TITULO

INTEGRANTES:
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Método hemolítico
- Afrosimétrico
- Hemolítico
Existen varios métodos de cuantificación de saponinas - Volumétrico
- Espectrofotométrico
- cromatográfico

El método hemolítico se basa en la propiedad de

las saponinas de producir hemólisis de la sangre
in vitro.

- A pesar de ser muy utilizado, tiene la desventaja de depender de la naturaleza de la saponina.

- Si los glóbulos rojos se rompen (lisan o hemolizan), se asume que la prueba es positiva.
- Este ensayo puede realizarse en tubo de ensayo, en placas de Petri con agar-sangre o en placas de Petri con
gelatina-sangre.
- Cuando la muestra contiene taninos, deben eliminarse antes de realizar la prueba ya que la interfieren.
Cálculos: Para calcular el índice hemolítico se divide el peso de la mezcla de
reacción, entre el peso de extracto de saponina ensayado.

Procedimiento:
se añadieron cantidades se ajustó el volumen final
volúmenes de 2 mL de
variables del agente de cada prueba a 4,0 mL
suspensión de eritrocitos
hemolítico con buffer isotónico

se estimó la densidad Después de 3 horas de

óptica del hemolizado a
una longitud de onda de
540 nm
Dos mililitros del
incubación a temperatura
sobrenadante obtenido se
ambiente, las muestras se
disolvieron con igual volumen
centrifugaron a 4500 rpm
de buffer isotónico
durante 15 min

se leyó utilizando Se preparó una muestra patrón Para la estimación de la potencia

el buffer como valor de de hemólisis total, y se trató hemolítica se calculó la ecuación de
referencia cero con agua destilada. la recta de mejor ajuste,