SMEWW-APHA-AWWA-WEF Part 9221

MATRIZ DE ENSAYO
CÓDIGO DE ENSAYO TIPO DE ENSAYO NORMA DE REFERENCIA

MHETNU30 Numeración de heterótrofos SMEWW-APHA-AWWA-WEF

Part 9215 B, 22nd Ed.

MCOTNM30 Numeración de Coliformes Totales SMEWW-APHA-AWWA-WEF

• Agua de mar (NMP) Part 9221 B, 22nd Ed.
• Agua para uso y consumo
APHA-AWWA- humano MCOFNM30 Numeración de Coliformes Fecales SMEWW-APHA-AWWA-WEF
AGUAS • Agua purificada
WEF (3) • Agua residual (NMP) Part 9221 E-1, 22nd Ed.
• Aguas naturales
MESCNM30 Numeración de Escherichia coli (NMP) SMEWW-APHA-AWWA-WEF
Part 9221 G.2, 22nd Ed.

MHETMF30 Numeración de heterótrofos (método de SMEWW-APHA-AWWA-WEF

membrana filtrante) 9215 D, 22TH Ed. 2012

ALIMENTOS  ….  ….  ….  ….

SUPERFICIES  ….  ….  ….  ….

AMBIENTES  ….  ….  ….  ….

 Volumen de
dilución

Agua Agua no
potable potable

20ml

100ml

10ml
NUMERACIÓN DE COLIFORMES TOTALES
(NMP)
• CLS: 121°, 12-15’, pH 6.8+-0.2 ; gas y/o
acidez
• CB: pH7.2+-0.2
• Procedimiento para efluentes. F.
confirmativa

• Escherichia coli ATCC 25922 o 11775,

• Enterobacter Aerogenes ATCC 13048,
C(+)
• Klebsiella pneumoniae (termotolerante) ATCC
13883 o ATCC 4352

35+-0.5°C, • Staphylococcus aureus ATCC 6538,

C(-) • Proteus vulgaris ATCC 13315,
24-48h, gas C. Brila • Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
RESULTADOS

NMP/100ml = (Tabla)x(10/V)
 FASE CONFIRMATIVA FASE COMPLETA
NUMERACIÓN DE COLIFORMES TOTALES (NMP)

CLSX, 35+-0.2°, 48+-3h, gas

C. brila

A. Endo

AN, 24h
A. MacConkey
• CLS a C. Brila y C. EC
• Agar ENDO 9222B.2ª. 24h incub.
• Agar MacConkey. pH 7.1+-0.2
• Agar Nutritivo pH 6.8+-0.2 Gram
• Tinción gram
NUMERACIÓN DE COLIFORMES FECALES (NMP)

CLS: 121°, 12-15’, pH 6.8+-0.2 ; gas y/o

acidez
C. EC: pH 6.9+-0.2
Medio A-1: pH6.9+-0.1, 121°C, 10’. 3h,
35°C + 21h, T°

Escherichia coli ATCC 25922 o 11775,

C+ Klebsiella pneumoniae (termotolerante) ATCC
Baño María 30’ 13883 o ATCC 4352
44.5+-0.2°C,
C. EC Enterobacter Aerogenes ATCC 13048,
<24+-2h C- Klebsiella pneumoniae (termotolerante) ATCC
13883 o ATCC 4352
RESULTADOS

…NMP/100ml
NUMERACIÓN DE Escherichia coli (NMP)

Coliformes totales
A. triptonada: 121°C, 10’, pH 6.9+-0.2

Escherichia coli (MUG- cepa positiva)

C+
44.5+-0.2°C, ATCC 25922 o 11775
24+-2h Agua triptonada, 5ml C- Enterobacter Aerogenes ATCC 13048
 Agua triptonada, 5ml
RESULTADOS

Rctvo Kovac: 0.2-0.3ml

C+: E. coli indol (+)
C-: Enterobacter cloacae indol (-)
C0: No inoculado
*Klebsiella oxytoca and some strains of C. freundii
and Enterobacter spp. (+)

NMP/100ml
A/P para E. coli (en caso de botella)
 CONTROLES DE CALIDAD

 Analytical QC Section (9020B.9)

 Instrumentation/equipment (Sections 9020B.4 and 9030B)
 Supplies (Section 9020B.5)
 Appropriate storage and preparation of dehydrated culture
Media and water quality (Sections 9050 and 9020B.5f).
 CONTROLES DE CALIDAD

APARATOS DISPENSADORES HORNO PASTEUR

• Dispensar un volumen en una • Cintas con B. atrophaeus 1x106
probeta graduada. • Cintas térmicas y termómetro.
• Corregir conexiones sueltas o en • Temperatura 160-180°C
malfuncionamiento. • Mensualmente

AUTOCLAVE
• >=121°C, 15’, 15lbs/inch2
• Temperatura: MRT y HTDL. Week
• Trampa y sello (week)
• Esterilización: Geobacillus
steanothermophilus (months)
• Timer: estandarizado; 3 fases
(calentamiento, esterilización y
despresurización) (trimestre).
Membrana filtrante
• Armar y revisar; descartar partes
dañadas.
• Embudo con una probeta
• Esterilidad: caldo triptona (o no
selectivo); 35+-0.5°C, 24h
UV
• 254nm: Limpieza mensual. Etanol y
AD; medidor UV <70% o APC con
200-300 UFC/ml, 2’. Incub. 35°C,
48h. Desciende a 99%; tiempo de
vida.
• 365-366nm: fluorescencia
Conductímetro
• C/mes, 25°C
• Al, Ca, Cl, Fe, Mg, NO3,
PO4, NO3, SO3
BAÑO MARÍA
• Temperatura adecuada 35+-0.5 o
44.5+-0.2°C; cambiar 2 veces al
día; nivel encima del medio;
desinfectar antes de llenar.
INCUBADORA
• Limpiar periódicamente: 2
veces al día en uso;
temperatura apropiada y
uniforme; control de H° (<15%
del agar).
Material de vidrio
• pH: azul bromotimol (BTB), amarillo,
verde y azul; tolerancia al calor y
volumen
• Inhibidores: 4 lotes de 6 placas: APC,
35°C, 48h.
• Aspecto físico: raspaduras y astillado
Material de dilución
• Borosilicato y tapa rosca
• Check 1 por lote o 1-4%
• Esterilidad, pH y volumen
• Check precipitado
• Botellas de muestra: Tiosulf de Na.
Agua- Reagent-grade water
Libre de inhibidores y bactericidas
Test bact.:Enterobacter aerogenes ATCC® 13048. 24h, 20% de
colonias. Anualmente
PROCEDIMIENTOS DE CONTROL DE
CALIDAD ANALÍTICO
 Check sterility of process methodology as follows:
Membrana filtrante
Multiple-tube and presence–
absence procedures
Pour plate procedures
If any contamination is
indicated, determine the root
cause.
Check sterility of the entire process by using Place filter on nonselective
sterile dilution water as the sample at the medium. Incubate at 35 0.5°C for
beginning and end of each filtration series of 48 h and observe for growth.
samples and test for growth. Record results.
Check sterility of prepared media and dilution
water
Check sterility by pouring at least one
uninoculated plate per batch or lot of media
and record results.
Invalidate analytical data from sample(s)
tested. Document
both cause/problem and corrective action
taken. Request resampling.