Facultad de Ciencias de la Vida

Departamento de Ciencias Biológicas

Clase 02
Fisiología Bacteriana
Metabolismo y Crecimiento
Bacteriano

Ruth González ruth.gonzalezm@gmail.com

 ESTRUCTURAS Y FUNCIÓN

 Exopolisacáridos

 Pared celular y estructuras asociadas

 Membrana plasmática

 Apéndices proteicos

 Esporas y cuerpos de inclusión

 Componentes externos. Exopolisacáridos

Exopolisacáridos (Glicocálix): Capa o cubierta de polisacáridos

que se dispone por fuera de la pared celular de bacterias.

Cápsula
- Unión firme a la bacteria (estructura rígida y
compacta).
- Importante en patogenicidad (Ag K)
- Inhibe la Fagocitosis
- Facilita la adherencia a superficies inertes

Capa mucoide (“slime”)

- Unión débil a la bacteria
- No tiene una organización determinada
- Participa en la formación de biopelículas
- Protege de la acción del complemento,
anticuerpos y antimicrobianos. Microfotografía de cápsula
(Klebsiella pneumoniae)
 Superficie celular

Bacterias Gram (-): Pared Bacterias Gram (+): Pared

delgada de Peptidoglicán, gruesa de Peptidoglicán, ác.
periplasma, Membrana Teicoico y Lipoteicoico,
Externa (LPS o LOS, Porinas, Proteínas asociadas (M).
Lipoproteína)
Gram Positivo
 Peptidoglicán
Peptidoglicán (mureína):
Capas de polisacáridos entrelazadas por
puentes peptídicos

Figura 4.13 (a)

Cadena polisacárida: N-acetil glucosamina (NaG) + ác. N-acetil murámico (NaM)

Puentes: Tetrapéptidos (unido a NaM)
 Biosíntesis Peptidoglicán

Gram negativo

Esquema de la biosíntesis del peptidoglicán:

Monómeros se sintetizan en el citoplasma, se Gram positivo

exportan a través de la membrana Diferencias entre Gram – y +

citoplasmática (bactoprenol: transportador
lipídico) y se unen al peptidoglicán
preexistente.
 Ácidos Lipoteicoicos y teicoicos

Polisacáridos acídicos presentes sólo en Gram positivos

Ac. Lipoteicoico: Polímero de Glicerol fosfato unido

(anclado) a lípidos de membrana citoplasmática
Ac. Teicoico: Polímero de Ribitol fosfato unido de
Estructura del Ribitol manera covalente al peptidoglicán
(Ac. Teicoico producido
por B. subtilis) Funciones:
- Estabilización del peptidoglicán
- Adhesión celular (“Adhesina”)
- Le dan la carga negativa a la envoltura bacteriana
 Gram Negativo

Membrana externa
Pared celular
(peptidoglicán)

Periplasma

Membrana interna
(citoplasmática)
 Membrana externa. Lipopolisacárido (LPS)
Molécula compuesta por:

 Lípido A o “endotoxina”: una porción lipídica anclada en la ME

 Core: Oligosacárido central
 Antígeno O (Región altamente antigénica, antígeno Somático): unidades
repetidas de un monómero compuesto por distintos hidratos de carbono.
Ej: Escherichia spp., Salmonella spp., Shigella spp. y Klebsiella spp.

Unidad repetida de polisacárido “Core” ENDOTOXINA !!!

(Antígeno O) Oligosacárido central
Membrana externa. Porinas

Definición
Grupo de proteínas que generan poros o
canales acuosos que permiten el paso de
pequeñas moléculas hidrofílicas a través
de membranas biológicas

 Características
 Estructura de “Barril β”
 (16-18 hebras β empacadas en forma antiparalela)
 Canal hidrofílico interior
 Exterior altamente hidrofóbico
 Asociada a la permeabilidad de la pared
 Membrana externa. Periplasma

 Contiene al peptidoglicán

 Posee consistencia de “gel”

 Representa entre 20 y un 40% del volumen celular total

 Ambiente altamente oxidante (reacciones de oxidación como

formación de puentes disúlfuro intra e inter moleculares)

 En general, contiene tres tipos de proteínas:

- Enzimas hidrolíticas (metabólicas y detoxificantes)
- Proteínas de unión para sustratos específicos (transportadores)
- Quimioreceptores (involucrados en quimiotaxis)
Membrana citoplasmática

No contiene esteroles
Membrana citoplasmática. Funciones principales

Barrera de permeabilidad
Separa el medio interno y externo
Permeabilidad selectiva a solutos

Rol estructural
Síntesis y transporte de
macromoléculas

Señalización al medio intracelular

Quimiotaxis

Generación de energía
Gradientes de iones
Síntesis de ATP
Funciones principales. Transporte de solutos
Transporte activo y pasivo Tipos de transporte de solutos
Uniporte
Antiporte
Simporte

La membrana citoplasmática se encuentra poblada de múltiples proteínas

responsables del transporte selectivo de solutos
Funciones principales. Obtención de energía

 Generación de potenciales de
membrana. Bombeo de iones H+, Na+,etc.
 Reacciones de óxido/reducción.
 Síntesis de ATP.
 Fotosíntesis* (de tipo anoxigénica, por
ej en cianobacterias)

Complejo
ATPasa
Funciones principales. Receptores y Sensores

Sistemas encargados de detectar

cambios en el medio ambiente del
microorganismo y de enviar esta
información al medio intracelular
por medio de una señal molecular

Objetivo:
Modificar la fisiología bacteriana para
lograr adaptarse a las condiciones del
medio externo
 Mesosomas, cromotóforos o tilacoides

Membrana plasmática Pared Nucleoide

celular

Mesosoma Septum (Tabique)

Invaginaciones de la membrana citoplasmática (superficie)

Únicas estructuras membranosas internas de la bacteria
Mesosomas: Se cree sitio de anclaje del nucleoide bacteriano
para empezar la duplicación del DNA
Cromotóforos y tilacoides: contienen enzimas y pigmentos
relacionados con la fotosíntesis
 Apéndices proteicos. Flagelo

Flagelo: Estructura semejante a pelos (filamentos helicoidales)

formados por polímeros de Flagelina.

 Estructura: Anclado a maquinaria rotatoria presente en la

membrana citoplásmatica (“cuerpo basal” a través de una estructura
de gancho (“hook”). Altamente antigénico (antígeno H o flagelar)
 Función: Responsable de la movilidad bacteriana (consumo de
energía). Patogenicidad asociada a la movilidad.
Apéndices proteicos. Flagelo

Gram negativo Gram positivo

 Apéndices proteicos. Flagelo

Flagelo monótrico (polar)

Vibrio cholerae Flagelo perítrico
Salmonella enteritidis

Flagelo lofótrico
Helicobacter pylori

Flagelo anfítrico
Spirillum sp.
 Flagelo. Movilidad

Taxia
Movimiento dirigido en respuesta a un gradiente fisicoquímico

Ejemplos de Taxias:
Quimiotaxia
Fototaxia
Aerotaxia

 Las bacterias “sienten” periódicamente su microambiente y procesan esa

información a través de una vía de transducción de señales que controla el
sentido y la velocidad de la rotación flagelar.
 Los procariontes móviles se acomodan a su entorno (fisicoquímico) y
pueden alejarse o aproximarse a un hábitat en respuesta a diversos
estímulos.
 Este mecanismo representa un medio de competir con éxito con otros
organismos y lograr su supervivencia.
 Flagelo perítrico. Movilidad y Quimiotaxia

Quimiotaxia: La direccionalidad del movimiento está dada por variaciones en la

proporción de tiempo en que el flagelo está rotando a favor o en contra de los
punteros del reloj. De esta forma:
Rotación a favor de los punteros del reloj (“Clockwise”): NADA EN TUMBOS
Rotación en contra de los punteros del reloj (“Counter clockwise”): AVANZA
 Apéndices proteicos. Fimbrias

Fimbrias: Apéndices o microfibrillas

de naturaleza proteíca (pilina)

Función: Asociado a adherencia

específica con bacterias y células
eucariontes. No participan en el
movimiento.
Fimbrias perítricas
Clasificación principal según
expresión y ensamblaje:
a) las perítricas
b) las tipo “Curli”
c) pili tipo IV, que es polar

Pili tipo IV Fimbria tipo “Curli”

 Fimbrias. Pilus (Pili)

 Apéndice retráctil de mayor

longitud constituido por Pilina
(proteína retráctil)

Intervienen en el proceso de
conjugación: Pili sexual

Conjugación: Intercambio de
material genético entre bacterias Fimbrias Pili sexual
Esporas

 Se describen sólo en dos géneros

bacterianos importantes para el ser
humano:
Clostridium y Bacillus

 Las esporas se originan dentro de la

célula:
Proceso de diferenciación celular

 Compuesto fundamentalmente por DNA

bacteriano muy compactado

 Función: resistencia al calor, desecación,

radiación, etc.

 Viable por cientos de años

Esporulación

Figura 4.21
Cuerpos de Inclusión (Gránulos)

 Son depósitos de diversos

metabolitos primarios y secundarios
 Ej.: Glicógeno, polihidroxibutirato PHB,
polifosfatos, etc.
 Gránulos o corpúsculos densos (muy
compactos)
 Generalmente, material poco soluble
o insoluble

Gránulos de PHB en
Rhodovibrio sodomensis
Cuerpos de Inclusión (Vesículas de Gas)

Vesículas de gas,
para regular la
flotación

Cianobacteria
 METABOLISMO Y CRECIMIENTO
División Bacteriana
 Crecimiento: Incremento del número de individuos (M.O.) en una población.
Implica un aumento de la biomasa del M.O.

 Velocidad de crecimiento: Crecimiento de un M.O. por unidad de tiempo.

 El tiempo requerido para la duplicación bacteriana es variable para cada
especie. (Ej: 20 min para Escherichia coli; 24 horas para Mycobacterium
tuberculosis)
 Tiempo de generación (g): Tiempo requerido para que se formen dos
células hijas a partir de una célula parental. Es el tiempo necesario para
que la población bacteriana se duplique.

Implica la duplicación de todos los componentes estructurales de la célula

División Bacteriana: Fisión Binaria

Reflejado
(poblacionalmente) por un
aumento en el número de
organismos presentes
División Bacteriana: Crecimiento exponencial
Crecimiento Logarítmico (Progresión Geométrica)
20 21 22 23 24
División Bacteriana: Crecimiento exponencial
 Medición de crecimiento bacteriano

 Recuento total de células

Conteo directo bajo el microscopio usando una muestra (diluida) de
cultivo bacteriano y una cámara de recuento calibrada (Petroff-
Hausser).

Este método no discrimina la viabilidad de las bacterias en la muestra

 Medición de crecimiento bacteriano

 Recuento de células viables

Dilución seriada de la muestra en
medio o buffer estéril y siembra
(“plaqueo”) sobre medio sólido.
Medición de crecimiento bacteriano

Medición espectrofotométrica
Fotométrica o turbidimétrica de un cultivo
bacteriano líquido

Este método no discrimina la viabilidad de las bacterias en la muestra

 Medición de crecimiento bacteriano

Etapas de la curva clásica de crecimiento bacteriano

 Fase lag: Crecimiento lento (etapa de acondicionamiento ambiental)
 Fase exponencial o logarítmica: Crecimiento bacteriano a máxima capacidad
 Fase estacionaria: Detención del crecimiento, no del metabolismo (estrés,
hambruna)
 Fase de decaimiento: Muerte celular (agotamiento del cultivo)
Factores que afectan el crecimiento bacteriano

 Temperatura

 Salinidad

 pH

 Oxígeno
 Factores que afectan el crecimiento bacteriano:
Temperatura

Las reacciones enzimáticas

ocurren a la máxima
velocidad posible.

Las reacciones enzimáticas

van aumentando su velocidad
de reacción. Consecuencias
moleculares de la
temperatura en el
crecimiento bacteriano

Congelamiento de la Desnaturación de proteínas;

membrana; el transporte colapso de la membrana
es tan lento que no hay citoplasmática; lisis térmica.
crecimiento.
 Factores que afectan el crecimiento bacteriano:
Temperatura

 Psicrófilos: Temperatura óptima baja (<1 a 15ºC).

 Mesófilos: Temperatura óptima en rango medio (25 a 42ºC).
 Termófilos: Temperatura óptima alta (50 a 70ºC).
 Hipertermófilos: Temperatura óptima muy alta (80 a >100ºC).
 Factores que afectan el crecimiento bacteriano:
Temperatura
Hipertermófilos
Aguas termales del
Parque Nacional Yellowstone

Thermus aquaticus
 Extremófilo, de la familia arquea
 T° óptima de crecimiento 70°C
 Fuente de la enzima Taq Polimerasa (PCR)
 Factores que afectan el crecimiento bacteriano:
Salinidad

 No halófilos: No toleran ni siquiera concentraciones moderadas de sal

 Halotolerantes: Toleran concentraciones moderadas de sal; crecen mejor sin ella
 Halófilos: Leves (1 a 6% NaCl) y Moderados (6 a 15% NaCl)
 Halófilos extremos: 15 a 30% NaCl
 Factores que afectan el crecimiento bacteriano:
Salinidad
Lago poblado por
Halobacterium salinarum

Halobacterium salinarum necesita 12 a 15% de NaCl en el medio para

crecer
Mar: 3% NaCl
Sangre: 0,85% NaCl
Factores que afectan el crecimiento bacteriano:
Acidez (pH)
 Factores que afectan el crecimiento bacteriano:
Acidez (pH)

Mina de cobre de Chuquicamata,

Aciditiobacillus ferrooxidans Región de Antofagasta, Chile
En medio altamente ácido (en H2SO4
concentrado, pH  1) es capaz de
oxidar minerales de cobre insolubles
como CuFeS2 (calcopirita), Cu2S
(chalcocita), CuS (covelita) y Cu5FeS4
(bornita), produciendo CuSO4
(soluble)
 Factores que afectan el crecimiento bacteriano:
Oxígeno

Grupo Relación con el O2 Metabolismo

Ejemplo

Aerobios
Estrictos Requerido Respiración aeróbica M.
luteus
Facultativos No requerido (Mejor con O2) Respiración, fermentación E.
coli
Microaerofílicos Requerido (Bajos niveles) Respiración aeróbica S.
volutans

Anaerobios
Aerotolerantes No requerido (Peor con O2) Fermentación S.
 Factores que afectan el crecimiento bacteriano:
Oxígeno

(a) Aeróbica (21%)

(b) Anaeróbica
(c) Facultativa
(d) Microaerofílica (5%-10%)
(e) Anaerobio aerotolerante

Crecimiento y concentración de oxígeno. El O2 penetra solo un poco en el tubo, de manera

que los aerobios estrictos crecen solamente cerca de la superficie.
(a) Los anaerobios, al ser sensibles al O2 crecen solo lejos de la superficie.
(b) Los aerobios facultativos pueden crecer tanto en presencia como en ausencia de O2, así que
están por todo el tubo; sin embargo, el crecimiento es mejor cerca de la superficie, porque los
organismos pueden respirar.
(c) Los microaerófilos crecen lejos de la zona más óxica.
(d) Los anaerobios aerotolerantes crecen por todo el tubo. El crecimiento no es mejor cerca de la
superficie, porque estos organismos solo pueden fermentar.
 Factores que afectan el crecimiento bacteriano:
Oxigeno

Jarra Anaeróbica (GasPack)

Diseñada para el crecimiento de bacterias anaeróbicas.
Mecanismo hermético, que posee un catalizador químico que consume
todo el oxígeno presente dentro del recipiente.
Factores que afectan el crecimiento bacteriano:
Oxígeno
Capnofilia
Cámara
Anaeróbica
 METABOLISMO

 Respiración aeróbica

 Respiración anaeróbica

 Fermentación ácido pirúvico

 Respiración aeróbica
Glicólisis

2 Gliceraldehido 3-fosfato
Glucosa

Figura 5.12
Piruvato

2 ATP
2 NADH = 6 ATP
8 ATP
Ciclo de Krebs

Piruvato Acetil- CoA

2 NADH = 6 ATP

2 GTP = 2 ATP
6 NADH = 18 ATP
2 FADH2 = 4 ATP

30 ATP
Fosforilación oxidativa. Transporte de electrones

1 Glucosa = 38 ATP
Glicólisis = 8 ATP
Ciclo de Krebs = 30 ATP
 Respiración aeróbica. Formas tóxicas del oxígeno

 Los radicales libres de O2 se generan durante el metabolismo

normal de las bacterias en la respiración aeróbica.
 Los radicales superóxido (O2-) e hidroxilo (HO•) reaccionan
rápidamente oxidando diversas macromoléculas orgánicas como
lípidos, proteínas y ácidos nucleicos.
 Esta oxidación provoca la destrucción de estructuras biológicas,
como membranas, complejos multiproteicos, DNA, etc.
 Enzimas detoxificantes

“Presencia de enzimas capaces de degradar los radicales libres de

O2 le permiten al microorganismo utilizar el O2 como aceptor final
de electrones en la respiración aeróbica”
Respiración anaeróbica
Fosforilación oxidativa

Aceptor final diferente al oxígeno

- Nitrato  Nitritos, oxido de nitrógeno, N2.

- Sulfuro Sulfato
- Azufre  Sulfato
- Etc.
 Fermentación del ácido pirúvico

Fermentación Fermentación
láctica alcohólica
 Fermentación del ácido pirúvico

Alcohol
deshidrogenasa

2 Etanol

La fermentación alcohólica es ampliamente usada en la fabricación

de alimentos como vino, cerveza, pan.
 Fermentación del ácido pirúvico

Lactato
deshidrogenasa
2 x Lactato

El lactato acumulado baja el pH, lo que hace que las proteínas de la

leche precipiten en el proceso de fabricación del queso