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FICHA  TÉCNICA

AGAR  MACCONKEY  SORBITOL  (CT­SMAC)
DETECCIÓN  DE  ESCHERICHIA  COLI  O157

1 USO  PREVISTO

El  agar  MacConkey  Sorbitol  (CT­SMAC)  es  un  medio  selectivo  utilizado  para  el  aislamiento  y  la  diferenciación  de  Escherichia  coli  O157  en  
agua,  leche,  productos  de  carne  vacuna  y  otras  preparaciones  alimenticias.

2 HISTORIA

El  serotipo  O157  de  Escherichia  coli  es  un  serotipo  patógeno,  identificado  por  primera  vez  en  1982  como  el  agente  responsable  de  la  colitis  
hemorrágica.  Los  alimentos  de  origen  animal  son  la  principal  fuente  de  contaminación  humana.  El  tejido  de  res  y  cerdo,  las  aves  de  corral  
y  ciertos  productos  lácteos  no  pasteurizados  han  sido  implicados  en  toxiinfecciones  relacionadas  con  Escherichia  coli  O157.  Este  
microorganismo  también  se  ha  aislado  de  patatas,  sidra  de  manzana  y  agua  del  grifo.

En  1985,  Farmer  et  Davis  confirmaron  el  trabajo  de  Wells  et  al.  (1983),  al  demostrar  que  el  serotipo  O157  se  caracteriza  por  su  incapacidad  
para  fermentar  sorbitol,  mientras  que  más  del  80%  de  las  cepas  de  E.  coli  son  sorbitol­positivas.  En  1986,  March  &  Ratnam  reforzó  el  
interés  por  el  uso  del  agar  MacConkey­Sorbitol  para  la  detección  de  Escherichia  coli  O157.  En  1991,  Chapman  introdujo  la  cefixima  para  
inhibir  Proteus.  En  1993,  Zadik  combinó  la  acción  del  telurito  de  potasio  con  la  de  la  cefixima.  La  adición  de  estos  componentes  al  agar  
aumenta  la  frecuencia  de  detección  de  colonias  O157  al  eliminar  un  amplio  espectro  de  la  microflora  secundaria  que  puede  estar  presente  
en  la  muestra.

3 PRINCIPIOS

La  triptona  y  el  digerido  péptico  de  carne  favorecen  el  crecimiento  de  Escherichia  coli  O157.

Los  microorganismos  sorbitol  negativos  (sobre  todo  O157)  producen  colonias  transparentes.

Los  microorganismos  sorbitol  positivos  se  detectan  cuando  las  colonias  se  vuelven  rojas  (bajo  la  acción  del  rojo  neutro).

La  microflora  secundaria  es  inhibida  por  la  asociación  entre  las  sales  biliares,  el  cristal  violeta,  la  cefixima  y  el  telurito  de  potasio.

Algunas  cepas  de  Escherichia  coli  O157  son  positivas  para  sorbitol  y  no  se  detectarán  directamente.

4 COMPOSICIÓN  TÍPICA

La  composición  se  puede  ajustar  para  obtener  un  rendimiento  óptimo.

Para  1  litro  de  medio:
­  Triptona .................................................. .................................................... ..................  17,0  g  ­  Digerido  
péptico  de  Carne ....................... .................................................... .........................  3,0  g  ­  D­
Sorbitol ................. .................................................... ...............................................  10,0  g  ­  Sales  biliares  
n°3 ........................................... .................................................... ...................  1,5  g  ­  Cloruro  de  
sodio ......................... .................................................... ..............................  5,0  g  ­  Rojo  
neutro............ .................................................... .............................................  30,  0  mg  ­  Cristal  
violeta.................................................... .................................................... ..............  1,0  mg  ­  
Cefixima .............................. ............................. .................................................... ....  0,05  mg  ­  Telurito  de  
potasio....................................... .................................................... ...........  2,5  mg  ­  Agar  
bacteriológico................................ .................................................... ..................  13,5g

pH  de  los  medios  listos  para  usar  a  25  °C:  7,1  ±  0,2.

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Para  50  g  de  medio  base  deshidratado  BK147
Para  un  vial  de  suplemento  BS037
­  Triptona .................................................. .............................17,0  g  ­  Digerido   (Qs  500  mL)
péptico  de  carne ............ ..........................................................3,0  g  ­  D­
sorbitol .............................................. .............................10,0  g  ­  Sales  biliares   ­  Cefixima .............................................  0,025  mg  
n°3 .......... .................................................... ............1,5  g  ­  Cloruro  de   ­  Telurito  potásico ............ ......  1,25  miligramos
sodio ............................... ..................................5,0  g  ­  Rojo  
neutro ....... .................................................... .............30,0  mg  ­  Cristal  
violeta ............................... .............................................1,0  mg  ­  Agar  
bacteriológico .... .................................................... .....13,5g

5 PREPARACIÓN

•  Disolver  50,0  g  de  medio  de  base  deshidratada  (BK147)  en  1  litro  de  agua  destilada  o   Reconstitución :  
agua  desmineralizada.  •  
50,0  g/L
Lentamente  llevar  a  ebullición,  revolviendo  hasta  su  completa  disolución.  •  
Divida  en  alícuotas  de  100  ml  (por  vial).  •  Esterilizar  en  autoclave  a  121  °C     Esterilización :
durante  15  minutos.  •  Enfriar  y  mantener  el  medio  en  estado  fundido  a   15  min  a  121  °C
44­47  °C.  •  Reconstituir  el  suplemento  selectivo  (BS037)  con  5  mL  de  agua  
estéril.  •  Agitar  el  matraz  o  vórtice  para  obtener  la  disolución  completa,  todo  el  tiempo

evitando  la  formación  de  espuma.   Suplemento  preparación  5  mL  
agua  estéril
•  Agregue  asépticamente  1  ml  del  suplemento  selectivo  reconstituido  (BS037)  por  vial  de  100  ml  de  medio  
base.  •  Mezclar  bien.  •  Verter  en  placas  de  Petri  estériles  y  dejar  solidificar  sobre  una  superficie  fría.
  Añadir  a  la  base:
1mL/100mL

6 INSTRUCCIONES  DE  USO

•  Seque  las  placas  en  una  incubadora,  con  las  cubiertas  parcialmente     Inoculación :
retiradas.  •  Después  del  enriquecimiento  en  caldo  de  triptona  de  soja  modificado  con  novobiocina  (BK150)   En  la  superficie
y  después  de  la  separación  inmunomagnética,  inocular  las  placas  y  esparcir  los  microbilletes.  •  
Incubar  a  37  °C  durante  18  a  24  horas.   Incubación :  
18  h  a  24  h  a  37  °C

7 RESULTADOS

Escherichia  coli  O157  forma  colonias  lisas  y  transparentes  que  pueden  presentar  un  halo  anaranjado  de  alcalinización.
Como  la  especificidad  de  los  medios  no  es  total,  las  colonias  sospechosas  deben  someterse  a  pruebas  de  aglutinación  serológica  en  portaobjetos  
con  la  ayuda  de  antisueros  específicos  O157.

Ver  ANEXO  1:  SOPORTE  FOTOGRÁFICO.

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8 CONTROL  DE  CALIDAD

Medios  de  base  deshidratados:  polvo  beige­rosado,  fluido  y  homogéneo.
Suplemento  selectivo :  gránulo  blanco  que,  después  de  la  reconstitución,  proporciona  una  solución  transparente  y  límpida.
Medios  preparados:  agar  rojo­violeta

Respuesta  típica  del  cultivo  después  de  21  horas  de  incubación  a  37  °C  (NF  EN  ISO  11133):

microorganismos Crecimiento Características

Escherichia  coli  O157:H7 WDCM  00014 Bien,  puntuación  2 colonias  transparentes  

Escherichia  coli  sorbitol  positivo WDCM  00013 Débil,  puntuación  0­1 colonias  rosa­rojas
WDCM  00034 Inhibido,  puntuación  0 ­
estafilococo  aureus

9 ALMACENAMIENTO /  VIDA  ÚTIL

Medios  base  deshidratados:  2­30  °C.
Cefixima­Telurito  Suplemento  selectivo:  2­8  °C.
Las  fechas  de  caducidad  se  indican  en  las  etiquetas.

Suplemento  reconstituido  (*) :  30  días  a  2­8  °C.
Medios  base  preparados  en  viales  (*):  180  días  a  2­8  °C.
Medios  completos  preparados  en  placas  (*) :  30  días  a  2­8  °C.
(*)  Valor  de  referencia  determinado  en  condiciones  estándar  de  preparación,  siguiendo  las  instrucciones  del  fabricante.

10 EMBALAJE

Medios  base  deshidratados  (sin  cefixima  ni  telurito  potásico) :  botella  de  500  
g .................................. .................................................... .................................................... ...........BK147HA

Cefixima­Telurito  Suplemento  selectivo :  10  viales  qsp  
500  mL ....................................... .................................................... .................................................... ..BS03708

11 BIBLIOGRAFÍA

Wells,  JG,  BR  Davis,  IK  Wachsmuth,  LW  Riley,  RS  Remis,  R.  Sokolow  y  GK  Morris.  1983.  Investigación  de  laboratorio  de  brotes  de  colitis  hemorrágica  
asociados  con  un  serotipo  raro  de  Escherichia  coli .  J.  Clin.  Microbiol.  18 :  512­520.

Farmer,  JJ  III  y  BR  Davis.  1985.  Medio  de  fermentación  de  antisuero­sorbitol  H7:  un  medio  de  detección  de  un  solo  tubo  para  detectar  Escherichia  coli  
O157:H7  asociado  con  colitis  hemorrágica.  J.  Clin.  Microbiol.  22 :  620­625.

March,  SB  y  S.  Ratnam.  1986.  Medio  Sorbitol­MacConkey  para  la  detección  de  Escherichia  coli  O157 :  H7  asociado  con  colitis  hemorrágica.  
J.  Clin.  Microbiol.  23 :  869­872.

Chapman,  PA,  CA  Siddons,  PM  Zadik  y  L.  Jewes.  1991.  Un  medio  selectivo  mejorado  para  el  aislamiento  de  Escherichia  coli  O157.  J.Med.  Microbiol.  
35 :  107­110.

Zadik,  PM,  PA  Chapman  y  CA  Siddons.  1993.  Uso  de  telurito  para  la  selección  de  Escherichia  coli  O157  verocitotoxigénica.  J.Med.  Microbiol.  39 :  
155­158.

NF  EN  ISO  16654.  Julio  2001.  Microbiología  de  los  alimentos.  Método  horizontal  para  la  detección  de  Escherichia  coli  O157.

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12 INFORMACIÓN  ADICIONAL

La  información  proporcionada  en  las  etiquetas  prevalece  sobre  las  formulaciones  o  instrucciones  descritas  en  este  documento  y  son  
susceptibles  de  modificación  en  cualquier  momento,  sin  previo  aviso.

Código  del  documento :  CT  SMAC  _ENv6  
Fecha  de  creación :  005­2016  
1­2003  A
Octualizado :  
rigen  de  la  
revisión :  Actualización  general.

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ANEXO  1 :  SOPORTE  FOTOGRÁFICO

Agar  MacCONKEY  Sorbitol  (CT­SMAC)

Detección  de  Escherichia  coli  O157.

Resultados :

Crecimiento  obtenido  después  de  24  horas  de  incubación  a  37  °C.

Escherichia  coli  O157

Colonia  característica:  
Lisa,  transparente,  puede  
tener  un  halo  anaranjado  
de  alcalinización.

Nota :  Las  colonias  se  colorean  ligeramente  artificialmente  por  la  absorción  de  los  colorantes  presentes  en  la  formulación  del  medio.
Las  colonias  de  E.  coli  non­O157:H7  son  rojas  y  de  mucho  mayor  tamaño.

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