 g/l
Extracto 1.05 g/l de levadura
M.C. Inoculado de levadura
0.003g en1 ml M.C. Inoculado Triptona 0.5 g/l
Triptona 0.527 g/l 0.1 en 100 ml

M.C. (99 ml)

Glucosa 55 g/l
100 mL 100 mL 1L 1L
Fuente de nitrógeno
REACTOR 1 MEZCLADOR 1 REACTOR 2 MEZCLADOR 2
Extracto 1 g/l
de levadura

Triptona 0.5 g/l M.C. 2 (1 L)

M.C. 1 (100 ml) 20 hrs. M.C. 2 (1 L)
Ácido Butírico 0.05 g/l 20 hrs. Glucosa 55 g/l
Glucosa 48 g/l M.C. 3 (9 L)
Glucosa 49.8 g/l
Fuente de nitrógeno Glucosa 55 g/l
Fuente de nitrógeno Fuente de nitrógeno
Extracto 1 g/l Fuente de nitrógeno
Extracto 0.5 g/l Extracto 1 g/l
de levadura
de levadura de levadura
Extracto 1 g/l
Triptona 0.5 g/l de levadura
Triptona 0.025 g/l Triptona 0.5 g/l
Biomasa 0.05 g/l 10 L
Biomasa 2.99 g/l Triptona 0.5 g/l
Biomasa 0.5 g/l
Ácido Butírico 0.09 g/l Biomasa 0.29 g/l
Ácido Butírico 0.9 g/l Ácido Butírico 1.6 g/l
Butanol 0.15 g/l Ácido Butírico 0.16 g/l
Butanol 1.5 g/l Butanol 3 g/l
M.C. Inoculado Butanol 0.3 g/l
100 g en 100 L

24 hrs.
24 hrs.
10 L
1000 L
100 L 100 L

REACTOR 5 MEZCLADOR 5 MEZCLADOR 4 REACTOR 3

REACTOR 4

M.C. 3 (10 L)
1000 L M.C. 4 (90 L)
M.C. 5 (900 L) M.C. 4 (100 L)
Glucosa 46.26 g/l
Glucosa 55 g/l
Glucosa 55 g/l Glucosa 45 g/l
Fuente de nitrógeno
M.C. 5 (1000 L) Fuente de nitrógeno
Fuente de nitrógeno M.C. 5 (900 L) Fuente de nitrógeno M.C. Inoculado M.C. 4 (90 L) M.C. Inoculado
10 g en 10 L Extracto 1 g/l 1g en 1L
Glucosa 44.43 g/l Extracto 1 g/l
Extracto 1 g/l Glucosa 56.11 g/l Extracto 1 g/l Glucosa 56 g/l de levadura
de levadura
de levadura de levadura
Fuente de nitrógeno Triptona 0.5 g/l
Fuente de nitrógeno Triptona 0.5 g/l Fuente de nitrógeno
Triptona 0.5 g/l Triptona 0.5 g/l
Extracto 1 g/l Biomasa 3.77 g/l
Extracto 1 g/l Biomasa 0.37 g/l Extracto 1 g/l
de levadura Biomasa 4.68 g/l
Biomasa 0.46g/l de levadura de levadura
Ácido Butírico 1.99 g/l
Triptona 0.5 g/l Ácido Butírico 0.19 g/l
Ácido Butírico 0.207 g/l Triptona 0.5 g/l Ácido Butírico 2.07 g/l Triptona 0.5 g/l
Butanol 5.55 g/l
Biomasa 5.78 g/l Butanol 0.55 g/l
Butanol 0.70 g/l Butanol 7.05 g/l

Ácido Butírico 2.14 g/l

Butanol 8.72 g/l