UNIVERSIDAD NACIONAL

FEDERICO VILLARREAL
Facultad de Tecnología Médica
Laboratorio y anatomía patológica

Alfa- Autor: Obregon Chaupis Miguel Angel

fetoprot Semestre Académico 2021- II

 Universidad Nacional
Federico Villarreal

Los marcadores tumorales (MT) son

sustancias producidas por las células se encuentran
cancerígenas, o bien por otras células del indicadores bioquímicos que Algunos
Estos son pueden ser cuantificados en normalmente en etapas
cuerpo en respuesta a la presencia de un marcadores embrionarias y fetales
cáncer o en ciertas situaciones y patologías sangre, orina, líquido ascítico o cuando hay
benignas o malignas. pleural alteraciones
Sin embargo tumorales su
concentración se
incrementa
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Es la mayor
fracción
El Embrión posee
1 de estas es La alfafetoproteína (AFP)
proteínas séricas
la alfa-fetoproteína (AFP),se
le considera el marcador
“universal” para el hepatoma
celular.
es la primera de las
globulinas alfa que aparece
en el suero de los
mamíferos.
la AFP tiene afinidad
por el oxígeno y tiene un papel
importante en el transporte de éste,
remplazando la función de la
hemoglobina fetal.
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Se ha sugerido que una función importante

de la AFP durante la gestación podría estar
relacionada con la supresión de la respuesta
inmune de la madre durante el desarrollo
del embrión.
La alfafetoproteína (AFP) La concentración de
Elaborada por el hígado y el saco esta proteína en el
vitelino suero del feto es muy
alta (1-10 ng/ml)

durante
En el segundo trimestre el hígado se el segundo trimestre del
convierte en la principal fuente de embarazo es en promedio
AFP, ya que el saco vitelino degenera de 30 ng/ml,

Posteriormente es secretada a cuando se inicia una

la circulación fetal mayor síntesis de
albúmina sérica.

finalmente, localizada en el líquido La síntesis de AFP declina

amniótico en concentraciones de gradualmente y desaparece
entre 7 y 20 μg/ml, durante las de 6 a 12 meses después del
semanas 14 y 16 del embarazo. nacimiento.
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el síndrome del tubo

la espina bífida
para la detección de
Puede ser de
anomalías y malformaciones neural abierto
utilidad incluyendo
fetales
los tumores del saco vitelino

el síndrome de Down

cuando el nivel sérico de la el carcinoma hepatocelular

AFP es alto, es un marcador
En los adultos
útil para detectar Por ejemplo el teratoma testicular
enfermedades neoplásicas

entre otros tipos de cáncer

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Federico Villarreal
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Descubrimient
o del
Alfa-
fetoproteina
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En Junio de 1957 el Dr. Rafael Talavera (entonces de

la Cátedra y del Servicio de Pediatría de la
Facultad de Medicina y del Hospital Clínico
universitario de Granada,) con
Romero, Antonio Galdó Villegas y José Pedro Casado,
presenta y defiende
La tesis doctoral titulada “Estudio electroforético de las
proteínas séricas en el feto humano”

1944 1956 1956 La investigación se realiza entre octubre de

Pedersen
Identifico una sustancia en
el suero bovino y lo llamo
“FETUINA”
Borgstrand y czar
en el feto humano hay una
proteína cuya naturaleza y
caracterización no alcanza a
determinar
Borgstrand y czar
en el feto humano hay una
proteína cuya naturaleza y
caracterización no alcanza a
determinar
1956 y junio de 1957 en el laboratorio del
Profesor Casado con suero sanguíneo de fetos,
prematuros, Recién Nacidos Y Madres
procedentes de la Clínica universitarias de
Obstetricia que dirigía el Profesor Bedoya, la
Clínica de la Maternidad Provincial que dirigía
el Dr. Baldomero Bueno y la Clínica de
Pediatría
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En conclusión

Se comprueba la existencia
de una proteína que es
específica del feto humano,
que es independiente del
sexo
que se ubica entre la albúmina
y la globulina alfa1

su Presencia decrece Con el

desarrollo fetal
desapareciendo hacia el
séptimo mes

su detección es baja en el cordón

umbilical e inexistente En la sangre
materna.
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Estructura y
propiedades
del
Alfa-
fetoproteina
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El gen de la AFP se localiza en el cromosoma 4

en la región 4q11-q22,

proteína de 69 a 70 kDa, que consiste de una

cadena polipeptídica de 590 residuos de
aminoácidos y un contenido de carbohidratos
de entre 3.0 a 5.0%.
La vida media de esta proteína
es de 5 a 7 días.

Tiene gran homología con

Debido a que la alfafetoproteína la albúmina, incluida la masa
es de la familia de las proteínas molecular similar que
multigenicas varía entre 65 a 70 kDa.

Esta familia consta de 4

miembros:
 Albumina Se caracterizan
 Proteína de unión de Vit D por presentar
Residuos de cisteína que se pliegan y unidos por puentes
 Proteína alfa albumina disulfuro, lo que da por resultado 3 dominios.
 AFP
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Dentro de esta familia, únicamente la AFP y la

proteína de unión a la vitamina D están glicosiladas.

Aunque
la AFP y la albúmina humanas son
similares en estructura general, además de contener
carbohidratos hay ciertas partes de las moléculas
que las diferencian, principalmente en su estructura
secundaria
Además
de que

la AFP es una glicoproteína que posee una bisagra

que une a los dominios 2 y 3, y que confiere cierta
plasticidad y facilita la interacción con otras
moléculas.
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Isoformas del Este procesamiento se efectúa

alfafetoproteína tanto en individuos sanos como
cuando hay alguna patología,
El citosol como el hepatoma,
Glucanos (azucares)
entre otras
Glicosilación de es Esta glicosilación se da Retículo
proteínas en tres endoplasmático
compartimientos
proteínas

Es la forma mas compleja de modificación de El aparato de Golgi

biomoléculas.

Estas enzimas se encuentran en

las glicosidasas y las diferentes tejidos y su función es
Elaboran las enzimas glicosiltransferasas dependiente de su localización
que participan en la
glicosilación

Núcleo No es participe en la elaboración de los azucares

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la AFP del saco vitelino difiere de la de origen hepático.

Esto sugiere que también hay diferencias cuantitativas y cualitativas en las enzimas de la
glicosilación en cada microambiente tumoral que favorecen isoformas
(conocidas como glicoformas).

Desde los años sesenta se han

empezado a utilizar las lecitinas con el receptor-ligando a glicanos sobre ha permitido dilucidar
Son moléculas de y debido a sus
como herramientas de superficies celulares, las lectinas están algunas características
origen no inmunes interacciones
investigación implicadas en varios procesos biológicos. estructurales de la
porción glicosídica de la
AFP.
Lens culinaris (LCA), que reconoce
alfa-manosa y es específica por
reconocer estructuras N-glicosídicas
en la asparagina 232 en el dominio 2
de la AFP

se han identificado 3 variantes principales de AFP. Estas 3 glicoformas son denominadas AFP-1, AFP-2 y AFP-3.

AFP-1 AFP-2 AFP-3

se presenta en hepatitis crónica, La AFP-3 es un marcador tumoral en hepatoma celular y es

en cirrosis, y constituye una fracción grande La AFP-2 deriva de los tumores de reconocida por LCA, teniendo un residuo adicional de α1-6
en el total de AFP en las enfermedades no saco vitelino y puede detectarse en el fucosa que se une a N-acetilglucosamina por medio de la enzima
malignas del hígado. suero materno durante el embarazo. fucosiltransferasa 8 (Fut8), que es necesaria para producir el
núcleo fucosilado de las AFP
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En estudios realizados en humanos,

Esto sugiere que la AFP-3 tienen un
se encontró que la AFP-3 puede detectarse
potencial muy rápido para
en el suero de aproximadamente el 35% de
detectar a distancia el crecimiento y
los pacientes con hepatoma celular en
metástasis de los hepatomas.
tumores < 2 cm

Se han demostrado que al trabajar con AFP proveniente de

pacientes con diferentes tumores como hepatoma celular,
líquido amniótico (columna bífida), cáncer de intestino, entre
otros, encontraron que hay cambios en los carbohidratos de
la AFP, es decir la glicosilación se altera.
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Se ha demostrado también que la AFP en las células HLE que son de una sugiriendo con esto que la AFP,
tiene capacidad de inducir apoptosis en Sin embargo línea celular de hepatoma, que no también regula señales de muerte
las células BeI-7402 producen AFP no hay inducción de celular programada.
apoptosis,

También se ha demostrado que la AFP es regula la expresión de moléculas del complejo

capaz de interactuar con los macrófagos e
induce que haya disminución de su
actividad fagocítica
De la misma principal de histocompatibilidad
forma
Además, la AFP inhibe la actividad de las
células asesinas naturales (NK).

bajos niveles de IL-12 y TNF-alfa un patrón de

Hay estudios que sostienen que las inducen citocinas que impiden la eficiente respuesta
células dendríticas tratadas con AFP inmune antitumoral.

Estos resultados sugieren que el carcinoma hepatocelular escapa del control inmunológico y
además, muestran que la AFP no tiene funciones solamente en el útero y como marcador de
alteraciones fetales y de cáncer.
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El carcinoma
hepatocelular
HCC
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Membrana celular
suelen aparecer
antígenos oncofetales

AFP

carcinoembrionario

Los antígenos oncofetales son moléculas

Transformación presentes en tejidos embrionarios normales, que
maligna de diversos dejan de expresarse durante la maduración fetal.
tumores
También pueden
secretarlos al torrente
sanguíneo

Estos pueden ser considerados como marcadores de

diagnostico
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La AFP es un antígeno
Es la glicoforma que se encuentra
oncofetal con propiedades
en pacientes con HCC y los niveles no
AFP-3 dependen del tamaño o número de
inmuno Reguladoras
intrínsecas y, en el caso de
tumores, metástasis o recurrencia
HCC, este es un antígeno de
tumor.
actúa suprimiendo la
activación del sistema
inmunitario

Resulta interesante resaltar el efecto Representan el 5 al 10%

favorecedor de la diseminación del de los linfocitos TCD4
cáncer, que estas Células T manteniendo así la homeostasis de los linfocitos T reguladores
CD4+CD25+FOXP3+ pueden ocasionar este sistema y favoreciendo la CD4+ CD25+FOXP3+
al suprimir la respuesta inmune36 tolerancia hacia auto antígenos

COMPLEJO MAYOR DE
HISTOCOMPATIBILIDAD
(MHC)
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Pruebas de
Detección
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PRUEBA RAPIDA
AFP DE CASSETTE

El casete de prueba rápida AFP (sangre

entera / suero / plasma) es un inmunoensayo
cualitativo basado en membrana para la
detección de AFP en sangre completa, suero
o plasma.
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Anticuerpos anti-AFP
recubiertos en la
membrana.

La mezcla migra hacia arriba

en la membrana
cromatográficamente por
acción capilar para reaccionar
con los anticuerpos anti-AFP
en la membrana y generar
una línea de color.

Región de Región de
control prueba
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【 MATERIALES 】
 Cassettes de prueba
 Goteros
 Búfer
 Ficha Técnica
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【 ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD 】

Almacene como está empaquetado a

temperatura ambiente o refrigerado (2-30 °
C). La prueba es estable hasta la fecha de
vencimiento impresa en la bolsa sellada o en la
etiqueta del recipiente cerrado. La prueba
debe permanecer en la bolsa sellada hasta su
uso. NO CONGELAR. No usar más allá de la
fecha de vencimiento.
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【 INSTRUCCIONES DE
USO 】
Permita que la prueba, la muestra, el tampón y / o los controles alcancen la temperatura ambiente (15-30 ° C) antes de la prueba.

1. Lleve la bolsa a temperatura ambiente Para muestras de Suero o Plasma:

antes de abrirla. Retire el casete de prueba  Sujete el gotero verticalmente y transfiera 1 gota de suero o plasma (aproximadamente
de la bolsa sellada y úselo dentro de una 25 uL) al pocillo de la muestra del casete de prueba, luego agregue 1 gota de búfer
hora. (aproximadamente 40ul) e inicie el temporizador. Vea la ilustración a continuación.

Para la muestra de sangre entera de venopunción:

 Sujete el gotero verticalmente y transfiera 2 gotas de sangre completa (aproximadamente
2. Coloque el casete sobre una superficie 50 uL) al área de la muestra, luego agregue 1 gota de búfer (aproximadamente 40 uL), e
limpia y nivelada. inicie el temporizador. Vea la ilustración a continuación.
Para la muestra de sangre entera de punción digital:
 Para usar un tubo capilar: llene el tubo capilar y transfiera aproximadamente 50uL
transfiera aproximadamente al área de la muestra del casete de prueba, luego agregue
1 gota de tampón (aproximadamente 40 uL) e inicie el temporizador. Vea la ilustración a
3. Espere a que aparezcan las líneas de continuación.
color. Lea los resultados a los 10 minutos.
No interprete el resultado después de 20
minutos.
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25 μl
1 gota

40 μl
1 gota
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50 μl
2 gota

40 μl
1 gota
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50μl

40 μl
1 gota
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【 INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS 】

Región de Región de
control prueba

POSITIVO: Aparecen dos líneas de
colores distintos
 Una línea de color debe estar en la
región de control (C)
 otra línea de color debe estar en la
región de prueba (T).
NEGATIVO: Aparece una línea de color
en la región de control (C). No aparece
una línea de color aparente en la región
de prueba (T).
INVALIDO: La línea de control no
aparece. Un volumen de muestra
insuficiente o técnicas de
procedimiento incorrectas son las
razones más probables para la falla
de la línea de control.
Revise el procedimiento y repita
la prueba con un nuevo casete de
prueba. Si el problema persiste,
deje de usar el kit de prueba
inmediatamente y comuníquese
con su distribuidor local.
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【 LIMITACIONES 】

1. El casete de prueba rápida AFP (sangre entera / suero / plasma) es solo para uso
diagnóstico in vitro. La prueba debe usarse para la detección de AFP en muestras de sangre
completa, suero o plasma solamente. Ni el valor cuantitativo ni la tasa de aumento en la
concentración de AFPpueden determinarse mediante esta prueba cualitativa

2. El casete de prueba rápida de AFP (sangre total / suero / plasma) solo indicará la presencia
de AFP en la muestra y no debe usarse como el único criterio para el diagnóstico de
carcinoma hepatocelular o defectos del tubo neural abierto fetal.

3. El casete de prueba rápida de AFP (sangre entera / suero / plasma) no puede detectar
menos de 10 ng / ml de AFP en las muestras. Un resultado negativo en cualquier momento
no excluye la posibilidad de carcinoma hepatocelular o defectos fetales del tubo neural
abierto.

4. Al igual que con todas las pruebas de diagnóstico, todos los resultados deben interpretarse
junto con otra información clínica disponible para el médico.
Si el resultado de la prueba es negativo y los síntomas clínicos persisten, se recomiendan
pruebas adicionales con otros métodos clínicos. Un resultado negativo no excluye en ningún
momento la posibilidad de carcinoma hepatocelular o defectos del tubo neural abierto fetal.
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【 VALORES ESPERADOS 】

El casete de prueba rápida AFP (sangre entera / suero / plasma) se ha

comparado con una prueba comercial líder de AFP EIA. La correlación
entre estos dos sistemas es superior al 99,1%.
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AFP ELISA

Determinación cuantitativa de la concentración de Alfa-

Fetoproteína (AFP) en suero humano mediante ensayo de
quimioluminiscencia en microplacas.
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En este método, el calibrador AFP, la

muestra o control del paciente se
adicionará en primer término a un pozo
recubierto con streptavidina.

streptavidina
Proteína bacteriana pequeña que se une
con la vitamina biotina con la que es muy
afín. Esta combinación estreptavidina-
biotina puede usarse para juntar
moléculas como los radioisótopos con
anticuerpos monoclonales.
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Los anticuerpos monoclonales

marcados con biotina y marcados con
enzimas (dirigidos contra epítopes
claramente diferenciados AFP) son
adicionados y Mezclados los reactantes.
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Pipetear 0.025 ml (25μl) de la referencia adecuada del

suero, control o muestra dentro del pozo asignada.

Agitar suavemente la microplaca durante 20-

30 segundos para mezclar y cubrir.

Incubar durante 45 minutos a temperatura

ambiente.

Eliminar el contenido de la microplaca por

decantación o aspiración. Si se hace por
decantación, golpear suavemente y secar la placa
con papel absorbente.

Adicionar 350μl de solución de lavado decantar,

golpear suavemente y secar o aspirar. Repetir el
procedimiento 4 veces mas para un total de 5
lavados.
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Adicionar 0.100ml (100μl) del reactivo

trazador de AFP a cada pozo. Es muy
importante dispensar todos los reactivos
cerca de la base del pozo recubierto.
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Adicionar 0.100 ml (100μl) de la solución del sustrato

de trabajo a todas la pozos.

Agregar siempre reactivos

en el mismo orden para minimizar las diferencias en
tiempo de reacción entre los pozos.
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Incubar a temperatura
ambiente durante 5
minutos en oscuridad.

La actividad de la enzima
presente en la superficie
del pozos se cuantifica
mediante reacción con un
sustrato adecuado para
producir luz medible con un
iluminómetro.
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El empleo de varias referencias de suero

de niveles conocidos de antígenos alfa-
fetoproteínas (AFP) permite la
construcción de una curva de dosis
respuesta con respecto de su actividad y
concentración.

A partir de la comparación con la

curva de dosis respuesta, se puede
correlacionar la actividad de una
muestra desconocida con la
concentración AFP.

RLU son las siglas del nombre en inglés de

“Relative Luminescence Units” las cuales sirven
para medir la intensidad de la luz.
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i-CHROMATM AFP https://www.youtube.com/watch?v=2XxT6UA5kG8&list=LL&in

dex=19&t=36s
ichroma™ AFP has sido diseñado para medir Alfa Feto
Proteína (“AFP”) de manera cuantitativa en sangre
completa, suero y plasma, está basado en el principio
de inmunoensayo de flujo lateral fluorescencia
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