TALLER PRÁCTICO

Sandra Rodriguez Mic. MSc en microbiología candidato a Doctor en Ciencias Agrarias

TALLER PRÁCTICO 5
Determinación del crecimiento en microorganismos fotosintéticos
(Actividad teórico-práctica)

El crecimiento microbiano puede ser determinado mediante diferentes métodos de

cuantificación de su biomasa. Entre los más utilizados se encuentran los siguientes:

a. Turbidez mediante espectrofotometría a una longitud de onda indicada.

b. Peso seco.
c. Recuento celular (x106 cel/ml) o de colonias (UFCx106/ml) en medio sólido.
d. Clorofila a, para el caso de cianobacterias y microalgas.
e. Ficocianina o ficoeritrina, para el caso de cianobacterias.
f. Citometría de flujo.

En la presente actividad práctica se presentan diversos resultados obtenidos a partir de

cultivos de microorganismos en función de diferentes parámetros ambientales. Para lo cual
es necesario determinar la velocidad de crecimiento (µ: div-1) y el tiempo de duplicación
(minutos, horas o días).

El primer paso a seguir corresponde a la inclusión de los resultados respectivos en una hoja
de cálculo (EXCEL) y luego se procede a la elaboración de una gráfica de la curva de
crecimiento; en la cual el eje “Y” corresponde al parámetro de crecimiento seleccionado en
cada experimento; mientras que en el eje de las “X “se indica la edad del cultivo (horas,
días).

Para la determinación de µ se requiere seleccionar dos puntos de muestreo, uno de los

cuales coincide con un valor menor (X1) y el otro con un valor superior (X2). Mientras que,
t1 y t2 corresponden al tiempo indicado para X1 y X2. Luego para determina µ se aplica la
siguiente fórmula:

µ= Ln (X2-X1)/t2-t1

Una vez obtenida µ se procede a determinar el tiempo de duplicación (td), para lo cual se
utiliza la siguiente fórmula:

td = Ln2/ µ ln2= 0.693

Objetivo:
1. Determinar parámetros cinéticos de crecimiento (µ y td) y discutir resultados en relación
a la curva de crecimiento obtenidas de diversos cultivos de microorganismos fotosintéticos.

Instrucciones:
1.-Se presentan varias tablas con datos sobre crecimiento de cianobacterias y microalgas en
función de variables independientes, a partir de las cuales debe introducir la data en el
PROGRAMA EXCEL de computación a fin de elaborar las gráficas respectivas que
describen la curva de crecimiento para cada caso.

2.-Para cada gráfica seleccionar la fase exponencial a partir de la cual se van a ubicar
valores de edad de cultivo con sus respectivos valores de crecimiento (densidad celular,
peso seco, absorbancia, clorofila). De tal manera que, uno de estos puntos representará el
inicio o el valor más bajo de la fase exponencial y el otro punto corresponderá al valor más
elevado o el final de esta fase de crecimiento.

3.-Aplicar la ecuación para determinar la pendiente de la recta que corresponde a “µ” a la

constante de crecimiento del microorganismo y luego, a partir de este valor estimar “Td”,
que explica el tiempo de duplicación en términos de tiempo (minutos, horas o días).

4.-Cada uno de estos parámetros cinéticos de crecimiento obtenidos para cada curva, deben
de ser comparados entre los diferentes tratamientos, a fin de discutir el que haya inducido el
mejor crecimiento, y los valores más elevados de “µ” y el menor tiempo de duplicación.

5.- Para efectos de enriquecer la información obtenida para cada curva de crecimiento, se
debe seleccionar los valores obtenidos en fase estacionaria con la finalidad de comparar el
tratamiento que produjo el mayor crecimiento. Estos valores son los tomados en cuenta
para los análisis estadísticos para valorar la producción de biomasa por parte de cada
microalga o cianobacteria.

6.-A continuación se registran tablas de resultados obtenidas en diferentes estudios sobre

crecimiento de microalgas y cianobacterias.

Problemas:
1. Crecimiento mediante turbidez (750nm) de la cianobacteria Anabaena en función de la
fuente de Carbono (CO2).

EC (días) Bajo CO2 Alto CO2

2 0,839 0,943
4 1,564 1,724
6 2,454 2,517
7 2,98 2,776
8 3,16 2,964
9 3,432 3,116
10 3,68 3,5
11 3,608 3,532
12 3,464 3,484
14 3,72 3,596
15 3,484 3,712
EC: edad del cultivo

2. Data de crecimiento (x106 cel/ml) de la microalga Chlorella según intensidad luminosa

EC (días) (2Klx) (4 Klx) (8Klx)

0 1 1 1
3 12,55 18,3 27,7
6 52,4 98 131,25
9 213,3 131,6 137,3
12 224,5 183,5 212,3
15 219,8 229,6 218,7
19 241,5 200,6 223,35
21 255,4 210,3 303,85
24 210 212,2 273,3
27 244,6 224,8 195,6
30 248,2 190,9 203,6
33 205,4 188,9 145,0
36 243,3 232,6 171,85

3. Crecimiento mediante turbidez (750nm) de la cianobacteria Pseudabaena en función del

medio de cultivo.

ALGAL(6mM ALGAL(8mM
BG11c (25%) BG11o- ) )
1 0,104 0,108 0,123 0,106
3 0,262 0,254 0,282 0,333
5 0,410 0,337 0,479 0,513
7 0,451 0,383 0,684 0,657
9 0,388 0,347 0,809 0,748
11 0,460 0,381 0,881 0,790
 13 0,446 0,312 0,922 0,819
15 0,478 0,367 0,904 0,825

4. Crecimiento mediante turbidez (750nm) de la cianobacteria Synechocystis a diferentes

salinidades (%).

E. C. (días) 0% 1,5% 2,0% 3,5%

1 0,051 0,091 0,097 0,088
4 0,159 0,294 0,284 0,228
7 0,286 0,448 0,482 0,314
9 0,394 0,526 0,542 0,404
12 0,766 0,624 0,547 0,504
14 0,704 0,695 0,648 0,481
16 0,504 0,660 0,606 0,414
19 0,515 0,698 0,641 0,437
22 0,368 0,666 0,600 0,428
26 0,418 0,671 0,541 0,388
29 0,388 0,657 0,503 0,368

5. Crecimiento mediante turbidez (750nm) de la cianobacteria Synechocystis con NaHC03

(mM).

ABSORBANCIA NaHCO3
EC (días) Control 5 mM 10 mM 15 mM
0 0,080 0,080 0,080 0,080
3 0,103 0,114 0,115 0,123
6 0,106 0,120 0,140 0,180
9 0,180 0,350 0,410 0,410
12 0,364 0,626 0,685 0,667
15 0,532 0,764 0,820 0,810
18 0,810 0,900 0,940 0,915
21 0,910 0,960 0,980 0,960
24 0,970 0,980 1,010 1,000
27 1,020 1,020 1,050 1,030
30 0,990 1,020 1,040 1,020
33 0,933 0,997 1,021 1,013
6. Efecto del acetato (mM) sobre el crecimiento (Abs 750nm) de la cianobacteria
Synechocystis.
ACETATO
EC CONTROL 1mM 5mM 10mM
0 0,080 0,080 0,080 0,080
3 0,330 0,490 0,497 0,540
6 0,517 0,628 0,666 0,659
9 0,676 0,80 0,838 0,838
12 0,818 0,863 0,963 0,936
15 0,924 0,938 1,007 0,979
18 0,919 1,017 1,077 1,043
21 0,960 1,044 1,094 1,063
24 0,967 1,023 1,012 1,037
27 0,959 1,021 1,016 1,033
30 0,944 1,017 0,989 1,024

7. Influencia de la salinidad (%) sobre el crecimiento (750nm) de la cianobacteria

Synechococcus sp.

EC (días) 2,5 3,5 6,5 7,5 10

0 0,070 0,080 0,080 0,080 0,080
3 0,256 0,265 0,269 0,189 0,020
6 0,529 0,530 0,540 0,379 0,050
9 0,680 0,717 0,643 0,483 0,100
14 0,886 0,874 0,751 0,583 0,158
16 0,954 0,932 0,838 0,675 0,255
18 0,980 0,991 0,885 0,730 0,315
20 0,986 1,013 0,924 0,768 0,420
22 0,996 1,012 0,954 0,798 0,450
24 1,000 1,012 0,960 0,818 0,475
28 0,533
30 0,551
33 0,584
36 0,615
39 0,671
8. Crecimiento de la microalga Phaeodactylum tricornutum (x106 cel /ml) en cultivos
semicontinuos a una tasa de renovación del 10 y 50% (v/v).

EC (días) 10% 50%

D.cel. D. Cel.
0 1.0 1.0
2 12.3 12.9
4 26.7 28.2
6 48.5 47.25
7 62.48 25.6
10 83.9 20.15
11 56.3 38.7
12 41.58 21.23
13 41.5 19.0
15 43.67 17.6
16 45.47 13.64
17 58.78 17.86
18 40.23 18.87
20 74.72 21.61
21 60.12 17.72
22 79.88 22.76
23 65.02 16.64
24 61.79 22.3
25 56.55 24.35
26 59.35 22.95
27 55.72 22.5
28 57.25 21.4
30 57.72 22.83
31 58.9 20.86
32 62.48 19.2
33 62.47 18.3
34 65.99 17.8
35 51.32 20.33
36 56.87 19.22
38 63.88 22.56
 40 59.36 25.25
42 60.57 20.78

9. Crecimiento de la microalga Rhodosorus marinus (x106 cel mL-1) en función de la

concentración de NaNO3 (mM).
EC (dias) 4mM 8mM 12mM
0 1 1 1
3 2,45 1,92 2,23
6 5,68 4,99 3,46
9 12,86 11,16 9,47
12 22,46 19,37 16,71
15 34,59 20,09 18,37
18 36,06 24,34 24,15
21 30,73 24,91 33,66
24 26,72 25,16 25,32

10. Crecimiento de la microalga Rhodosorus marinus (x106 cel mL-1) en función de la

intensidad luminosa (Klux).
EC (días) 2 Klux 4 Klux 6 Klux 8 Klux 12 Klux
0 1 1 1 1 1
3 1,02 1,19 0,95 1,34 1,05
6 2,05 3,55 2,83 4,44 2,41
9 1,21 3,15 4,25 7,50 6,88
12 4,96 10,61 11,03 12,69 10,36
15 5,45 13,40 18,82 24,64 15,05
18 9,58 21,39 29,78 31,61 21,49
21 17,40 27,48 38,34 38,60 25,18
24 24,99 39,39 40,15 36,49 38,83
27 23,45 48,00 37,59 36,99 31,89
30 33,95 47,76
33 39,85 46,11
11. Crecimiento (x106 cel mL-1) de la microalga Rhodosorus marinus en función del
volumen de cultivo.

Control
EC (0,3 L) 1,5L 6L
0 1 1 1
3 0,80 0,95 1,44
6 4,40 4,08 1,75
9 9,54 7,66 5,09
12 20,94 13,35 8,90
15 30,28 24,02 15,64
18 34,65 31,40 22,00
21 36,71 34,56 26,04
24 35,04 36,08 27,87
27 36,54 27,89

12. Crecimiento (750 nm) de la cianobacteria Nostoc LAUN 0015 en función de la

concentración de NaNO3 (mM).

DIA 0mM 2 mM 4mM 8mM 12mM

0 0,060 0,060 0,060 0,060 0,060
3 0,080 0,101 0,099 0,102 0,112
6 0,158 0,195 0,209 0,219 0,204
9 0,295 0,328 0,370 0,389 0,366
12 0,404 0,359 0,395 0,487 0,477
15 0,423 0,439 0,457 0,586 0,558
18 0,468 0,508 0,500 0,624 0,646
21 0,511 0,534 0,516 0,671 0,709
24 0,613 0,646 0,629 0,711 0,743
27 0,676 0,680 0,602 0,747 0,752
30 0,745 0,719 0,662 0,763 0,759

13. Crecimiento en peso seco (mg mL-1) de la cianobacteria Nostoc LAUN 0015 en función
de la concentración de NaNO3 (mM).

DIA 0mM 2 mM 4mM 8mM 12mM

0 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20
3 0,224 0,332 0,338 0,416 0,440
6 0,561 0,603 0,616 0,709 0,618
9 0,943 0,907 0,940 0,853 0,948
12 1,228 1,270 1,348 1,303 1,372
15 1,318 1,560 1,715 1,883 1,878
18 1,220 1,613 1,663 2,300 2,260
21 1,453 2,088 1,760 2,803 2,540
 24 1,820 2,580 2,090 2,998 2,723
27 1,933 2,655 2,450 2,978 3,310
30 2,203 2,775 2,148 3,070 3,578

Recomendaciones:
Para cada tabla de resultados elaborar una discusión para proponer conclusiones en relación
al efecto de la variable independiente (s) estudiada sobre el crecimiento (densidad celular,
peso seco, clorofila, absorbancia).