ESPECTRO DE ABSORCIÓN, CURVA DE CALIBRACIÓN Y MEDICIÓN DE CONCENTRACIÓN

DE GLUCOSA EN SANGRE CON EL ESPECTROFOTÓMETRO

Arroyave Tapias Cindy Vanessa, Mora Noreña Juliana Andrea,

Patiño Salazar María Camila, Santamaría Macías Natalia
Departamento de ingeniería, Universidad Autónoma de Occidente
Cali, Colombia
cvarroyavet@gmail.com
morajuliana02@gmail.com
mariacamilapatinosalazar@gmail.com
nataliasantamaria9@gmail.com,

Abstract—This laboratory allows to determine a blood Recién nacido, prematuro 25-80 mg/dL = 1.39-4.44
sugar level through the methodology used to obtain the mmol/L
blood’s serum by Centrifugation and other different Recién nacido 30-90 mg/dL = 1.67-5.00
processes like the Water Bath and later to the mmol/L
Spectrophotometer. In this way, it is allowed to interact Niños, adultos 70-105 mg/dL = 3.89-
with the machinery and familiarize ourselves with the 5.83 mmol/L
process. This in order to analyze blood sugar levels
Figura Nº 1. Rango de suero y plasma.
depending on the subject's morphological conditions.
La práctica de laboratorio de espectrofotometría
I. INTRODUCCIÓN pretende dar a conocer los niveles de glucosa en sangre
La glucosa es la principal fuente de energía para el por medio de cálculos realizados a partir de procesos,
metabolismo celular. Se obtiene fundamentalmente a separando los componentes sanguíneos y analizándolos.
través de la alimentación, y se almacena principalmente
en el hígado, el cual tiene un papel primordial en el II. OBJETIVOS
mantenimiento de los niveles de glucosa en sangre
(glicemia).[1] La insulina facilita la entrada de glucosa  Determinar la concentración de una o varias
en las células. [5] Para la determinación de glucosa es soluciones, utilizando como herramienta el
necesario realizar muestras sanguíneas debidamente principio de espectrofotometría.
procesadas.  Identificar el suero obtenido de la sangre
después de someterla a un proceso de separación
Uno de los métodos para medir la glucosa en sangre es por centrifugación.
la centrifugación que es un método por el cual se pueden  Adquirir experiencia a través del manejo del
separar sólidos de líquidos de diferente densidad por espectrofotómetro y de la medición de las
medio de una fuerza giratoria. La fuerza centrífuga es concentraciones del blanco, estándar y la
provista por una máquina llamada centrifugadora, la cual muestra.
imprime a la mezcla un movimiento de rotación que  Calcular y evaluar los niveles de glucosa en
origina una fuerza que produce la sedimentación de los sangre a través de los datos obtenidos por el
sólidos o de las partículas de mayor densidad. Una de manejo del espectrofotómetro.
sus aplicaciones consiste en acelerar el proceso de
sedimentación, dividendo el plasma sanguíneo y el suero III. METODOLOGIA
sanguíneo en un proceso de análisis de sangre.
Para realizar la respectiva practica de laboratorio, se
Esto seguido por la espectrofotometría que es la utilizaron los siguientes materiales y reactivos:
medición de la cantidad de energía radiante absorbida
por las moléculas de una muestra en función de las  Kit de determinación de glucosa o colesterol
longitudes de onda específicas; es el método de análisis total en sangre de Biosystems
óptico más usado en las investigaciones bioquímicas y  5 Tubos de 12x75
síntesis químicas. Esta medición se realiza por medio de  Pipetas de 5 y 10ml
un instrumento denominado espectrofotómetro; el cual  Pipeteadores
sirve para medir la longitud de onda, la relación entre  Micropipeta
valores de una misma magnitud fotométrica relativos a  Espectrofotómetro y cubeta
radiaciones y la concentración o reacciones químicas  Beaker de descarte
que se miden en una muestra; la cual se usó en esta  Toallas desechables
práctica para estudiar el rango de glucosa en sangre de  Lápiz de cera
una muestra. Los niveles de suero y plasma son los  Jeringa desechable
siguientes:  Tubo seco
 Alcohol
 Algodón
De esta manera, se planteó el siguiente flujograma B. Estándar: 2mL de reactivo (A) +
(Figura Nº 2) con el fin de identificar y seguir el "paso a 20 𝜇𝐿 de glucosa estándar (S).
paso" para llevar a cabo la práctica de una manera C. Muestra: 2mL de reactivo (A) +
adecuada. 20 𝜇𝐿 de muestra.

Se utilizaron estas cantidades con el fin de que

el espectrofotómetro lograra detectar
adecuadamente la solución y posteriormente
realizar todo el análisis.

4. Los tres tubos se introducen a baño maría a

37ºC por cinco minutos.

5. Finalizado el baño maría, las sustancias de los

tubos secos se transfieren a las cubetas que
posteriormente se introducen al
espectrofotómetro a 500nm de longitud de
onda para realizar el proceso de obtención de
los datos en "Absorbancia".

Respecto a las reacciones realizadas en la práctica, se

tiene que la glucosa oxidasa (Reactivo A) cataliza la
oxidación de glucosa a ácido glucónico. El peróxido de
hidrógeno (𝐻2 𝑂2 ), producido se detecta mediante un
aceptor cromogénico de oxigeno, fenol-ampirona en
presencia de peroxidasa (POD) [5]:

Dados los datos obtenidos por el espectrofotómetro, se

procede a calcular el nivel de glucosa en sangre a través
de la ecuación Nº1:

𝐴𝑠𝑎𝑚𝑝𝑙𝑒
∗ 100 = 𝐶𝑆𝑎𝑚𝑝𝑙𝑒
𝐴𝑆𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟𝑑

Donde:
𝐴𝑆𝑎𝑚𝑝𝑙𝑒 = 𝑀
𝐴𝑆𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟𝑑=𝐸𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟
Figura Nº 2. Flujograma.
IV. RESULTADOS Y ANÁLISIS
La figura Nº 2 resume las siguientes instrucciones:
Respecto a las mediciones espectrofométricas,
inicialmente se debe calibrar la lectura del
1. Se toma de muestra de 5mL de sangre de un
espetrofotometro a una frecuencia de 500nm se debe
estudiante voluntario por venipunción y su
preparar una seria de soluciones con concentraciones ya
posterior deposito en un tubo seco.
mencionadas anteriormente. Una de estas muestras que
solo contiene el reactivo A y es conocida como el
2. La muestra de sangre se centrifuga por tres
“BLANCO” es usada para calibrar adecuadamente el
minutos con las debidas restricciones del
espectrofotómetro, esto con el fin de que solo evalúe las
equipo (Depositar el tubo seco con sangre y
señales de absorbancia del soluto (Reactivo S y muestra)
otro tubo seco lleno de agua con la misma
y no las del reactivo A.
cantidad que tenía el tubo de sangre).

3. Después de terminar la centrifugación, se

Realizada la espectrofotometría, se obtuvo los siguientes
extrae el suero de la sangre y se pasa a realizar
niveles de absorbancia (A) en cada sustancia:
las siguientes soluciones en tres tubos secos
con el uso de una pipeta con pipetiador:
 Blanco: 0,000A
A. Blanco: 2mL de reactivo (A).  Estándar: 0,566 A
 Muestra: 0,444 A
De estos valores se determina el nivel de glucosa en [1] Practica No. 1 Determinación cuantitativa de
sangre en mg/dL de la siguiente manera: glucosa en suero.
[5] SPINREACT. Determinación cuantitativa de
𝐴𝐵𝑆𝑂𝑅𝐵𝐴𝑁𝐶𝐼𝐴 𝐷𝐸 𝐿𝐴 𝑀𝑈𝐸𝑆𝑇𝑅𝐴 glucosa
Glucosa en mg/dL: ∗ 100
𝐴𝐵𝑆𝑂𝑅𝐵𝐴𝑁𝐶𝐼𝐴 𝐷𝐸𝐿 𝐸𝑆𝑇Á𝑁𝐷𝐴𝑅 IVD. LAB CENTER DE MEXICO SA. Disponible en:
0,444 𝐴 http://www.spinreact.com.mx/public/_pdf/1001190.pdf
Glucosa en mg/dL: ∗ 100
0,566 𝐴
Glucosa en mg/dL: 78,445 𝑚𝑔/𝑑𝐿

De la misma manera, a través de la fórmula

𝐴𝐵𝑆𝑂𝑅𝐵𝐴𝑁𝐶𝐼𝐴 𝐷𝐸 𝐿𝐴 𝑀𝑈𝐸𝑆𝑇𝑅𝐴
∗ 5.55 se puede calcular el
𝐴𝐵𝑆𝑂𝑅𝐵𝐴𝑁𝐶𝐼𝐴 𝐷𝐸𝐿 𝐸𝑆𝑇Á𝑁𝐷𝐴𝑅
nivel de glucosa en sangre en mmol/L de la siguiente
manera:
0,444 𝐴
Glucosa en mmol/L: ∗ 5.55 = 4,354 𝑚𝑚𝑜𝑙/𝐿
0,566 𝐴

Deberiamos hablar de las reacciones, el color https://es.scribd.com/doc/22632512/1-Determinacion-

Cuantitativa-de-Glucosa-en-suero

V. CONCLUSIONES
Después de realizar la práctica de laboratorio se puede
concluir que se cumplió con los objetivos establecidos al
inicio del informe. Además, por medio de esta práctica,
se logró determinar el nivel de glucosa en sangre de un
individuo por medio de la metodología implementada al
usar el espectrofotómetro para calcular el nivel de
Absorbancia que posteriormente se usaría para calcular
cuantitativamente la glucosa por la fórmula expuesta en
la metodología.
http://avalon.utadeo.edu.co/comunidades/estudiantes/cie
ncias_basicas/bioquimica/guia_1_3.pdf
http://es.slideshare.net/jhulisalove/practica-nro-2-
bioquimica-determinacion-de-glucosa
http://www.spinreact.com.mx/public/_pdf/1001190.pdf
http://spinreact.com.mx/public/instructivo/QUIMICA%2
0CLINICA/LIQUIDOS/41010.11.12.13%20GLUC%20
LIQ%202012.pdf

http://ocw.unican.es/ciencias-de-la-salud/bioquimica-
estructural-y-metabolica/otros-recursos-
1/practica_03.pdf

VI. CAUSA DE ERROR

Las causas que pueden llevar al error radican

principalmente en la manipulación humana de los
elementos, debido a que estas no son exactas y pueden
influir negativamente en los resultados.
Por otro lado, se debe tener en cuenta que se puede
presentar una inadecuada calibración en los equipos
usados, lo que puede llevar a una incorrecta toma de
datos.
Por último, el medio en el cual se realizó la práctica de
laboratorio pudo haber influido negativamente en el
proceso y el resultado, debido a la temperatura y demás Por medio de esta práctica, se logró determinar el nivel
factores ambientales. de glucosa en sangre de un individuo por medio de la
metodología implementada al usar el espectrofotómetro
VII. MEJORAS AL PROCESO para calcular el nivel de Absorbancia que posteriormente
se usaría para calcular cuantitativamente la glucosa por
Para mejorar el proceso llevado a cabo es preciso tener la fórmula expuesta en la metodología.
a mano un instrumental de laboratorio más
automatizado, es decir, uno en el que la manipulación
humana sea mínima; esto con el fin de disminuir el
, en donde se realizó una reacción en la cual la glucosa
porcentaje de error que se presenta en los resultados.
del suero de la sangre fue oxidadaa acido glucónico por
medio del catalizador contenido en el reactivo R2 del kit
VIII. REFERENCIAS
que contenía glucosa oxidasa;esta reacción además de
darnos como producto al acido glucónico, también nos
dio peróxido de hidrógeno elcual fue el reactivo que fue
determinado en nuestra técnica (su producción)
mediante el aceptor cromogénicode oxigeno, fenol-
ampirona (contenido en el R1) en presencia de
peroxidasa (enzima contenida en el R2)dándonos un
color rojizo en la solución el cual era proporcional a la
concentración de glucosa presente en elsuero.

En base a los a los datos obtenidos de las muestras de los

sujetos a prueba y con los valores de
referenciaobtenidos, se puede decir que el 100% de
nuestros sujetos de prueba (excepto el valor de 405.98
que fueeliminado para los fines de obtener nuestros
valores de referencia; este valor pudo haber sido un error
de tiposistémico o aleatorio, o en su defecto algún
problema de glicemia en el sujeto, por lo que para
asegurarse deesto sería recomendable un nuevo análisis
de la muestra del sujeto en cuestión), entran dentro de
nuestrosvalores de referencia por lo que se puede decir
que son sujetos sanos y que no tienen ningún problema
deglicemia.