Módulo 4.

Proteínas.
Sergio Armando Loza Rosas, PhD.

Universidad de Boyacá
Tunja
COMPETENCIAS ESPECIFICAS

•Reconocer la relación que existe entre la secuencia de

aminoácidos que conforman una proteína, y como las
interacciones intermoleculares que se forman entre las cadenas
laterales estabilizan los distintas niveles estructurales de la
proteína y le otorgan funciones biológicas especificas.

•Describir los elementos de la estructura primaria, secundaria,

terciaria y cuaternaria de las proteínas.

•Explicar el significado de los términos pKa y PI (punto

isoeléctrico) tal y como se aplican a aminoácidos y proteínas.
 CRITERIOS DE EVALUACIÓN

•El estudiante distingue entre oligopéptidos, polipéptidos y proteínas y describe el

enlace que une los residuos de aminoácidos en estos compuestos.
•El estudiante define los niveles estructurales de las proteínas: primario,
secundario, terciario y cuaternario.
•Describe las distintas funciones que llevan a cabo las proteínas en el organismo y
clasifica las proteínas de acuerdo a los grupos prostéticos con los cuales se
conjugan y tipos de estructuras,
•Reconoce la relación que existe entre la estructura de las proteínas y la función
que lleva a cabo.
•El estudiante describe las fuerzas covalentes y no-covalentes responsables de
estabilizar cada nivele estructural de las proteínas.
•El estudiante reconoce el concepto de desnaturalización y enlista las principales
causas de desnaturalización de proteínas.
BIBLIOGRAFÍA
Biochemistry Concepts and Connections. Christopher K. Mathews. 2013. Pág 178 – 181, 184-189,
193-197, 202-206.
Principios de Bioquímica. H. Robert Horton. 2008. Pág 84 – 91, 95-124.
Principios de Bioquímica Lehninger. David L. Nelson. 2000. Pág 116 – 118, 120-135, 147-153.
Las proteínas son esenciales para las estructuras y
actividades de la vida
Proteínas: Polímeros construidos a partir de aminoácidos unidos a través de
enlaces peptídicos. La función biológica que desempeñan depende de su forma
tridimensional.

Tipo de proteína Función Ejemplo

Sirven como componentes • Cabello y uñas.
Proteínas estructurales
estructurales de las células. • Tendones y ligamentos.
Generan fuerza mecánica y
Proteínas contráctiles • Mielina: músculos.
electroquímica.
Proporcionan fuentes de • Clara de huevo: desarrollo
Proteínas de reserva
aminoácidos para otros procesos. del embrión.
Bloqueo y combate de
Proteínas de defensa • Anticuerpos.
infecciones.
• Hemoglobina: transporte
Proteínas de transporte Transporte para otras moléculas.
de oxigeno.
Envían la información a diferentes
Proteínas mensajeras • Insulina
partes de la célula.
Enzimas Regulan y promueven todas
reacciones químicas de la célula.
 Proteínas Tienen Estructuras Variables
• No tienen estructuras regulares como los ácidos nucleicos
ya que los 20 aminoácidos tienen diferentes propiedades
químicas y físicas.

• La secuencia de aminoácidos en las proteínas puede

determinarse directamente mediante secuenciación del
polipéptido, o indirectamente, mediante secuenciación del
ADN que codifica para el polipéptido.

• La secuencia de aminoácidos puede usarse para predecir

propiedades químicas y físicas de la proteína, y su
mecanismo de acción en los organismos vivos.
Estructura Primaria (1º):
La secuencia de aminoácidos en la cadena
polipéptida o en las cadenas si la proteína
consiste de varias.

Estructura Secundaria (2º):

El arreglo espacial derivado de el enrollamiento
o plegamiento del polipéptido.

Estructura Terciaria (3º):

El arreglo espacial del polipéptido completo
incluyendo sus cadenas laterales (i.e., Grupos
R).

Estructura Cuaternaria (4º):

El arreglo espacial de las diversas cadenas
polipéptidas (subunidades) que componen la
proteína.
 Estructura Primaria: Insulina Bovina
Estructura Primaria (1º):
La secuencia de aminoácidos en la cadena polipéptida o en
las cadenas si la proteína consiste de varias.

• Se indica la abreviatura de tres letras (o de una letra) para cada

aminoácido, así como los puentes de disulfuro.

• La proteína consiste de dos subunidades unidas mediante tres enlaces

de disulfuro, dos que ocurren entre la cadena A y B, y uno que ocurre
dentro de la cadena polipéptida A.
Combinación de Aminoácidos Produce
Gran Diversidad para Polipéptidos
Para una proteína de n residuos, existen 20n posibles
secuencias de aminoácidos. Si la proteína consiste de
100 residuos de aminoácidos, entonces habrían,

20100 ≈ 1.27 x 10130

cadenas polipéptidas de 20 aminoácidos de largo.

El proceso de evolución sólo ha producido una fracción

pequeña del gran número de polipéptidos que son
teóricamente posibles.
 Diversidad de las Proteínas
Dalton (D),
unidad para
Masa
Molecular de
proteínas, es
1/12 la masa
de 12C.

La mayoría Las proteínas

de los pueden
polipéptidos componerse
consisten de de varias
100-1000 cadenas
aminoácidos. polipéptidas
llamadas
subunidades.

Algunas proteínas se sintetizan como una sola cadena polipéptida, que

luego se fragmenta en dos o más cadenas que permanecen asociadas.
 Diversidad de las Proteínas
El % de abundancia de los aminoácidos en las proteínas varía.
Residuo de % en
Aminoácido Proteínas
Gly 7.2
Ala 7.8
Val 6.6 Aminoácidos
Leu 9.1 Más
Ser 6.8 comunes
Glu 6.3
Trp 1.4 Aminoácidos
Cys 1.9 Menos
Met 2.2 comunes
His 2.3

Algunas proteínas se asocian con iones como Zn2+ y Ca2+, ó con

moléculas orgánicas pequeñas, con fosfatos, o con carbohidratos.
Propiedades de las proteínas
Cinco son las propiedades principales que permiten la existencia y
aseguran la función de las proteínas:

1.Amortiguador de pH: Actúan como amortiguadores de pH debido a su

carácter anfótero, es decir, pueden comportarse como ácidos (donando
protones) o como bases (aceptando protones).
2.Capacidad electrolítica: Las cadenas laterales ionizables le permiten
adquirir cargas netas que pueden usarse para movilizar la proteína al
aplicar un campo eléctrico.
3.Especificidad: Cada proteína tiene una función específica que está
determinada por su estructura primaria.
4.Estabilidad: La proteína debe ser estable en el medio donde
desempeñe su función. Para ello, la mayoría de proteínas acuosas crean
un núcleo hidrofóbico empaquetado.
5.Solubilidad: Es necesario solvatar la proteína, lo cual se consigue
exponiendo residuos de similar grado de polaridad al medio en la
superficie proteica. Se mantiene siempre y cuando los enlaces fuertes y
débiles estén presentes. Si se aumenta la temperatura y el pH se pierde
la solubilidad.
Las proteínas pierden su función biológica si se afecta su
estructura tridimensional.

Desnaturalización: proceso en el cual las cadenas polipeptídicas se desenroscan,

por lo que pierden su forma tridimensional y como resultado, su función.

Causas

•El calor desnaturaliza rápidamente a las proteínas.

•Cambios en la concentraciones de sales.

•Cambios de acidez o basicidad.

•Presencia de detergentes.
 Estabilidad de la Proteína durante la
purificación
Una vez que la proteína se remueve de su ambiente natural, ésta
se expone a los siguientes factores que hay que controlar para
evitar dañar la proteína irreversiblemente.
1. pH: Soluciones amortiguadoras controlan el pH en donde las
proteínas son estables, para evitar su denaturalización (alteración de
su estructura tridimensional) o su degradación química.
2. Temperatura: Normalmente se hace la purificación a 0ºC ó en hielo.
3. Enzimas degradativas: Éstas son proteasas y nucleasas que son
liberadas de la célula. Se usan inhibidores o temperaturas bajas para
minimizar sus efectos negativos.
4. Oxidación o Adsorción: Contacto con aire (oxidación), o con vidrio o
plástico causa denaturalización de algunas proteínas. Se intenta
minimizar la espuma y las soluciones se mantienen concentradas.
5. Almacenamiento a Largo Plazo: Se congela a -80ºC ó -196ºC
(temperatura de N2 líquido), o se guardan bajo N2 or Ar gaseoso.
 Cuantificación de las Proteínas
Ensayos o procedimientos que utilizan
enzimas como detección de la proteína
son los más convenientes.

Inmunoensayo:
Protocolo que utiliza
anticuerpos, que son proteínas
producidas por el sistema inmune
de un animal en respuesta a la
introducción de una sustancia
extraña al animal (antígeno).
Se utiliza una reacción acoplada
a una acción enzimática.
ELISA = “Enzyme-linked
Immunosorbent Assay”
Figure 5-3
 Cuantificación de las Proteínas
Espectroscopía
A = log I0/I = cl Los polipéptidos
Conociendo A, 
absorben
y l, se determina
fuertemente en
concentración c
la región UV
de la proteína en
(200-400 nm)
solución.
debido a los
grupos R que
Se detecta son aromáticos
proteína a (Phe, Tyr, Trp),
50-100 pero no en la
g/mL
región visible
(400-750 nm).
 Cuantificación de las Proteínas
Ensayo de Bradford
Protocolo que utiliza un tinte, Coomassie Brilliant Blue, que
se enlaza a la proteína bajo condiciones ácidas, donde la
absorción máxima cambia de 465 nm a 595 nm.

Se enlaza a los
grupos amino de
Se detecta las proteínas
proteína a mediante
1 g/mL interacciones
electrostáticas y
a aminoácidos
aromáticos.

Page 96
 Procedimientos de Fraccionación
Disponibles para Purificar Proteínas
Las proteínas se purifican mediante procedimientos de fraccionación
que se aplican en pasos independientes dependiendo de la proteína.
 Estrategia General en la
Secuenciación de Proteínas

Pasos 1 – 3
Conocimiento de la secuencia
de aminoácidos es necesaria
para determinar la estructura y
función de una proteína.

Insulina bovina fue la primera proteína secuenciada en el 1953 por Frederick Sanger.
 Estrategia General en la
Secuenciación de Proteínas

Pasos 3 – 5
 Reactivo Sanger Puede Marcar el
Amino-Terminal de las Proteínas

Reactivo
Sanger

Hidrólisis de la proteína seguido de cromatografía

identifica el N-terminal.
Otro Reactivo para Análisis del N-Terminal

Puede reaccionar con –NH2 de lisina.

Se usa para establecer el número de polipéptidos (subunidades)

diferentes en una proteína porque el amino terminal de cada
polipéptido reaccionará con cloruro de dansilo.
 Ruptura de Enlaces de Disulfuro

reducido
agente reductor
oxidado

Otro agente reductor que

se usa es Ditiotreitol:
Alquilación de los Grupos Sulfhidrilos

Iodoacetato evita que los enlaces de

disulfuro se vuelvan a formar.
 Estrategia General en la
Secuenciación de Proteínas

Pasos 1 – 2

Identificación del N-terminal Con

de las proteínas con DNFB, -mercaptoetanol
cloruro de dansilo, o PITC. o ditiotreitol.

Con diversas enzimas o reactivos

(Tripsina, Quimotripsina, CNBr).
 Digestión con Tripsina o Quimotripsina
Produce Fragmentos de Polipéptidos
Lys, o Corta en lado
C-terminal
Arg
de Lys o Arg.

Phe, Tyr, Corta en lado

o Trp C-terminal
de Phe, Tyr,
Trp.

chymotrypsin

Tripsina
Quimotripsina N-Met–Glu–Arg–Phe–Val–Lys–Tyr–Ala-C
Otras Enzimas que Producen
Fragmentos de Polipéptidos
 Tratamiento Químico con
CNBr Produce Fragmentos
Met Corta en lado
C-terminal de Met.

Serina

lactona: ester cíclico

homoserina: serina
con un –CH2 adicional.
Método para Secuenciación de Proteínas

Pasos 3 – 5

Degradación
Edman no
destruye la
cadena
polipéptida.
 Degradación Edman Puede
Realizarse Secuencialmente

Identidad del derivado del

"Phenylthiohydantoin aminoácido se determina
derivative" mediante cromatografía (HPLC).
 Espectrometría de Masa Puede Usarse
para Caracterizar Proteínas

"Electrospray Ionization" - técnica usada para crear iones de

macromoléculas; consiste en crear un aerosol de la solución del
péptido usando un capilar a voltaje alto para crear gotas cargadas
eléctricamente. El N2 evapora el solvente y en el proceso se protonan
las cadenas laterales de Arg y Lys. Los iones pueden tener cargas
+0.5–+2 por cada kD y se separan a base de masa/carga.
Producción de Fragmentos del
Polipéptido que Solapan
 Estructura de las Proteínas:
Niveles de Organización
Estructura Primaria (1º):
La secuencia de aminoácidos en la cadena polipéptida o en
las diversas cadenas si la proteína consiste de varias.
Estructura Secundaria (2º):
El arreglo espacial local del espinazo del polipéptido sin
tomar en cuenta las conformaciones de los Grupos R.
Estructura Terciaria (3º):
El arreglo tridimensional del polipéptido completo,
incluyendo sus cadenas laterales (i.e., Grupos R).
Estructura Cuaternaria (4º):
El arreglo espacial de las diversas cadenas polipéptidas
(i.e., subunidades) que componen la proteína.
Niveles de Organización en las Proteínas

Primary structure (amino acid sequence in a polypeptide chain)

Niveles de Organización en las Proteínas
Niveles de Organización en las Proteínas
Niveles de Organización en las Proteínas
 Grupo Peptídico en las Proteínas
Estudios de estructura de Rayos X de
aminoácidos y dipéptidos indican que
el Grupo Peptídico es plano y rígido.
Enlace peptídico exhibe ~40% de
carácter de doble enlace.
El enlace C–N (1.33 Å) es más corto
que el enlace N–C (1.46 Å).

El enlace C=O (1.24 Å) es más largo

que el enlace C=O (1.23 Å).
Conformación más estable para el
grupo peptídico es trans, pero 10% de
los residuos de Prolina son cis.
 Espinazo de la Cadena Polipeptida
El espinazo o la cadena principal de una proteína se
refiere a los átomos envueltos en los enlaces peptídicos,
ignorando las cadenas laterales de los aminoácidos.

El espinazo puede dibujarse como una secuencia de

grupos péptidos planos (cuadros mostrados arriba).
La conformación de la cadena principal de la proteína
puede describirse mediante dos ángulos dihedrales
(de rotación o de torsión) alrededor de dos enlaces claves.
 Hay libre rotación alrededor de los
enlaces Ca–C y Ca–N

psi:
Alrededor del
C–C

phi:
Alrededor del
C–N
 Estructuras Secundarias
Regulares en las Proteínas
Hoja 
Hélice 
Plegada

Son estructuras 2º regulares por

tener valores  y  repetidos.

Algunos aminoácidos favorecen

una estructura 2º sobre la otra.

Otros aminoácidos rompen con

la estructura secundaria regular
(Pro, Ile, Tyr).
Estructura Secundaria
Regular: Hélice 
Propiedades:
1. Gira hacia la derecha
2. 3.6 residuos / vuelta
3. Enlaces de hidrógeno
entre C=O y N–H a
cuatro residuos de
distancia.
4. Largo promedio es de
12 residuos ó 18 Å.
5. Cadenas laterales
(oro) proyectan hacia
afuera de la hélice.
 Estructura Secundaria
Regular: Hoja  Plegada
Propiedades:
1. Ocurre Antiparalela y
Paralela.
2. 2 residuos a 7.0 Å.
3. Enlaces de hidrógeno
entre C=O y N–H de
residuos bien distantes.
4. Pueden contener 2-22
cadenas polipéptidas. Cadena lateral de
color magenta.
5. Cadenas laterales
(violeta) sucesivas
proyectan hacia lados
opuestos de la hoja.
Hoja  Plegada Antiparalela y Paralela

La más
común es la
antiparalela,
donde ocurre
interacción
via enlaces
de hidrógeno
más efectiva.
 Tipos de Proteínas
Proteínas Fibrosas:
Aquellas de conformación alargada y rígida, que
tienden a formar fibras.
Ejemplos:  Queratina, Colágeno

Proteínas Globulares:
Aquellas de conformación compacta y de muchos
dobleces en la cadena polipéptida.
Ejemplos:

Mioglobina Hemoglobina
 Proteína Fibrosa:  Queratina
Principal componente de la capa
epidermal: pelo, cuernos, uñas, plumas.
Es rica en
Cisteína que
forma enlaces
de disulfuro
que
entrecruza las
cadenas
polipéptidas.

Figure 6-15a El arreglo

“coiled coil”
Consiste de dos hélices  que se enroscan también se
una alrededor de la otra (“coiled coil”). hallan en las
Tiene una unidad repetitiva de 7 residuos proteínas
con cadenas laterales no-polares en las globulares.
posiciones a y d que promueven la
asociación de las cadenas polipéptidas.
 Proteína Fibrosa: Colágeno
Componente importante del tejido conectivo tal
como hueso, diente, cartilado, tendón, y matriz
fibrosa de la piel y vasos sanguíneos.

Consiste de tres hélices que NO son hélice  ya que

contienen residuos de Prolina que causan que la
cadena polipéptida asuma conformación de hélice con
giro hacia la izquierda donde se observan como 3
residuos por cada vuelta.

El 30% de los residuos son Glicina y 15-30% de los

residuos son Prolina o sus derivados.

La secuencia de aminoácidos consiste de una

repetición de la secuencia Gly-X-Y por un segmento
de ~1000 residuos, donde X=Pro y Y=derivado de Pro.
Estructura Terciaria de Proteínas Globulares
La estructura terciaria (3º) describe el doblamiento de los elementos de
estructura secundaria (2º) y especifica las posiciones de los átomos en la
cadena polipéptida, incluyendo sus cadenas laterales o grupos R.

Las cadenas laterales de los aminoácidos se distribuyen en las

proteínas globulares según su naturaleza química.

1. Los residuos no-polares (Val, Leu, Ile, Met and Phe) se encuentran en
el interior mayormente, lejos del contacto con solvente acuoso.
2. Los residuos polares cargados (Arg, His, Lys, Asp, y Glu) usualmente
se encuentran en la superficie de la proteína en contacto con el agua.
3. Los residuos polares sin carga (Ser, Thr, Asn, Gln, y Tyr) pueden
encontrarse en la superficie de la proteína pero también en el interior
donde participan de enlaces de hidrógeno con otros grupos.
4. La mayoría de las proteínas son compactas; es decir, su interior está
eficientemente empacado con átomos, excluyendo el agua.
 Ubicación de los Aminoácidos
en Hélice  y en Hoja  Plegada
Distribución de los
aminoácidos:

Residuos Residuos
Polares: No-Polares:
Violeta Oro

Residuos polares se
distribuyen en un lado y
residuos no-polares se
distribuyen en el otro lado de
la estructura secundaria.

Hélice  de Hoja  Plegada de

Mioglobina de ballena Concanavalina A
 Ubicación de los Aminoácidos
en las Proteínas Globulares

Residuos Residuos
Polares: No-Polares:
Verde Naranja

Exterior Interior
de la de la
Proteína Proteína

Citocromo c equino
 Clasificación de Proteínas Globulares
Elementos de estructura 2º ocurren en diferentes proporciones y
combinaciones en las proteínas.
Contenido de hélice  y hoja  plegada puede usarse como criterio para
clasificar las proteínas globulares.
Proteínas  Proteínas  Proteínas a/
~30% de
cada
elemento

Citocromo b562 Inmunoglobulina Dehidrogenasa

 Estructura Supersecundarias en las
Proteínas Globulares
Surge de la combinación de varios elementos de estructura secundaria
que forman estructuras supersecundarias llamadas motivos (“motifs”).

Llave
 Horquilla   Griega
 Dominios en la Estructura Terciaria
de las Proteínas Globulares

Dominios: Dominio
Dos o más N-terminal
agregados (azul claro)
globulares de enlaza NAD+, y
40-200 residuos Dominio
de aminoácidos C-terminal
que usualmente (anaranjado)
tienen una enlaza
función gliceraldehido-
característica. 3-fosfato.

Gliceradehido-3-fosfato
Dehidrogenasa
 Estructura Cuaternaria de las Proteínas
La estructura cuaternaria (4º) describe el arreglo espacial de las diversas
cadenas polipéptidas (i.e., subunidades) que componen la proteína.

2

2 Proteínas con
Hemoglobina
más de una
consiste de 4
subunidad se
subunidades:
llaman
1, 2, 1, 2. 1 oligomeros.
1

Estructura Cuaternaria de Hemoglobina

 Fuerzas que Estabilizan las Proteínas
1. Efecto Hidrofóbico:
El efecto hidrofóbico, la tendencia del agua a minimizar
contacto con las sustancias no-polares, es la fuerza principal
que determina la estructura nativa de las proteínas.

Agregación de las cadenas laterales no-polares en el interior de la proteína

es favorecido por el aumento en entropía de las moléculas de agua que
formarían estructuras ordenadas alrededor de los grupos hidrofóbicos.
 Fuerzas que Estabilizan las Proteínas
2. Fuerzas van der Waals:

Las asociaciones no-covalentes

que surgen de las interacciones
electrostáticas entre dipolos
inducidos y dipolos
permanentes, son una fuerza
importante en el interior de las
proteínas porque estas fuerzas
actúan a distancias cortas.
 Fuerzas que Estabilizan las Proteínas
3. Interacciones Electrostáticas:
La asociacion de dos grupos iónicos de cargas opuestas en
las proteínas se conoce como par iónico o puente salino.

La mayoría de Esta
los pares interacción
iónicos se contribuye
encuentran en poco a la
la superficie estabilidad de
de las la proteína
proteínas. nativa.
Figure 6-36
 Fuerzas que Estabilizan las Proteínas
4. Enlaces de Hidrógeno:
Las asociaciones no-covalentes que surgen de las
interacciones electrostáticas entre grupos donantes (D) y
grupos aceptores (A) del enlace de hidrógeno.

D–H= O–H D – H •••A

N–H
a veces S – H .

A = O, N, o S .
Figure 2-2

Esta interacción hace el ajuste fino de la estructura

terciaria de una proteína pero no es el factor
determinante de la estabilidad de la proteína nativa.
 Fuerzas que Estabilizan las Proteínas
5. Enlaces de Disulfuro:
Las asociaciones covalentes que surgen entre las
cadenas laterales de dos Cisteínas.

Figure 4-6

Muchas proteínas asumen su conformación nativa sin la

intervención de enlaces de disulfuro, que sugiere que
esta interacción no es una fuerza estabilizadora esencial.
Sin embargo, puede ser crucial para trancar una
configuración particular para la cadena polipéptida.
 Fuerzas que Estabilizan las Proteínas
6. Interacciones con Metales:
Las asociaciones que surgen entre iones metálicos
(Zn2+) que interactúan fuertemente con átomos (S, N, O)
de los residuos de aminoácidos.

Figure 4-6

Los iones metálicos pueden estabilizar dominios

pequeños en las proteínas.
 Las Proteínas son Estructuras Dinámicas

La estructura
tridimensional La flexibilidad
de las proteínas en la
es flexible y conformación
altamente de las
cambiante, proteínas se
aspectos asemeja al
importantes proceso de
para su función. respiración.
 Denaturalización de las Proteínas
Denaturalización – proceso mediante el cual se pierde la estructura
tridimensional activa (conformación nativa) de una proteína.
Se logra mediante diferentes maneras:
1. Calentamiento – La proteína se desdobla o se “derrite”
exhibiendo cooperatividad, es decir, de manera simultánea.
2. Cambios en pH – Se altera la distribución de carga y el patrón
de enlaces de hidrógeno en la proteína.
3. Detergentes – Los detergentes se asocian con los residuos
no-polares interfiriendo con las interacciones hidrofóbicas.
4. Agentes caotrópicos – El ion guanidinio y la urea (5-10 M)
aumentan la solubilidad de sustancias no-polares en agua,
interfiriendo con las interacciones hidrofóbicas.
 Doblamiento de las Proteínas
Las proteínas aparentan doblarse en forma jerárquica, con elementos
de estructura local formándose primero (hélice , hoja  plegada) y
colapsando en elementos estructurales más grandes, que colapsan con
otros elementos para dar elementos de mayor tamaño aún, y así
sucesivamente hasta culminar en la conformación nativa de la proteína.

Figure 6-40

Colapso hidrofóbico – fuerza que mueve el doblamiento de las

proteínas, que resulta de la tendencia de los residuos hidrofóbicos de
evitar contacto con el agua, formando la parte central de las
proteínas.
 Función de las Proteínas
Miles de proteínas están envueltas en tareas biológicas
específicas (i.e., funciones fisiológicas) tales como,
construir, sostener, reconocer, transportar, y transformar
componentes celulares con gran rapidez y exactitud,
que son objeto de múltiples mecanismos de regulación.
La estructura de cada una proteína determina su función.
Estudiando la función de ciertas
proteínas modelo facilita el estudio de
enzimas y proteínas.
Proteínas Modelo:
Mb
Mioglobina (Mb) y Hemoglobina (Hb)
Anticuerpos (Ab; Inmunoglobulinas) Hb
Ab Actina y Miosina (no se cubrirá)
 Enlazamiento Reversible de O2 a
Mioglobina y Hemoglobina
Mioglobina enlaza O2 de manera reversible y simple.
Hemoglobina, tetrámero de cadenas similares a Mioglobina,
enlaza el O2 reversiblemente y lo distribuye a tejidos del cuerpo
mediante un mecanismo mucho más complicado.
Muchas de la ideas
que explican el
enlazamiento de O2 a
hemoglobina sirven
para entender el
control de la actividad
de enzimas que se
examinarán más
adelante.
 Mioglobina (Mb) es Monomérica
Proteína intracelular pequeña (153 residuos ) del músculo vertebrado.
Estructura de Rayos X (1959) revela que tiene 8 hélices  (rotuladas
A-H) formando proteína globular de dimensiones 44 Å x 44 Å x 25 Å.
Grupo hemo
(sistema conjugado)
es un derivado de
una porfirina que
tiene un Fe2+
enlazado en el
centro, asumiendo
geometría octaedral
cuando O2 está
enlazado. Figure 7-2

Contiene un grupo hemo dentro de un bolsillo

hidrofóbico entre la hélice E y hélice F de mioglobina.
 Grupo Hemo en Mioglobina
Grupo hemo consiste de cuatro grupos pirrol (A-D) unidos mediante
grupos metenos, con un Fe2+ en el centro, coordinado a cuatro N de
la porfirina y un N de la cadena lateral de Histidina (His F8). El sexto
ligando del Fe2+ es O2 que forma enlace de hidrógeno con His E7.
Figure 7-3 Fe2+-Hemo con O2: rojo
distal
escarlata

proximal
Fe2+-Hemo sin O2:
púrpura
Dos cadenas laterales hidrofóbicas en el lado que enlaza O2 (Val E11 y
Phe CD1) mantienen el grupo hemo en su sitio. Estas cadenas se
mueven cuando la proteína “respira”, permitiendo que O2 entre o salga.
 Grupo Hemo en Mioglobina
Cuando el Fe(II) de un grupo hemo aislado se expone al O2, se oxida
irreversiblemente a Fe(III), forma del ion que no enlaza O2 .
La proteína que rodea el grupo hemo en Mioglobina y Hemoglobina evita
la oxidación de Fe(II), permitiendo que O2 se enlace reversiblemente.
Figure 7-3

Otras moléculas que se

enlazan al grupo hemo:
CO, NO, H2S

Metmioglobina o Methemoglobina – mioglobina o hemoglobina cuyo

Fe2+ en el grupo hemo se ha oxidado a Fe3+. Estas proteínas son las
responsables del color marrón de la carne vieja o de la sangre seca.
 Hemoglobina (Hb) es Tetramérica
(dentro de los eritrocitos)
Proteína intracelular de 4 subunidades (22) que transporta O2 en la sangre.
Estructura de Rayos X revela estructura de subunidad similar a Mioglobina
(hélices A-H; subunidad  no tiene hélice D). Dimensiones 64 Å x 55 Å x 50 Å.
Enlazamiento de O2 altera la estructura cuaternaria de Hemoglobina.

DeoxiHb Contactos
que
OxiHb 15º de
Rotación
cambian:
2 1-2 2
2-1
1
1
canal canal
2 2

1 Contactos son 1
predominantemente
hidrofóbicos,
Poco Contacto: aunque hay enlaces
1-2 y 1-2 H y pares iónicos.
 DeoxiHb

(sin O2
enlazado)

canal
ancho

Forma T ("Tight") de la Hemoglobina

 OxiHb

(con O2
enlazado)

canal
estrecho

Forma R ("Relaxed") de la Hemoglobina

 Movimiento de Grupo Hemo y Hélice F
en Transición T → R de Hemoglobina
Hemoglobina Hemoglobina
en Estado T: en Estado R:
Conformación Conformación
de DeoxiHb; de OxiHb
Menor afinidad Mayor afinidad
por O2 . por O2 .
Fe2+ está 0.6 Å Fe2+ está en el
fuera del plano plano del
del hemo; hemo;
Enlace Fe2+–O2 Enlace Fe2+–O2
es más largo. es más corto.
Al enlazar O2, el Fe2+ se mueve adentro de la porfirina donde se enlaza
al oxígeno más fuertemente, halando la HisF8 que está covalentemente
enlazada, causando que la hélice F también se mueva.
Rol de Hemoglobina y Mioglobina en el
Transporte de O2 y CO2
 Hemoglobina es un Modelo
para Proteínas Alostéricas
La cooperatividad exhibida cuando O2 se enlaza a Hemoglobina es
modelo del comportamiento de otras proteínas de varias subunidades
(incluyendo muchas enzimas) que enlazan sus ligandos.
En algunos casos, un ligando aumenta la afinidad de otros sitios de
enlace (como cuando O2 aumenta la afinidad de Hb por O2).
En otros casos, un ligando disminuye la afinidad de otros sitios de
enlace
Efectos Alostéricos:
Aquellos que ocurren cuando el enlace de un ligando a un sitio afecta
el enlace de otro ligando en otro sitio, usualmente requiere
interacciones entre subunidades de proteínas oligoméricas,
usualmente mediados por cambios conformacionales.
Modelo de Simetría
para Alosterismo
Modelo Secuencial para Alosterismo
 Anticuerpos o Inmunoglobulinas
Sistema Inmune: Conjunto de células y organos del cuerpo que
responden a una infección microbiana mediante la producción de
anticuerpos o células que destruyen la molécula o la célula extraña.
Tipos de Inmunidad:
1. Celular – aquella que es mediada por los linfocitos T o células T,
desarrolladas en el timo, que atacan hongos, parásitos, células
infectadas por virus, y tejido extraño.
2. Humoral – aquella que es mediada por proteínas conocidas como
anticuerpos o inmunogloblulinas, producidas por los linfocitos B o
células B que maduran en la médula ósea de mamíferos.

La respuesta inmune es promovida por la presencia de una

macromolécula (usualmente proteína o carbohidrato) o material
extraño conocido como antígeno, que es reconocido por un
anticuerpo o por una célula inmune que lo enlaza específicamente.
 Respuesta Inmune Primaria y Secundaria

Respuesta Respuesta
Inmune 1º: Inmune 2º:
Aquella que Aquella que
ocurre cuando ocurre cuando
las células B las células B
se exponen al memoria se
antígeno por exponen al
primera vez. antígeno por
segunda vez.

Respuesta Inmune 2º envuelve una mayor concentración y mayor

rapidez de producción de anticuerpos.
 Estructura de Anticuerpos o
Inmunoglobulinas

Hojas 
plegada
Son glicoproteínas, tienen
carbohidrato asociado a la
cadena polipéptida.

Contienen 4 subunidades:
2 cadenas livianas idénticas (L), 23 kD
2 cadenas pesadas idénticas (H), 53-75 kD
Unidas por enlaces de disulfuro e interacciones no-covalentes, en forma Y.
Contienen región variable (V, reconoce antígeno) y región constante (C).
Papaina produce 2 fragmentos Fab y un fragmento Fc. Tiene carbohidrato.
 Interacción entre Anticuerpo y Antígeno
La asociación entre anticuerpo y antígeno envuelve fuerzas van der
Waals, hidrofóbicas, puentes de hidrógeno, e interacciones iónicas.

Antígeno

Fab
monoclonal
 Interacción entre Anticuerpo y Antígeno
Anticuerpos entrecruzan a
Anticuerpo sus antígenos causando su
son agregación y por ende, la
bivalentes Ag precipitación del complejo
(i.e., se anticuerpo-antigeno
enlazan a Ag (Ab-Ag).
Ab
dos sitios
en el
antígeno).

En este diagrama se muestran tres anticuerpos diferentes que

interactúan con tres determinantes antigénicos diferentes.
Ácidos nucleicos
Ácidos Nucleicos: El ADN y ARN son polímeros de
nucleótidos
Grupo
fosfato Base Citosina
nitrogenada
(A, G, C o T)

Azúcar Guanina
Nucleótido de (Desoxirribosa)
ADN
Bases
Enlace de hidrógeno apareadas
Adenina

A T
Timina

G Esqueleto de
C azúcar-fosfato

Enlace covalente Bases

ADN nitrogenadas
Ácido desoxirribonucleico
Polinucleótido de ADN (Doble hélice)
Reglas de apareamiento de las bases nitrogenadas en el
ADN

A T
C G

Hebra de ADN
C A T G G C T A
Hebra de ADN complementaria
G T A C C G A T
Ácidos Nucleicos: El ADN y ARN son polímeros de
nucleótidos
Grupo
Citosina Base
fosfato
Bases nitrogenada
nitrogenadas (A, G, C o U)

Guanina Azúcar
Nucleótido de (Ribosa)
ARN

Adenina

Uracilo

Esqueleto de
azúcar-fosfato Enlace covalente

Bases nitrogenadas

ARN
Ácido ribonucleico
(Hélice simple) Polinucleótido de ARN
Reglas de apareamiento de las bases nitrogenadas en el
ARN

A U En el ARN:
U reemplaza a T

C G

Hebra de ADN
C A T G G C T A
Hebra de ARN complementaria
G U A C C G A U
El materia genético contenido en el ADN se almacena en el
núcleo celular.
Síntesis de
proteína
Dogma central de biología molecular
I

La expresión de la información
contenida en los genes de una
célula sigue la dirección:

II ADN  ARN  Proteína.

El dogma también postula que

sólo el ADN puede duplicarse y,
por lo tanto, reproducirse y
transmitir la información genética
a la descendencia.

III
I
Replicación de ADN: la clave para transmitir información
genética a la siguiente generación.

1. La enzima Helicasa
desdobla la doble hélice.
2. La enzima Polimerasa ADN
añade nucleótidos
complementarios (5’  3’)
para cada cadena hasta
obtener 2 copias idénticas
simultáneamente.

• Mamíferos: 50 nucleótidos por segundo.

• Bacterias: 500 nucleótidos por segundo.

5’
A 3’
4’ 1’ T 2’ 3’
3’ 2’ 1’ 4’ 3’ 5’
5’
5’
5’ 3’
4’ 1’ G C 2’ 3’
5’ 3’
3’ 2’ 1’ 4’ 5’
5’
Las nuevas cadenas crecen en
dirección 5’  3’
El genotipo del ADN se expresa como proteínas, las cuales
proporcionan la base molecular para los caracteres fenotípicos.

El genotipo de un organismo, su estructura ¿Como se logran refleja

genética, es la información hereditaria contenida el genotipo en el
en su ADN. fenotipo?

El fenotipo son los caracteres específicos del

organismo que se fundamentan en las proteínas y El ADN codifica la síntesis de
sus funciones. proteína.

Transcripción: transferencia
de información desde el
ADN hasta el ARN

Traducción: transferencia de
información de ARN hasta la
proteína.
 La información genética esta escrita como codones y se traduce en
secuencias de aminoácidos.

GEN
Transcripción

Célula Cromosoma ADN

• El lenguaje del ADN se escribe como

secuencia lineal de nucleótidos.
• El proceso se denomina transcripción,
porque la información del ADN se reescribe
como una secuencia (complementaria) de
ARN.
• Cada triplete (codón) de bases nitrogenadas
codifica un aminoácido especifico. ARN
Ácido ribonucleico
1 codón = 1 aminoácido
Descifrando la información genética del ADN.
Cadena molde

Inicio

El código genético es
• El triplete AUG tiene doble función: codifica el compartido por todos los
organismos: bacterias, plantas,
aminoácido metionina y da la señal para iniciar la
animales, etc.
nueva cadena peptídica.
• Un aminoácido puede ser codificado por varios La universalidad del código
tripletes. genético debió establecerse
• Los tripletes UAA, UAG y UGA indican “finalizar con un ancestro común.
traducción”.
 II Transcripción de ADN: Produce mensajes genéticos en forma
de ARN.
• Las dos cadenas de ADN deben
separarse en el sitio en donde
va a producirse la transcripción.
• Sólo una hebra de ADN servirá
de plantilla.
• Polimerasa ARN adiciona
nucleótidos a la nueva cadena
de ARN.
• Se siguen las reglas de
apareamiento: en ARN se
reemplaza T con U.

1. Fase de iniciación: Polimerasa

ARN se enlaza al promotor.
2. Fase de alargamiento: a
medida que se suman
nucleótidos al ARN, la cadena
se va desprendiendo.
3. Fase de terminación:
Polimerasa ARN debe recibir instrucciones de donde empezar y
Polimerasa ARN se separa del
donde acabar: NO se transcribe la hebra completa de ADN ADN al llegar al terminador.
Las moléculas de ARN de transferencia sirven como interpretes
durante la traducción.

ARNt funciona como el interprete del ARNm que traduce los tripletes de ARN en
aminoácidos.
Existe una variedad de ARNt especifica para cada aminoácido.

• En un extremo de la molécula de
ARNt se sitúa un aminoácido
especifico
• En el extremo contrario se sitúa un
triplete especial: Anticodón

El triplete anticodón es complementario

al triplete codón del ARNm
Los ribosomas construyen polipéptidos.
Para llevar a cabo la traducción,
tenemos hasta ahora:
Sitio P: sostiene el ARNt que lleva la
Instrucciones en forma de ARNm
cadena de péptidos creciente.
ARNt para interpretar las
Sitio A: sostiene el ARNt que contiene el
instrucciones
siguiente aminoácido que se agregará.
Un suministro de aminoácidos

Necesitamos una fabrica de péptidos.

 III
• El codón de inicio
Traducción de ADN: • Codones de final
El codón de inicio
marca el comienzo de
un mensaje del
ARNm.
III
Traducción de ADN: El alargamiento añade aminoácidos a la
cadena de polipéptidos hasta q un codón de alto termina la
traducción.
1. Reconocimiento del codón: el ARNt
entrante (que trae un nuevo aminoácido)
se empareja con el codón complementario
en el ARNm.

2. Formación del enlace peptídico: el péptido

unido al ARNt (ubicado en el sitio P) se
separa y se une al aminoácido del ARNt
que esta en el sitio A. El ribosoma dirige la
formación del enlace.

3. Traslocación: El ARNt libre abandona el

sitio P y el ARNt que lleva la cadena de
péptidos es movido al sitio P.

4. Terminación: El proceso termina al

alcanzar un codón de alto (UAA, UAG,
UGA).
 Las mutaciones pueden cambiar el significado de los genes.

Un cambio de base
podrá no tener
efecto si el codón
resultante codifica
el mismo
aminoácido.

Una inserción o
deleción modificará el
orden completo de los
codones: se codificará
una proteína muy
diferente.

Cualquier cambio en la secuencia de nucleótidos del ADN se denomina mutación. Las

mutaciones pueden abarcar grandes regiones de un cromosoma, o tan solo un par de
nucleótidos.