Facultad de Ciencias de la Salud

Escuela Profesional de Farmacia y Bioquímica

Asignatura: Bioquímica II
Docente: Q.F Mg German Aznarán Febres
Ciclo: VI
Tema: Práctica N° 9
Integrantes:
- Bracamonte Blas Abigail Lucero - Ríos Gamboa Jeanpierre Israel
- Calderón Marín Chabelly Darling - Ríos Menacho Ibeth Melissa
- Hualcas Silva Herlyn Darío - Salazar Morales Nicol
- Montano Gámez Teo
Chimbote - Perú
2021 – II
 ESTUDIO DEL
METABOLISMO
ENERGÉTICO MUSCULAR
Y DE LA COMPOSICIÓN
CORPORAL DE ATLETAS
POR MÉTODOS NO
INVASIVOS
Espectroscopia de Resonancia Magnética (MRS)
Es una técnica no invasiva y no destructiva que sirve para la
realización de estudios tanto in vitro como in vivo, permitiendo la
detección e identificación de diversas moléculas en diferentes
sistemas biológicos.
Se puede obtener información cuantitativa acerca de múltiples
metabolitos, en función de la secuencias de pulsos aplicadas y los
núcleos utilizados ( H, P, C, ..), esto es debido a la versatilidad que
presenta esta técnica para el estudio de estos sistemas.

Estudio de la fisiología muscular por H-MRS

En la H-MRS de músculo esquelético, los núcleos H que se encuentran en
tejido adiposo o agua están más concentrados que cualquier otro metabolito
del tejido humano por lo que se requiere técnicas especiales. Las grandes
señales de la grasa en el tejido adiposo pueden evitarse seleccionando
cuidadosamente la región de interés mientras que la fuerte señal procedente
del agua puede interferirse mediante prepulsos especiales .
Estudio del metabolismo y fisiología muscular por P-MRS
Los metabolitos implicados en esta producción (ADP + PCr + H+ ATP +
creatina) y utilización (ATP ADP + Pi + energía) de energía, están
relacionados en la reacción catalizada por la creatina quinasa. Debido a que
la P-MRS proporciona una oportunidad para monitorizar esos metabolitos
de manera continua y no destructiva, previamente mediante el análisis de
biopsias “in vitro” se han podido validar mediante esta técnica. Donde se
llegó a la conclusión que la P-MRS ha demostrado ser útil para la
investigación no invasiva de la relación entre actividad muscular y el
suministro de energía necesario para mantenerla. Cuantificando las
alteraciones temporales de cada parámetro metabólico.

Bioenergética Muscular
Es la ciencia que estudia los procesos energéticos en el ámbito de la biología.
La fisiología del ejercicio utiliza estos conocimientos para comprender las
funciones orgánicas fundamentales. En los últimos años, se ha venido
trabajando no solamente para facilitar la mejor comprensión de algunas
patologías, sino también por su aplicación en la medicina deportiva. Las
células musculares representan un modelo de células en que la demanda
energética es muy variable, y por eso esas células disponen de diferentes vías
metabólicas para obtener energía y poder hacer deporte con normalidad .
Biosíntesis y metabolismo de la creatina
La creatina es uno de los compuestos que se sintetiza de forma endógena en
el hígado, el páncreas y los riñones, que parte de 2 aminoácidos
precursores: la glicina y la arginina. Los músculos no tienen la capacidad
de sintetizar creatina, por tal motivo la creatina se transporta por la sangre
donde debe captarse contra un gradiente de concentración por parte de un
transportador de creatinina y sodio. Una vez la creatina sintetizada
endógenamente o ingerida en la dieta, ha sido captada por el tejido
muscular, es fosforilada mediante la reacción catalizada por la creatina
quinasa a fosfocreatina.
OBJETIVOS
Objetivo general
❖ Utilización de metodologías esencialmente no invasivas, como la espectroscopia de
resistencia magnética de fósforo P-MRS y protones H-MRS y determinación
densitométrica de la composición corporal de atletas de alto nivel.
Objetivos específicos
❖ Caracterizar las reservas energéticas de metabolitos fosforilados en el músculo esquelético
de atletas mediante espectroscopia de P-MRS.
❖ Poner a punto metodologías de medición de la variación de la concentración de
metabolitos fosforilados y pH intracelular en el músculo esquelético durante el ejercicio
mediante P-MRS.
❖ Caracterizar las reservas energéticas de triacilgliceroles intra y extra miocelulares en el
músculo esquelético de atletas mediante espectroscopia H-MRS.
❖ Caracterizar el efecto de la suplementación dietaria con creatina en el patrón bioenergético
muscular en reposo y dinámico, y en la composición corporal en atletas.
 VARIABLES DE LA INVESTIGACIÓN

Metabolismo Energético Muscular:

Definición Conceptual
Los músculos son los encargados de generar el
movimiento; para ello, la célula muscular está
especializada en la conversión de energía química
en energía mecánica, en lo que supone el
metabolismo energético.
Definición Operacional
(Pérez, 2007)
La muestra de estudio estuvo formada por 14
Composición Corporal: atletas de alto nivel. El patrón de metabolitos
fosforilados se midió en el músculo vasto
medial por P – MRS, mientras que los
Definición Conceptual triglicéridos intra (IT) y extracelulares (ET)
Un análisis químico completo de la composición se determinaron mediante H – MRS.
corporal del hombre indica que está formado por
materiales similares a los que se encuentran en los
alimentos, pues no olvidemos que el hombre es
producto de su propia nutrición
(Grande y Keys, 1987).
 MÉTODOS

Diseño experimental:

El experimento fue un “doble ciego”. Los atletas de fondo se distribuyeron por sus características físicas y se estudió en dos
grupos equivalentes; un grupo de suplementación después del entrenamiento y un grupo de suplementación con creatina.

Sujetos:

- Fondistas y medio-fondistas
- Futbolistas

Suplementación de la dieta:

Para fondistas y medio - fondistas: La suplementación oral estuvo formada por 20 g de monohidrato de creatina y se les asignó
conforme sus características físicas durante 14 días.

Para futbolistas: La suplementación oral para los futbolistas estuvo formada por de 0,1 g por kg de masa magra (kg· MM) -1 de
monohidrato de creatina y 1,1 g (kg· MM)-1 de polímeros de glucosa (maltodextrina) disueltas en 750 ml de agua.
- Determinación de la composición corporal mediante
densitometría:

- Test de Fatiga (JRS)

- Test de capacidad aeróbica máxima en tapiz rodante
realizado en el CAR
- Descripción del ergómetro
- Protocolo de ejercicio de MRS en el CAR: El protocolo de ejercicio fue realizado dentro de un
túnel de madera con las mismas dimensiones del imán usado en el experimento de MRS. El ejercicio
fue realizado a 60 ciclos por minuto para ambas piernas, durante “n” períodos de 180 segundos hasta la
fatiga.

- Protocolo de ejercicio de MRS realizado en el CDP

- Medición de la fuerza en el ergómetro
- Cálculo de la potencia
realizada

Fórmula:
 - RESONANCIA MAGNÉTICA

Espectroscopía e imagen de resonancia magnética: se necesitó de un espectrofotómetro y que

los atletas se colocaron en posición supina.

Resonancia Magnética (RM) para H-MRS:

Aparato de resonancia
magnética

Bobina de rodilla
- RESONANCIA MAGNÉTICA

Ajuste de los parámetros espectrales para H-MRS:

❖ Amplificación del transmisor y del receptor de señal

❖ Frecuencia central del espectro
❖ Mejora de la homogeneidad del campo magnético en el vóxel de interés
❖ Duración del pulso de supresión de la señal de agua.

Presaturación del agua:

RF = Onda de
radiofrecuencia
Frecuencia: CHESS
- RESONANCIA MAGNÉTICA

Secuencias de localización y excitación del voxel de interés

Donde:
TE = tiempo de eco
TE/2 = tiempo de eco medio
TM = tiempo de mezcla
RF = onda de radiofrecuencia

Procesamiento de los espectros “in vivo” de H-MRS

● Conversión de las FID
● Corrección de la forma de las resonancias
● Filtrado de la señal del agua: HLSVD
● Selección de las resonancias para su posterior ajuste
● Ajuste en el dominio del tiempo: AMARES
Análisis de datos de H- MRS y cuantificación de los metabolitos de interés.

Donde:
ppm = partes por millón del campo magnético
ET = triglicérido extracelular
IT = triglicérido intracelular
ET (-CH2-)n = triglicérido extracelular (-CH2-)n

IT (-CH2-)n = triglicérido intracelular (-CH2-)n

ET -CH3 = triglicérido extracelular -CH3

IT -CH3 = triglicérido intracelular -CH3

- RESONANCIA MAGNÉTICA
Experimentos de P-MRS Procesamiento mediante "moving window
average" de las FID de P-MRS obtenidas en los
protocolos de ejercicio realizados en el CDP.
Preparación de la referencia externa para P-MRS

Cálculo de T1 para diferentes concentraciones de

acetilacetonato de cromo (Cr(acac)3)
Análisis de los espectros de P-MRS

Donde:

P3N3Cl6 = Fosfonitrílico clorato

ppm = partes por millón del campo magnético
PCr = fosfocreatina
PDE = fosfodiésteres
PME = fosfomonoésteres
Pi = fosfato inorgánico
NAD = Nicotinamida adenina dinucleótido
ATP = Adenosín trifosfato
 - RESONANCIA MAGNÉTICA

Corrección de los espectros de P-MRS por los efectos de la saturación diferencial

❖ Espectros de P-MRS con tiempo de reciclaje (TR) de 2 segundos: Cada espectro fue el resultado de la
sumación de 10 FIDs individuales que fueron guardadas como FIDs no sumadas en el fichero SV/PROBE.
❖ Espectros de P-MRS con tiempo de reciclaje (TR) de 30 segundos: Se adquirieron 30 FIDs individuales que
presentaban un tiempo de reciclaje de 30 segundos con la idea de sumar los espectros resultados en grupos de 10
y así el número total de acumulaciones fuera equivalente al de los espectros con tiempo de reciclaje de 2
segundos.
❖ Análisis estadístico de los resultados
- Para el análisis de correlación entre los diferentes parámetros se utilizó el coeficiente de correlación de
Pearson.
- Se utilizaron modelos lineales mixtos para el análisis de las variables PCr, Pi y pH en el protocolo
experimental de P-MRS realizado con los fondistas.
- El método de estimación que se ha utilizado fue el Restricted Maximum Likelihood (REML).
RESULTADOS
PROTOCOLOS EXPERIMENTALES REALIZADOS CON
LOS FONDISTAS/MEDIO- FONDISTAS.

En esta parte de la investigación, la variable

antropométrica estudiada y que podría ser
influenciada por la suplementación fue el peso
corporal. Dicha variable no presentó
diferencias estadísticamente significativas
después del período de suplementación con
creatina de 14 días
 EVALUACIÓN DE LOS NIVELES DE LACTATO Y AMONIO
SANGUÍNEO MEDIDOS DURANTE EL PROTOCOLO DE TAPIZ
RODANTE REALIZADO EN EL CAR

La concentración de lactato en plasma se analizó

para profundizar en el estudio de los efectos
metabólicos de la suplementación con creatina como
índice de la glucólisis anaeróbica llevada a cabo en
el músculo. La concentración de amonio por otra
parte se utilizó como un índice de la pérdida de
nucleótidos de adenina del músculo debido a la
acción combinada del metabolismo anaeróbico
aláctico en el músculo (creatina quinasa, adenilato
quinasa) seguido de procesos degradativos de los
nucleótidos de adenina intramusculares (p.e.
nucleótido deaminasas) con liberación a sangre de
amonio e hipoxantina
EVA LUACI ÓN DE LA POTENCI A DES ARROLLA DA DURANT E EL PROTOCOLO DE EJE RCICI O DE MRS REA LI ZADO EN EL CDP

La potencia desarrollada por los sujetos

del grupo 1 (creatina) como en el grupo 2
(placebo) en el protocolo de ejercicio
presentó un aumento estadísticamente
significativo, después del período de 14
días de suplementación, aunque dicho
aumento no fue significativamente distinto
entre grupos. Por tanto, cabe considerar
factores comunes a los dos grupos, como
la continuación del proceso normal de
entrenamiento durante los 14 días de
suplementación, como su posible causa,
mas que los factores no comunes (placebo
versus creatina).
EVALUACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE TRIGLICÉRIDO INTRA Y EXTRACELULAR EN

FONDISTAS / MEDIO FONDISTAS MEDIANTE 1 H-MRS Y SU CORRELACIÓN CON LA

CAPACIDAD AERÓBICA DE LOS INDIVIDUOS

Los resultados no demostraron

alteraciones significativas en la
concentración de IT y ET debido al
protocolo de ejercicio realizado en el
CDP. En cambio, si que se observó
una correlación negativa
estadísticamente significativa entre
IT y ET y la capacidad aeróbica de
dichos sujetos medida en el test del
tapiz rodante realizado en el CAR.
MEDICIÓN DE LAS CONCENTRACIONES DE TRIGLICÉRIDO INTRA Y
EXTRACELULAR, GRASA CORPORAL Y TIEMPO HASTA LA FATIGA EN
JUGADORES DE FÚTBOL.

Los resultados no presentaron diferencias

estadísticamente significativas en las
variables estudiadas entre los grupos de
jugadores según las posiciones. En cambio,
se detectó una correlación estadísticamente
significativa entre la concentración de
triglicérido extracelular en el vasto medial y
la grasa corporal.
ANÁLISIS DEL PATRÓN DE METABOLITOS MUSCULARES MEDIANTE 31
P Y 1 H-
MRS EN JUGADORES DE FÚTBOL ANTES Y DESPUÉS DE LA
SUPLEMENTACIÓN CON CREATINA

Los resultados demostraron un

aumento en el cociente de
PCr/ATP aunque únicamente
alcanzó significación estadística
en el grupo DE (tabla 23) y una
tendencia cercana a la
significación (p=0,06) en el
aumento de la creatina total
(15%) en el grupo AE.
 CONCLUSIONES:

❖ Se caracterizó las reservas energéticas de metabolitos fosforilados en el músculo esquelético de atletas

mediante espectroscopia de P-MRS.
❖ Se desarrollaron metodologías de medición de la variación de la concentración de metabolitos
fosforilados y pH intracelular en el músculo esquelético durante el ejercicio mediante P-MRS.
❖ Se caracterizó las reservas energéticas de triacilgliceroles intra y extra miocelulares en el músculo
esquelético de atletas mediante espectroscopia H-MRS.
❖ Se caracterizó el efecto de la suplementación dietaria con creatina en el patrón bioenergético muscular
en reposo y dinámico, y en la composición corporal en atletas.
 Referencia Bibliográfica

1. Santos M. Estudio del Metabolismo Energético Muscular y de la Composición Corporal de

Atletas por métodos no destructivos. [Internet]. España, 2001. [Citado el 03 de noviembre del
2021]. Disponible en: https://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/3462/mgs1de2.pdf