Fisiologa de Semillas

Procesos:
Formacin de la semilla
Embriognesis Acumulacin de reservas

Germinacin Dormicin

Clasificacin en funcin de su tolerancia a la desecacin Ortodoxas:

tolerantes a la desecacin se dispersan y conservan luego de alcanzar un bajo % de humedad

Recalcitrantes:
sensibles a la desecacin Se dispersan junto con los tejidos del fruto (carnoso) con altos contenidos de humedad

Desarrollo de semillas ortodoxas

Histodiferenciacin
Divisin celular Expansin celular Deposicin de reservas Dormicin (a veces)

Maduracin

Desecacin
Metabolismo reducido

Secado
Quiescencia (semilla madura y seca)

Intolerante a la desecacin

Tolerante a la desecacin

Crecimiento de Grano
50 45 40 0.1 0.08 0.06 0.04 0.02 0 1000
MF

0.12

peso grano (mg)

35 30 25 20 15 10 5 0 0
Antesis

tc (mg oCd -1 )

200

d) 400GDC (C 600

800

C d -1

Evolucin de peso seco y contenido de humedad durante el desarrollo de semillas de cebada.

100 80
Peso seco (mg)

70

MF

60
% de humedad

50 60 40 20 0 10 20 30 40 50
Das post-antesis

40 30 20 10 0

Peso Seco

% de humedad

Semilla en Planta madre

SWITCH cambio de programa

Semilla dispersada

DESECACIN Expresa programa de Desarrollo Metabolismo anablico ABA Potencial osmtico

Expresa programa de Germinacin Metabolismo catablico

prevencin de germinacin precoz sntesis de protenas de reserva adquisicin de tolerancia a la desecacin evitar sntesis de alfa-amilasa

Contenido de ABA en embriones y endosperma C o n t e n id o d e A b a e n e m b r io n e s y de semillas de sorgo en distintos estados de desarrollo

700 600 e n d o s p e r m a s d e s o r g o e n f u n c i n d e l e s t a d o d e d e s a r r o llo Em b r io n e s En d o s p e r m a

ABA (pc/mg de peso

500

seco)

400 300 200 100 0 15 19 23 27 31 35 D a s p o s t - a n t e s is 39 43

S en sib ilid a dd e em b rio n es d e so rg oin c u b a d o s ena g u ayso lu c io n es c o nd istin top o ten c ia l o sm tic oenfu n c i nd el esta d od ed esa rro llo

Indice de germinacin

1 4 0 1 2 0 1 0 0 8 0 6 0 4 0 2 0 0 1 6 1 9 2 3 2 7 3 1 3 5 D a sp o st-a n tesis 3 9 4 3
agua -0.5M pa -1M pa

S e n s .d ee m b rio n e sd es o rg oa lA B Ayp o t. o s m tic oe nfu n c i nd e le s ta od ed e s a rro llo 1 2 0

Indice de germinacin

1 0 0 8 0 6 0 4 0 2 0 0 1 6 1 9 2 3 2 7 3 1 3 5 3 9 4 3 d a sp o s t-a n te s is -0 .5M p a /1u M A B A -M p a /1u M A B A -0 .5M p a /1 0u N A B A -1M p a /1 0u M A B A

Efectos del ABA y ambiente osmtico

ABA: Incrementa mRNA de protenas de reserva (crucifern, napn). Acta en la estabilizacin del mRNA. Ambiente osmtico: tiene el mismo efecto que el ABA Juntos impiden la entrada de agua al embrin durante la desecacin y la remobilizacin de reservas (antagnico con GA)

Posibles efectos de la desecacin

Nivel membrana:
Cambios conformacionales Cambios constitucionales

Nivel hormonal:
Desciende ABA Disminuye sensibilidad al ABA Incrementa sensibilidad a GA

Nivel genmico: sntesis mRNA y protenas

supresin permanente de mRNA del desarrollo Induccin de mRNA de la germinacin

Planta madre

SWITCH cambio de programa

Semilla dispersada

DESECACIN Programa de Desarrollo

Programa de Germinacin

ABA

Potencial osmtico

prevencin de germinacin precoz sntesis de protenas de reserva adquisicin de tolerancia a la desecacin evitar sntesis de alfa-amilasa (el ABA insensibiliza la capa de aleurona a las giberelinas)

GERMINACION
I
Absorcin de agua

II

III
Germinacin en el sentido estricto (aparicin de la radcula)

punto de no retorno
Das de germinacin

Etapas del proceso de germinacin

Fase I: Imbibicin

proceso fsico que se da por gradiente de potencial agua

Fase II: Plateau equilibrio

se igualan potenciales agua entre -1 y -1.5 MPa

Fase III: Reinicio de la absorcin de agua

semillas con dormicin no entran en esta fase

FLUJO DE AGUA= w e - w i r1+ r2 + r3

r1= resistencia del suelo (depende de la conductividad hidrulica del suelo) r2= resistencia externa (es funcin del grado de contacto entre la semilla y la fuente de agua) r3= resistencia interna de la semilla (dada por las cubiertas de la semilla, importante en semillas duras)

w e = potencial hdrico externo = cercano a 0 = m (en suelos) = m + (en suelos salinos) w i = potencial hdrico interno = -100 Mpa en semillas secas = m (en semillas secas) = m + (en semillas embebindose) = + p (al final de la fase I)

Fase I de imbibicin

Factores que la afectan: Disponibilidad de agua Contacto semilla suelo

Germinacin en funcin de la granulometra y del potencial agua del suelo

80 70

% de germinacin

60 50 40 30 20 10 0 0 5 10 15 20 Potencial agua (milibares)

0,25 mm 0,5-1 mm 0,25-0,5 mm 1,0 - 2,0 mm

25

Daos por imbibicin:

Entrada violenta de agua que produce ruptura de clulas y salida de solutos Cambios a nivel de la configuracin de las membranas celulares lo que afecta la capacidad de germinacin de la semilla

Factores que disminuyen el dao por imbibicin: temperatura del agua de incubacin (mayor dao con < temp.) resistencia 3: cubiertas de la semilla, hacen que la entrada de agua sea ms lenta

Germinacin en funcin de la temperatura y presencia de las cubiertas

80

% de germinacin

70 60 50 40 30 20 10 0
2 C intacta Soja 25 C 2 C 25 C 2 C partida intacta Arveja 25 C 2 C partida 25 C

Fase II de equilibrio
Cesa momentneamente la entrada de agua

Duracin muy variable Reactivacin del metabolismo: Absorcin de O2 y reactivacin de la respiracin Reparacin de mitocondrias Sntesis de mitocondrias Sntesis de protenas a partir de ARNm ya existentes Sntesis de protenas a partir de nuevos ARNm (protenas de la germinacin) Reparacin del ADN

Fase III o Germinacin propiamente dicha

Se reinicia la entrada de agua dado un descenso del potencial hdrico de la semilla El desciende por remobilizacin de solutos El p disminuye por ablandamiento de las paredes celulares

Sntesis del proceso de germinacin

Imbibicin: 5-15 % a 30% de agua Absorcin de O2 y reactivacin de la respiracin en el embrin Sntesis y activacin de enzimas e inicio de la digestin de las reservas (ej: alfa-amilasa) Transporte de molculas hidrolizadas al eje del embrin Reiniciacin de la divisin y el crecimiento celular y emergencia de la radcula

Dormicin

Desarrollo de semillas ortodoxas

Histodiferenciacin
Divisin celular Expansin celular Deposicin de reservas

Maduracin

Desecacin Secado
Metabolismo reducido Quiescencia (semilla madura y seca)

Dormicin
(a veces)

Intolerante a la desecacin

Tolerante a la desecacin

DEFINICION
Bloqueo interno propio de la semilla que determina que la misma no germine en condiciones consideradas como favorables durante determinado perodo de tiempo. Caracterstica adaptativa que determina que las semillas germinen en un momento o lugar favorables a su sobrevivencia. Se trata de una caracterstica heredable, cuya expresin es modificada por las condiciones ambientales que se dan durante el proceso de maduracin de la semilla sobre la planta madre. (Pelton, 1965).

CONCEPTO Y CLASIFICACION DE DORMICION EN SEMILLAS (segn Lang, 1987)

DORMICION: es la suspensin temporaria del crecimiento visible, de cualquier estructura que contenga meristemos. Paradormicin: impedimento para la germinacin dentro de la semilla, pero por fuera de la estructura durmiente (embrin). Ej.: cubiertas duras y/o impermeables a los gases y al agua inhibidores individuales o balances inhibidores en la cubierta interna (endosperma o perisperma). Endodormicin: impedimento dentro de la estructura durmiente. Ej.: embriones inmaduros balances hormonales inhibitorios. Ecodormicin: limitante para el crecimiento en el medio ambiente en el que se encuentra la semilla (falta de agua, temperatura, oxgeno, luz).

Dormicin primaria y D. secundaria

Segn el momento en que se da se distinguen dos tipos: primaria y secundaria. La D. primaria es inducida sobre la planta madre durante el desarrollo de la semilla y la D. secundaria ocurre luego de la dispersin de la semilla y generalmente est sujeta a ciclos anuales (semillas de malezas). Ambos tipos se identifican segn las condiciones que llevan a la salida de dormicin, la sensibilidad a diferentes requerimientos es diferente.

DORMICION
Semilla con D. Primaria
Ambiente,genotipo, efectos correlativos posicionales Luz, temperatura, after-ripening

SEMILLA SIN DORMICION

Luz, temperatura, after-ripening

GERM.

Semilla en formacin

Semilla con D. Secundaria

Ambiente,genotipo, efectos correlativos posicionales

Semilla sin Dormicin

Dormicin absoluta
Nivel extremo de dormicin, no se da la germinacin a ninguna temperatura de incubacin.

Dormicin relativa
La condicin de dormicin se expresa solamente en determinados rangos de temperatura que tienen que ver con cambios a nivel de membranas celulares.

Rango de temperaturas donde germina una especie anual estival (lnea slida) y temperatura ambiente durante el ao (lnea cortada). Vleeshouwer et al., 1995

Dormicin relativa en trigo y cebada (Bewley y Black, 1985)

120 100

% de germinacin

80 60 40 20 0 5 10 14 18 T e m p e r a t u r a ( C ) 30 Tr ig o Ce b a d a

Mecanismos de dormicin:
Embrin: la remocin de las cubiertas no permite a los embriones germinar normalmente . Se dan dos casos: - inmadurez del embrin - en embriones maduros: inhibidores presentes en cotiledones. (Ejemplo: en algunas lneas de cebada, el scutellum impone dormancia). Cubiertas: los embriones aislados pueden germinar normalmente, la limitante la imponen los tejidos que rodean el embrin (endosperma, pericarpio, testa o glumas)

DORMICION EMBRIONARIA
Especie Estudios totales 1 13 8 1 10 1 5 D.embrionaria 0 2 2 0 4 1 0 Fuente: Simpson, 1990

Avena sativa Hordeum vulgare Oriza sativa Secale cereale Triticum aestivum Triticum durum Zea mays

Efecto de la remocin de los cotiledones sobre la dormicin en embriones de manzana. (Bewley y Black, 1985)
60
Sin c otiledn

G e rm in a c i n (% )

50 40 30 20 10 0 0

Mitad c otiledn Cotiledn entero

20

40 D a s a 2 0 c

60

80

CAUSAS DE DORMICION IMPUESTA POR LAS CUBIERTAS

1- Interferencia con absorcin de agua Semillas duras (leguminosas), donde la constitucin de la testa responsable de la impermeabilidad (cutcula cerosa, suberina y principalmente osteosclereidas), 2- Restriccin mecnica Ejemplo: semillas de lechuga (endosperma con paredes gruesas compuestas por mananos, polmero de manosa, rodea completamente al embrin). 3- Interferencia con el intercambio gaseoso Entrada de oxgeno y salida de CO2

Efecto de la testa sobre la permeabilidad al agua. (Bewley y Black, 1985)

S e m illa s e m b e b id a s ( % )

100 80 60 40 20 0 0 3 16 34 59 72 99 118 134

P r o f u n d id a d ( u m )

Tegumento externo (cutcula cerosa y suberina)

Teg. Externo (osteosclereidas)

Efecto de las cubiertas sobre el intercambio gaseoso

Las cubiertas no imponen dormicin por la disminucin en la cantidad de oxgeno disponible para la respiracin: Impiden la remocin de INHIBIDORES Alta actividad polifenol oxidasa en glumelas reduce la cantidad de O2 que llega al embrin en cebada

b ) g r an o s e n te r o s 120 100 80
Q . P a lo m a r B 1215

IG

60 40 20

MF MC

a ) e m b r io n e s
0 15 22 29 36 43 50 d a s p o s t - a n t e s is 64

120 100 80

b ) car io p s e s d e s n u d o s 120 100 80

IG
60 40 20 0 15 22 29 36 43 50 d a s p o s t - a n t e s is 64
Q . P a lo m a r B 1215

IG

60 40 20 0 15 22 29 36 43 d as p o s t-an te s is 50 64
Q . P a lo m a r B 1215

Fuente:Benech-Arnold et al., 1999

ABA e n e m brione s e n de s arrollo 800

ABA ( pg/mg peso seco)

600 400 200 0 15 Q. Palomar 22 B 1215 64

29 36 43 50 das pos t-ante s is

120 100 80

Sensibilidad al ABA de em briones en desarrollo Q. Palomar B 1215

IG

60 40 20

Fuente: Benech-Arnold et al., 1999

0 15 22 29 36 43 das post-antesis 50 64

Efectos del ambiente durante el desarrollo de las semillas sobre el nivel de dormicin primaria
Temperatura: temperaturas bajas sobre el final del llenado de grano imponen
dormicin en cebada Condiciones de sequa: el efecto depende del tipo de dormicin y del momento en que se produce ( un dficit hdrico aumenta el nivel de dormicin en cebada cuando se da a inicios de llenado, si se da al final del mismo, la dormicin es reducida) Sorgo: semillas desarrolladas en condiciones de sequa tiene menor dormicin (disminucin del contenido y de la sensibilidad al ABA). Nutricin: altos niveles de fertilizacin nitrogenada levantan dormicin. Efectos posicionales: diferencias en nivel de dormicin segn la posicin inflorescencia. Fotoperodo: en general la dormicin es aumentada por das largos. en la

Correlacin entre el IG (12 dpmf) y la temperatura media del aire desde antesis a MF. (r= 0.79) para 9 fechas de siembra en 3 aos.
80 70 60 50
C2 B3 C1 A1 B1 B2 B4 C4 C3

G I (1 2 D AP M )

40 30 20 10 0 18

19

20

21

22

23

24

M e a n T e m p . ( A - P M ) ( C )

Coeficiente de correlacin para el IG (12 dpmf) y la temperatura media para intervalos de 50 da desde antesis a MF.
1,0 0,8 0,6 0,4

0,2 0,0 -0,2 -0,4

100-150

150-200

200-250

250-300

300-350

TT intervals (C.Day)

350-400

50-100

0-50

Regresin lineal entre el IG (12 dpmf) y la temperatura media del aire en el intervalo 300-350 C desde antesis, para 9 fechas de siembra en 3 aos
100 90 80 70 60
1 0 ,8 0 ,6 0 ,4 15 17 19 21

r = - 0,986 C3 C4 C2 B4

G I (12 DAP M )

50 40

B2 C1

B3

30 20 10 0 15 17 19 21
300-350

A 1 B1

23

25

(Tm )

(C)

% de germinacin promedio en funcin de poca de siembra

100 90 80

a b b

%Germ.

70 60 50 40 30 20 10 0

poca 1

poca 2

poca 3

% de germinacin para 5 variedades de cebada en funcin de dos pocas de siembra (EEMAC, 1998)
100 90

E1

E2

% de germinacin

80 70 60 50 40 30
Clipper FNC 6-1 Pern Q. Palomar Quebracho

Anlisis de QTL que afectan dormicion en cebada (poblacin ORO)

Castro el al. 2005

DORMICION
Semilla con D. Primaria
Ambiente,genotipo, efectos correlativos posicionales Luz, temperatura, after-ripening

SEMILLA SIN DORMICION

Luz, temperatura, after-ripening

GERM.

Semilla en formacin

Semilla con D. Secundaria

Ambiente,genotipo, efectos correlativos posicionales

Semilla sin Dormicin

FACTORES QUE INDUCEN DORMICION SECUNDARIA

Condiciones anaerbicas Oscuridad Exposicin prolongada a rojo lejano Temperaturas por encima de las mximas para germinacin Temperaturas por debajo de las mnimas para germinacin Stress hdrico (dficit exceso)

Factores que levantan dormicin

- Afterripening: almacenamiento de las semillas con bajo contenido de humedad - Bajas temperaturas o chilling: semillas embebidas se someten a temperaturas de 1 a 10 C (prctica comn en horticultura y forestacin). - Temperaturas alternadas - Calidad de la Luz: Rojo vs. Rojo lejano (semillas fotoblsticas) - Reguladores de crecimiento: giberelinas, citokininas, etileno - Escarificacin: natural (ataques microbianos, pasaje por el tracto digestivo, alternancia de temperaturas) artificial (abrasin mecnica). (es el caso de semillas duras, ej: leguminosas)

Cambios en la capacidad germinativa de semillas de paspalum afterripening

100

% G erm in aci n a 14 d as

90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 0 m es es 4 m es es 5 m es es 6 m es es 11 m es es

CTRL F

vie ja s

T ie m p o p o sco se ch a

Glison, et al., 2011

Variabilidad gentica en P. dilatatum

CTRL
100

% G e rm in a c i n a 1 4 d a s

90 80 70 60 50 40 30 20 10 0

Pf-7 2

Ch4

d 5 8 -2

Semillas con 6 meses de almacenamiento en seco

Glison, et al., 2011

Promocin e inhibicin de la germinacin por fitocromos

Modo de accin: Promocin: LFR (fitocromos B y E) VLFR (fitocromo A) Inhibicin: HIR (fitocromo A) Proceso fisiolgico (lechuga cv Grand rapids) LFR levanta dormicin impuesta por cubiertas Pfr induce en el embrin un incremento de GAs activas (expresin de GA,3-Bhidroxilasa y un factor de sealizacin PHOR) e incremento de sensibilidad a GAs. En el endosperma estimulan la expresin de genes de protenas que ablandan las cubiertas (expansina, mananasa)

Luz roja (660 nm)

Pr
Rojo lejano (730 nm)

Pfr

Forma activa del fitocromo

Germinacin

El pastoreo intenso puede promover la germinacin de Raygrass (Lolium multiflorum) a travs de la percepcin de la relacin rojo/rojo lejano de la luz que llega al suelo. (Deregibus et al., 1994)
1200
30 cm 10 cm 2 cm

Dens. de raygrass (pl./m2)

1000 800 600 400 200 0 0 35 60

Das despus del pastoreo

Relacin R/RL a nivel del suelo bajo canopeos de diferentes alturas obtenidas por diferentes intensidades de pastoreo.
1,2 1,0 0,8

R /R L

0,6 0,4 0,2 0,0 0 10 20 30

Altu ra d e can o p y (cm )