Bacterial Endotoxin Test

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Etapa 6 Armonización
Oficial 1 de diciembre de 2012 85 Prueba de endotoxinas bacterianas 1
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85 ENDOTOXINAS BACTERIANAS
PRUEBA
PREPARACIÓN DE SOLUCIONES
Solución madre de endotoxina estándar : se prepara una solución madre
de endotoxina estándar a partir de un estándar de referencia de endotoxina de
Cambiar para leer: USP que se ha calibrado según el estándar internacional actual de endotoxina
de la OMS. Siga las especificaciones del prospecto y de la etiqueta para la
Porciones de este capítulo general han sido armonizadas preparación y conservación de la solución madre de endotoxina estándar. La
con los textos correspondientes de la Farmacopea Europea y/o la endotoxina se expresa en unidades de endotoxina (UE). [NOTA—Una Unidad de
Farmacopea Japonesa. Aquellas partes que no están armonizadas se marcan Endotoxina USP (UE) es igual a una Unidad Internacional (UI) de endotoxina.]
con símbolos ( ) para especificar este hecho.
La Prueba de Endotoxinas Bacterianas (BET) es una prueba para detectar o Soluciones estándar de endotoxinas—Después de mezclar vigorosamente
cuantificar las endotoxinas de las bacterias Gramnegativas usando lisado la Solución madre de endotoxinas estándar , prepare diluciones en serie
de amebocitos del cangrejo herradura (Limulus polyphemus o Tachypleus apropiadas de Solución estándar de endotoxinas, usando agua para BET.
tridentatus). Utilice las diluciones lo antes posible para evitar la pérdida de actividad por
Existen tres técnicas para esta prueba: la técnica del gelclot. adsorción.
nique, que se basa en la formación de gel; la técnica turbidimétrica, basada
Soluciones de muestra: prepare las soluciones de muestra dis
en el desarrollo de turbidez después de disolver o diluir drogas ■■2S (USP35)
usando Agua para BET. escisión de un sustrato endógeno; y el cromogénico
Algunas sustancias o preparaciones pueden ser más apropiadas, basadas en el desarrollo de color después de disuelto por escisión o diluido 2S (USP35) en otra
solución acuosa de un complejo de péptido sintéticocromógeno. Proceder por ciones. Si es necesario, ajuste el pH de la solución para que sea ex cualquiera de las
tres técnicas para la prueba. En el caso de amina
modo
(o dilución
que el pdH
e lda
e
mla
isma)
mezcla
de
se dude o discuta, la decisión final se toma en función del lisado y la solución de muestra se encuentra dentro del rango de pH de la prueba de límite de gelclot 2S
(USP35 ) a menos que se indique lo contrario en lo especificado por el
fabricante del lisado, generalmente 6.0–8.0. La monografía del producto que se está probando. La prueba se lleva a cabo. El pH se puede ajustar mediante el uso de
un ácido, base o adecuado de una manera que evite la contaminación por
endotoxinas. tampón recomendado por el fabricante del lisado. Los ácidos y las bases se pueden preparar a partir de concentrados o sólidos con agua para BET en
recipientes libres de endotoxinas detectables. Los tampones deben validarse
para estar libres de endotoxinas detectables y factores de interferencia.
APARATO
Despirogenar todo el material de vidrio y otros materiales estables al calor.
als en un horno de aire caliente usando un proceso validado. 1 Un
tiempo y temperatura mínimos comúnmente usados es 30 min a 250°. Si
Cambiar para leer:
utiliza aparatos de plástico, como microplacas y puntas de pipeta para pipetas
automáticas, utilice aparatos que demuestren estar libres de endotoxinas
detectables y que no interfieran en la prueba. [NOTA: en este capítulo, el término
“tubo” incluye cualquier otro receptáculo, como un pocillo de microtitulación.] DETERMINACIÓN DEL MÁXIMO VÁLIDO
DILUCIÓN (MVD)
La dilución máxima válida es la dilución máxima permitida de una muestra
REACTIVOS Y SOLUCIONES DE PRUEBA
en la que se puede determinar el límite de endotoxinas. Determine el MVD a
partir de la siguiente ecuación:
Lisado de amebocitos: un producto liofilizado obtenido del lisado de
amebocitos (glóbulos blancos) del cangrejo herradura (Limulus polyphemus
o Tachypleus tridentatus). Este reactivo se refiere únicamente a un producto MVD = (límite de endotoxina × concentración de la solución de muestra )/(λ)
fabricado de acuerdo con las normas de la autoridad competente. [NOTA: el
lisado de amebocitos reacciona a algunos glucanos además de a las
endotoxinas. Hay disponibles preparaciones de lisado de amebocitos qbue no
Límite de endotoxinas: el límite de endotoxinas para fármacos
reaccionan con los glucanos: se preparan eliminando el factor G que reacciona
parenterales, definido en función de la dosis, es igual a K/M 2 , donde K es
con los glucanos del lisado de amebocitos o inhibiendo el sistema de reacción
una dosis pirogénica umbral de endotoxina por kg de peso corporal y M es igual
del factor G del lisado de amebocitos y se pueden usar para pruebas de
a la dosis máxima recomendada en bolo de producto por kg de peso corporal.
endotoxinas. en presencia de glucanos.]
Cuando el producto debe inyectarse a intervalos frecuentes o infundirse de forma
continua, M es la dosis total máxima administrada en un período de una hora. El
límite de endotoxinas para fármacos parenterales se especifica en la monografía
Prueba de agua para endotoxinas bacterianas (BET): uso de agua individual en unidades como UE/mL, UE/mg, UE/Unidad de actividad biológica,
para Inyección o agua producida por otros procedimientos que no muestra etc.
reacción con el lisado empleado, en el límite de detección del reactivo.
Concentración de la solución de muestra: mg/mL: en el
Lisado TS: disuelva el lisado de amebocitos en agua para BET, o en un caso del límite de endotoxinas especificado por peso (EU/mg); 2 ■K es 5
tampón recomendado por el fabricante del lisado, agitando suavemente. USPEU/kg de peso corporal para cualquier vía de administración que no sea la
Almacene el lisado reconstituido, refrigerado o congelado, de acuerdo con las
especificaciones del fabricante. intratecal (para la cual K es 0,2 USPEU/kg de peso corporal). Para productos
radiofarmacéuticos no administrados por vía intratecal, el límite de endotoxinas se
1
Para ver una prueba de validez del procedimiento para inactivar endotoxinas, calcula en 175 EU/V, donde V es la dosis máxima recomendada en mL. Para los
consulte Esterilización por calor seco en Esterilización y garantía de esterilidad de los radiofármacos administrados por vía intratecal, el límite de endotoxinas se obtiene
artículos compendiales 1211 . Utilice Lysate TS con una sensibilidad no inferior a 0,15 mediante la fórmula 14 EU/V. Para formulaciones (generalmente productos contra el
unidades de endotoxina por ml. cáncer) administradas por metro cuadrado de superficie corporal, la fórmula es K/M, donde
K = 100 UE/m2 y M es la dosis máxima/m2. ■2S (USP35)
Convención de la Farmacopea de los Estados Unidos de 2011 Todos los derechos reservados.
Fecha: 14OCT2011 Hora: 8:08 (P) \\uspnetapp2\share\SHARE\USPNF\PRINTQ\pager\xmlIn\AO_20111014080832_M98830.xml
2 85 Prueba de endotoxinas bacterianas Oficial 1 de diciembre de 2012
Tabla 1. Preparación de soluciones para la prueba de inhibición/mejora para técnicas de gelclot
Concentración de endotoxinas/
Solución a qué endotoxina Dilución endotoxina Número de
Solución Está agregado Diluente Factor Concentración Réplicas 4
— — —
Ninguno/Solución de muestra
Automóvil club británico
Cama y desayuno
2λ/Solución de muestra Solución de muestra 1 2 minutos 4

2 1 minuto 4
4 0,5 minutos 4
8 0,25 minutos 4
CC
2λ/Agua para APUESTA Agua para APUESTA 1 2 minutos 2
2 1 minuto 2
4 0,5 minutos 2
8 0,25 minutos 2
Dd
Ninguno/Agua para APUESTA — — — 2
a Solución A: una solución de muestra de la preparación bajo prueba que no contiene endotoxinas detectables. b Solución B:
Prueba de interferencia. c Solución C: control para la sensibilidad del lisado marcado. d Solución D: Control negativo de Agua para
BET.
Unidades/mL: en el caso de límite de endotoxinas especificado por positivo. Un resultado es negativo si no se forma un gel intacto.
unidad de actividad biológica (UE/Unidad); mL/mL: cuando el límite de La prueba se considera válida cuando la concentración más baja de
endotoxinas se especifica por volumen (EU/mL). λ: la sensibilidad las soluciones estándar muestra un resultado negativo en todas las
etiquetada en la Técnica GelClot (EU/ pruebas repetidas.
El punto final es la concentración más pequeña en la serie de
mL) o la concentración más baja utilizada en la curva estándar concentraciones decrecientes de endotoxina estándar que coagula
■■2S (USP35) para la Técnica Turbidimétrica o la Técnica el lisado. Determine el punto final de la media geométrica calculando
Cromogénica. la media de los logaritmos de las concentraciones de punto final de las
cuatro series repetidas y luego tomando el antilogaritmo del valor
medio, como se indica en la siguiente fórmula:
Cambiar para leer:
concentración de punto final media geométrica = antilog (Σe/f)
TÉCNICA GELCLOT donde Σe es la suma de las concentraciones logarítmicas del punto
final de la serie de dilución utilizada, y f es el número de tubos de
La técnica de gelclot se usa para detectar o cuantificar
ensayo repetidos. La concentración de punto final media geométrica
endotoxinas basándose en la coagulación del reactivo de lisado en
es la sensibilidad medida del lisado (en UE/mL). Si no es inferior a 0,5
presencia de endotoxina. La concentración mínima de endotoxina λ ni superior a 2 λ, se confirma la sensibilidad marcada y se utiliza en
necesaria para provocar la coagulación del lisado en condiciones
las pruebas realizadas con este lisado.
estándar es la sensibilidad indicada en la etiqueta del reactivo del
lisado. Para garantizar tanto la precisión como la validez de la prueba,
realice las pruebas para confirmar la sensibilidad del lisado marcado y Prueba de factores de interferencia—Por lo general , prepare las
los factores de interferencia como se describe en Pruebas preparatorias, soluciones (A–D) como se muestra en la Tabla 1 y realice la prueba
inmediatamente a continuación. de inhibición/mejora en las soluciones de muestra a una dilución
menor que la MVD, que no contengan endotoxinas detectables,
operando como se describe para Prueba para la confirmación de la
Pruebas preparatorias sensibilidad del lisado marcado. La media geométrica de las
concentraciones de punto final de las soluciones B y C se determina
Prueba para la confirmación de la sensibilidad del lisado marcado: utilizando la fórmula descrita en la Prueba para la confirmación de la
λ, ex
Confirme en cuatro réplicas la sensibilidad etiquetada, presionada sensibilidad del lisado marcado. •La prueba de factores de interferencia
en EU/mL del lisado antes de usar en la prueba. La prueba para debe repetirse cuando cambie cualquier condición que pueda influir en
confirmar la sensibilidad del lisado debe realizarse cuando se usa un el resultado de la prueba.• (IRA 1abr2011)
nuevo lote de lisado o cuando hay algún cambio en las condiciones de La prueba se considera válida cuando todas las réplicas de las
Soluciones A y D no muestran reacción y el resultado de la Solución C
la prueba que pueda afectar el resultado de la prueba. Prepare
soluciones estándar que tengan al menos cuatro concentraciones confirma la sensibilidad etiquetada.
equivalentes a 2λ, λ, 0,5λ y 0,25λ diluyendo el ER Endotoxina USP con Si la sensibilidad del lisado determinada en presencia de la Solución
agua para BET. B no es inferior a 0,5 λ ni superior a 2 λ, la Solución de muestra no
Mezcle un volumen de Lysate TS con un volumen igual contiene factores que interfieran en las condiciones experimentales
(como alícuotas de 0,1 ml) de una de las soluciones estándar de utilizadas. De lo contrario, la solución de muestra a examinar interfiere
endotoxinas en cada tubo de ensayo. Cuando se utilizan viales de con la prueba.
prueba individuales o ampollas que contienen lisado liofilizado, agregue Si la muestra bajo prueba no cumple con la prueba en
las soluciones directamente al vial o ampolla. Incube la mezcla de una dilución menor que la MVD, repita la prueba usando una
reacción durante un período constante de acuerdo con las instrucciones dilución mayor, sin exceder la MVD. El uso de un lisado más
del fabricante del lisado (normalmente
evitando
a 37
la
± v1ibración.
° durante
P6ara
0 ±p 2robar
min),
la sensible permite una mayor dilución de la muestra a examinar y esto
integridad del gel, tome cada tubo directamente de la incubadora e puede contribuir a la eliminación de interferencias.
inviértalo unos 180° con un movimiento suave. Si se ha formado un gel
firme que permanece en su lugar después de la inversión, registre el La interferencia puede superarse mediante un tratamiento adecuado,
resultado como como filtración, neutralización, diálisis o calentamiento. establecer
Tabla 3. Preparación de soluciones para el ensayo GelClot
Concentración de endotoxinas/
Solución a qué endotoxina Dilución endotoxina Número de
Solución Está agregado Diluente Factor Concentración Réplicas 2
Agua para APUESTA 1 —
Ninguno/Solución de muestra
Automóvil club británico
2 — 2
4 — 2
8 — 2
Cama y desayuno
2λ/Solución de muestra — 1 2 minutos 2
CC
2λ/Agua para BET Agua para APUESTA 1 2 minutos 2
2 1 minuto 2
4 0,5 minutos 2
8 0,25 minutos 2
Dd
Ninguno/Agua para APUESTA — — — 2
a Solución A: Solución de muestra bajo prueba a la dilución, sin exceder la MVD, con la que se completó la Prueba de factores de interferencia .
La dilución posterior de la Solución de muestra no debe exceder la MVD. Use agua para BET para hacer una serie de diluciones de cuatro tubos que contengan la solución de muestra
bajo prueba en concentraciones de 1, 1/2 , 1/4 y 1/8 en relación cMVD
on la
scegún
oncentración
corresponda.
utilizada
b Solución
en la prueba
B: Solución
de factores
A que
dce
ontiene
interferencia .
endotoxina
Se peueden
stándar
usar
a uona
tras
concentración
diluciones hasta
de 2λ
la
(control de producto positivo). c Solución C: dos réplicas de cuatro tubos de agua para BET que contienen la endotoxina estándar en concentraciones de 2λ, λ, 0,5λ y 0,25λ,
respectivamente. d Solución D: Agua para BET (control negativo).
que el tratamiento elegido elimine efectivamente la interferencia sin pérdida la prueba. En la prueba repetida, la preparación bajo prueba cumple con
de endotoxinas, realice el ensayo descrito anteriormente utilizando la la prueba si se encuentra un resultado negativo para ambas réplicas de
preparación a examinar a la que se le ha agregado Endotoxina Estándar y la Solución A. La preparación no cumple con la prueba si se encuentra un
que luego se ha sometido al tratamiento elegido. resultado positivo para una o ambas réplicas de la Solución A. Sin
embargo, si la preparación no cumple con la prueba a una dilución menor
que la MVD, la prueba puede repetirse usando una dilución mayor, sin
exceder la MVD.
Prueba de límite
Procedimiento: prepare las soluciones A, B, C y D como se muestra en
la Tabla 2, y realice la prueba en estas soluciones siguiendo el Prueba cuantitativa
procedimiento anterior para la prueba preparatoria, prueba para la
confirmación de la sensibilidad del lisado marcado. Procedimiento: la prueba cuantifica las endotoxinas bacterianas en
soluciones de muestra mediante titulación hasta un punto final. Prepare
las Soluciones A, B, C y D como se muestra en la Tabla 3, y analice
Tabla 2. Preparación de soluciones para la prueba de límite de gelclot
estas soluciones siguiendo el procedimiento de Prueba preparatoria,
Concentración de endotoxinas/ Prueba para la confirmación de la sensibilidad del lisado marcado.
solución a la cual Número de
Cálculo e interpretación: la prueba se considera válida cuando se
Solución* Se agrega endotoxina Réplicas 2 cumplen las siguientes tres condiciones: (1) Ambas réplicas de la solución
A Ninguno/Solución de muestra diluida de control negativo D son negativas; (2)
B 2λ / Solución de muestra diluida 2λ/ 2 Ambas réplicas de la Solución B de control de producto positivo son
C Agua para BET 2 positivas; y (3) La concentración de punto final media geométrica de la
D Solución C está en el rango de 0.5λ a 2λ .
Ninguno/Agua para APUESTA 2
Para determinar la concentración de endotoxinas de la Solución A,
* Prepare la Solución A y la Solución de control positivo del producto B utilizando una
calcule la concentración de punto final para cada réplica multiplicando
dilución no superior a la MVD y los tratamientos descritos para la Prueba de factores
cada factor de dilución de punto final por λ. La concentración de
de interferencia en las Pruebas preparatorias. Las soluciones de control positivo B y
endotoxina en la solución de muestra es la concentración de punto final
C contienen la solución de endotoxina estándar en una concentración que corresponde
de las réplicas. Si la prueba se realiza con una Solución de muestra diluida,
al doble de la sensibilidad del lisado marcado. La solución de control negativo D consta
calcule la concentración de endotoxina en la Solución de muestra original
de agua para BET.
multiplicándola por el factor de dilución. Si ninguna de las diluciones de la
Solución de muestra es positiva en un ensayo válido, informe la
concentración de endotoxina como inferior a λ (si se analizó la muestra
Interpretación—La prueba se considera válida cuando ambos diluida, informe como inferior a λ veces el factor de dilución más bajo de la
las réplicas de las Soluciones B y C son positivas y las de la Solución muestra). Si todas las diluciones son positivas, la concentración de
D son negativas. Cuando se encuentra un resultado negativo para ambas endotoxina se informa como igual o mayor que el mayor factor de dilución
réplicas de la Solución A, la preparación bajo prueba cumple con la prueba. multiplicado por λ (p. ej., factor de dilución inicial multiplicado por ocho
Cuando se encuentra un resultado positivo para ambas réplicas de la veces λ en la Tabla 3).
Solución A, la preparación bajo prueba no cumple con la prueba.
La preparación bajo prueba cumple con los requisitos de la
Cuando se encuentra un resultado positivo para una réplica de la probar si la concentración de endotoxina en ambas réplicas es menor
Solución A y un resultado negativo para la otra, repita que la especificada en la monografía individual.
4 85 Prueba de endotoxinas bacterianas Oficial 1 de diciembre de 2012
Tabla 4. Preparación de Soluciones para la Prueba de Inhibición/Realce para Técnicas Fotométricas
solución a la cual
Solución Concentración de endotoxina Se agrega endotoxina Número de réplicas
Automóvil club británico Ninguno Solución de muestra No menos de 2
Cama y desayuno Concentración media de la curva estándar Solución de muestra No menos de 2
Al menos tres concentraciones (la concentración más baja se denomina
CC
λ) Agua para APUESTA Cada uno no menos de 2
Dd Ninguno Agua para APUESTA No menos de 2
a Solución A: La solución de muestra se puede diluir para que no exceda la MVD. b Solución
B: La preparación bajo prueba a la misma dilución que la Solución A, que contiene endotoxina añadida a una concentración igual o cercana a la mitad de la curva estándar. c Solución C: La
endotoxina estándar en las concentraciones utilizadas en la validación del método descrito para la Garantía de Criterios para la Curva Estándar bajo Pruebas Preparatorias (controles positivos).
d Solución D: Agua para BET (control negativo).
TÉCNICAS CUANTITATIVAS FOTOMÉTRICAS fabricante de lisado para generar la curva estándar. Realice el ensayo utilizando al menos tres
réplicas de cada concentración de endotoxina estándar de acuerdo
con las instrucciones del fabricante para el lisado (proporción de
volumen, tiempo de incubación, temperatura, pH, etc.). Si el rango
Técnica turbidimétrica deseado es superior a dos logaritmos en los métodos cinéticos, se
deben incluir estándares adicionales para poner entre paréntesis cada
Esta técnica es un ensayo fotométrico que mide los aumentos incremento logarítmico en el rango de la curva estándar. El valor absoluto
en la turbidez de los reactivos. Sobre la base del principio de ensayo del coeficiente de correlación, r, debe ser mayor o igual a 0,980 para el
particular empleado, esta técnica se puede clasificar como un ensayo rango de concentraciones de endotoxinas establecido.
turbidimétrico de punto final o un ensayo turbidimétrico cinético. El
ensayo turbidimétrico de punto final se basa en la relación cuantitativa Prueba de factores de interferencia—Seleccione una concentración
entre la concentración de endotoxinas y la turbidez (absorbancia o de endotoxina en o cerca del centro de la curva estándar de endotoxina.
transmisión) de la mezcla de reacción al final de un período de Prepare las Soluciones A, B, C y D como se muestra en la Tabla 4.
incubación. El ensayo cinéticoturbidimétrico es un método para medir Realice la prueba en las soluciones A, B, C y D al menos por
el tiempo (tiempo de inicio) necesario para alcanzar una absorbancia o duplicado, de acuerdo con las instrucciones para el lisado empleado,
transmisión predeterminada de la mezcla de reacción, o la tasa de por ejemplo, en relación con el volumen de la solución de muestra y el
desarrollo de turbidez. La prueba se lleva a cabo a la temperatura de
lisado TS, la proporción de volumen de la solución de muestra y el lisado
incubación recomendada por el fabricante del lisado (que suele ser de TS, tiempo de incubación, etc
37 ± 1°). La prueba se considera válida cuando se cumplen las siguientes
condiciones.
1. El valor absoluto del coeficiente de correlación de la curva
estándar generada con la Solución C es mayor o igual a
Técnica cromogénica 0,980.
2. El resultado con la Solución D no excede el límite del valor en
Esta técnica es un ensayo para medir el cromóforo liberado de un
blanco requerido en la descripción del reactivo de lisado
péptido cromogénico adecuado por la reacción de endotoxinas con
empleado, o es menor que el límite de detección de endotoxinas
lisado. Sobre la base del principio de ensayo particular empleado, esta
del reactivo de lisado empleado.
técnica se puede clasificar como un ensayo cromogénico de punto final
Calcule la recuperación media de la endotoxina añadida restando la
o un ensayo cromogénico cinético. El ensayo cromogénico de punto
concentración media de endotoxina en la solución, si la hay (Solución
final se basa en la relación cuantitativa entre la concentración de
A, Tabla 4), de la que contiene la endotoxina añadida (Solución B,
endotoxinas y la liberación de cromóforo al final de un período de Tabla 4). Para que se considere libre de factores que interfieran con el
incubación. El ensayo cinéticocromogénico es un método para medir el
ensayo en las condiciones de la prueba, la concentración medida de la
tiempo (tiempo de inicio) necesario para alcanzar una absorbancia endotoxina añadida a la Solución de muestra debe estar dentro del 50
predeterminada de la mezcla de reacción o la velocidad de desarrollo
% al 200 % de la concentración de endotoxina añadida conocida después
del color. La prueba se lleva a cabo a la temperatura de incubación de restar cualquier endotoxina detectada en la solución sin endotoxina
recomendada por el fabricante del lisado (que suele ser de 37 ± 1°).
añadida.
Cuando la recuperación de endotoxinas está fuera del rango
especificado, se considera que la solución de muestra bajo prueba
Pruebas preparatorias contiene factores que interfieren. Luego, repita la prueba usando una
dilución mayor, sin exceder la MVD. Además, la interferencia de la
Para asegurar la precisión o validez de las técnicas turbidimétricas Solución de muestra o la Solución de muestra diluida que no supere la
y cromogénicas, se realizan pruebas preparatorias para verificar MVD puede eliminarse mediante un tratamiento validado adecuado,
que los criterios para la curva estándar sean válidos y que la solución como filtración, neutralización, diálisis o tratamiento térmico. Para
establecer que el tratamiento elegido elimina efectivamente la interferencia
de la muestra no interfiera con la prueba. Se requiere la validación del
método de prueba cuando cambian las condiciones que pueden influir sin pérdida de endotoxinas, realice el ensayo descrito anteriormente,
en el resultado de la prueba. utilizando la preparación a examinar a la que se le ha agregado la
Endotoxina Estándar y que luego se ha sometido al tratamiento elegido.
Garantía de los criterios para la curva estándar: la prueba debe
realizarse para cada lote de reactivo de lisado. Usando la solución
estándar de endotoxina, prepare al menos tres concentraciones de
endotoxina dentro del rango indicado por el
Procedimiento de prueba La concentración de endotoxina que se encuentra en la Solución A está
dentro del rango de 50% a 200%.
Siga el procedimiento descrito para Prueba de factores de interferencia en 3. El resultado del control negativo Solución D no supera el límite del
Prueba preparatoria, inmediatamente anterior. valor en blanco requerido en la descripción del lisado empleado, o
es inferior al límite de detección de endotoxinas del reactivo de
lisado empleado.
Cálculo
Calcular la concentración de endotoxinas de cada una de las réplicas de la
Solución A, utilizando la curva estándar generada por el control positivo Solución Interpretación
C. La prueba se considera válida cuando se cumplen los siguientes tres requisitos.
En los ensayos fotométricos, la preparación bajo prueba cumple con la
1. Los resultados de la Solución de control C cumplen con los requisitos de prueba si la concentración media de endotoxinas de las réplicas de la Solución
validación definidos para Aseguramiento de Criterios para la Curva A, después de la corrección por dilución y concentración, es menor que el límite
Estándar bajo Pruebas Preparatorias de endotoxinas para el producto.
.
2. La recuperación de endotoxinas, calculada a partir de la concentración
encontrada en la Solución B después de restar la concentración

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2λ/Solución de muestra Solución de muestra 1 2 minutos 4

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