Células en suspensión y cultivo

de raíces
Dra. Daniela Solís Marroquín
Células en suspensión

 Se denomina cultivo en células en suspensión al cultivo in vitro de

células vegetales aisladas o en pequeños agregados, distribuidos en
medio líquido y en un constante movimiento, las cuales presentan
una tasa de división celular y una homogeneidad relativamente alta.
Diferencias básicas entre células microbianas y
células vegetales cultivadas en suspensión

Características Células microbianas Células vegetales

Tamaño 1 – 5 µm3 Mayores de 105 µm3

Formación de agregados celulares Frecuentemente Muy frecuentemente

Tiempo de generación Usualmente menor de 1 h 24 – 150 h

Densidad de inóculo 0.5 – 1 % del volumen total 5 – 20 % del volumen total

Tolerancia al estrés causado por la Alta Baja

agitación

Contenido de agua Alrededor del 75% Alrededor del 90%

Consumo de oxígeno 5 -9mm I -1 h -1 1 – 4 mmol I -1 h -1

Producto Frecuentemente extracelular Frecuentemente intracelular

Complejidad del medio de cultivo Baja Alta o muy alta

Costo aproximado del producto U.S. $ 6 m3 U.S. $ 50 m3

Modificado de Taticek y col. 1991

Cinética de crecimiento de un cultivo in vitro
de células vegetales en suspensión
Cinética de crecimiento
8

6 Fase de desacele-
ración progresiva
FASE ESTACIONARIA
DENSIDAD CELULARr

4 FASE LINEAR

3
FASE lag
2
FASE log

0
0 1 2 3 4 5 6 7 8

TIEMPO
Parámetros para medir el crecimiento de las
suspensiones celulares
 Volumen del paquete celular.
 Número de células por unidad de volumen.
 Peso fresco y peso seco.
 Conductividad eléctrica del medio.
 Contenido de proteína y ADN.
 Viabilidad celular ( técnicas para medirla: observaciones de las corrientes citoplasmáticas,
mediciones de la integridad de las membranas – liberación de electrolitos, plasmólisis y
exclusión o retención de colorantes-, mediciones de actividad bioquímica - síntesis de
proteínas, reducción de sales de tretrazolio, síntesis de ADN y ARN, contenido de ATP y
tinción con diacetato de fluoresceína).
Plaqueo de suspensiones celulares

 EP = Número final de colonias obtenidas X 100

Número de células inoculadas

donde EP es eficiencia de plaqueo.

Cultivo de raíces

 Es un sistema de gran interés para el estudio de los procesos metabólicos que se llevan
acabo en estos órganos y que se revelaron y que se relacionan de carbohidratos, vitaminas,
reguladores de crecimiento y absorción y traslocación de nutrientes.
División del cultivo in vitro de las raíces en
tres grupos de especies
1. Raíces que pueden desarrollarse indefinidamente in vitro, requiriendo únicamente del
medio y de los subcultivos apropiados.
2. Raíces que crecen y se desarrollan in vitro durante periodos viables de tiempo pero que no
se ha logrado que lo haga de manera indefinida, por lo que en todo los casos tarde o
temprano se presenta una disminución paulatina en la tasa de crecimiento, se inhibe la
formación de raíces laterales y el cultivo finalmente muere.
3. Raíces que hasta el momento no se ha logrado que prosperen in vitro, ni siquiera por
periodos limitados en el tiempo.
Ventajas y limitantes de la utilización de raíces
transformadas
Ventajas 1. Estabilidad genética y bioquímica
2. Crecimiento rápido
3. Capacidad biosintética similar a las
raíces de la planta completa
4. Cultivo en fermetadores, sin pérdida de
las propiedades anteriores
5. Posibilidad de manipulación genética
Limitantes 1. Rango de hospederos de Agrobacterium
rhizogenes limitado
2. Se requiere que la biosíntesis del
metabolito buscado se lleve a cabo en la
raíz Rhodes y col. 1990
Referencia

 Pérez Molphe Balch, E. M., Ramírez Malagón, R., Núñez Palenius, H. G., & Ochoa Alejo,
N. (1999). INTRODUCCIÓN AL CULTIVO DE TEJIDOS VEGETALES. Aguascalientes, México:
Universidad de Autónoma de Aguascalientes.