UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE
FARMACIA Y BIOQUIMICA

CÁTEDRA DE ANÁLISIS CLÍNICOS

Determinación de Hemoglobina y Hematocrito

INTRODUCCIÓN

La hemoglobina es una proteína compleja constituida por el grupo hem que contiene
hierro y le da el color rojo al eritrocito, y una porción proteínica, la globina2 , que está
compuesta por cuatro cadenas polipeptídicas (cadenas de aminoácidos), que
comprenden dos cadenas alfa y dos cadenas beta3. La hemoglobina es la principal
proteína de transporte de oxígeno en el organismo, es capaz de fijar eficientemente el
oxígeno a medida que este entra en los alveolos pulmonares durante la respiración,
también es capaz de liberarlo al medio extracelular cuando los eritrocitos circulan a
través de los capilares de los tejidos.4

La hemoglobina es una proteína conjugada que sirve para el transporte de O2 y CO2.

Cuando está totalmente saturada, cada gramo contiene alrededor de 1'4ml de O2. La
masa total de eritrocitos de un adulto contiene unos 600gr de hemoglobina capaces de
transportar 800ml de O2.5

Es la medición de la concentración de hemoglobina en un individuo, se basa en el

método de la cianometahemoglobina, es el método recomendado por el Comité
Internacional de Estandarización en Hematología (ICSH), abarca la medición de la
mayoría de las hemoglobinas presentes en la sangre, se basan en técnicas que
comparan la intensidad de la luz o del color y que miden también, en grado variable,
cualquier cantidad de metahemoglobina que pueda haber presente en una solución,
puede calcularse por medición de su color, de su poder de combinación con el oxígeno
o con el monóxido de carbono o por su contenido en hierro.6

Con el valor hematocrito se confirma el diagnostico de diferentes enfermedades y

patologías, como es el caso de las anemias y la policitemia. En esta prueba se mide la
cantidad de eritrocitos de la sangre en porcentaje del total, o lo que es lo mismo, el
porcentaje de células que transportan oxígeno frente al volumen total de sangre,
determinado por proceso de centrifugación. En este proceso, se pueden apreciar dos
niveles, los elementos formes que se sedimentan, y el plasma total que flota. En
definitiva es la relación porcentual entre ambos lo que representa el valor hematocrito.7
La medición de la velocidad de sedimentación globular (VSG) es una prueba para
evaluar la respuesta inflamatoria durante la fase aguda de diversos padecimientos
infecciosos y no infecciosos. Para medir la VSG hay diversos procedimientos; en 1974,
Wintrobe describió el método que requiere 1 ml de sangre venosa anticoagulada con
EDTA y en un tubo de Wintrobe se deja reposar a temperatura ambiente durante 1 hora.
Otra técnica es la de Westergreen, que consiste en extraer sangre venosa y mezclarla
con citrato trisódico al 3.8% como anticoagulante, luego en un tubo de cristal se deja
reposar durante 24 horas. La técnica en capilares llamada “velocidad de
microeritrosedimentación” es un procedimiento sencillo y útil para apoyar el diagnóstico
de sepsis; consiste en tomar una pequeña muestra sanguínea por punción venosa o en
el talón y colectada en un capilar heparinizado y se coloca en posición vertical durante
una hora. La lectura se realiza de la misma manera que las dos técnicas anteriores y el
resultado se reporta en mm/hora.8
OBJETIVOS

1. Determinar la hemoglobina de la muestra problema a partir de la ecuación de la

recta.
2. Obtener la pendiente de la curva de calibración y determinar R de la curva de
calibración
3. Observar la linealidad en la lectura de las absorbancias obtenidas
4. Determinar el porcentaje de hematocrito de una muestra de sangre venosa por
centrifugación.
5. Determinar la velocidad de sedimentación globular (VSG) en una muestra de
sangre venosa.

PARTE EXPERIMENTAL

Materiales, reactivos y equipos

A) Materiales
- Aguja
- Alcohol
- Algodón
- Tubos de ensayo
- Tubo Capilar
B) Reactivos
- Reactivo de Drabkin
C) Equipo
- Microcentrífuga
- Espectrofotómetro

MÉTODOS

1) DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA - MÉTODO DE DILUCIONES

1.1) Hallar por Factor.

Se preparó los siguientes tubos, luego se les midió su absorbancia, para posteriormente
utilizar las fórmulas de cálculo:

Blanco Estándar MP
(St.)(15g/dL)
Estándar 15g/dL - 20 uL -
MP (SV o SC) - - 20 uL
Reactivo diluyente 5 mL 5 mL 5 mL

FÓRMULAS:

Factor: g Hb /dL

F = conc.St./ lect St

g%Hb = F x lectura MP
1.1.2) Hallar por método de curva de calibración.

Se preparó las siguientes diluciones para recrear una curva de calibración:

Tubos Estándar 40g/dL Rvo diluyente Conc. St. Abs

(mL) (mL) (g/dL)
1 0.25 2.25 4 0.115
2 0.5 2.00 8 0.241
3 0.75 1.75 12 0.368
4 1 1.5 16 0.482
5 1.25 1.25 20 0.606
MP - 5 mL 20 uL MP 0.317

ESTO ES LO
QUE FÓRMULAS:
HALLAMOS
F = conc.St./ lect St
(MP)
F% = SUMA(F1+F2+F3+F4+F5) / 5

Diluciones de Estándares
2) DETERMINACIÓN DEL PORCENTAJE DE HEMATOCRITO

Calcular el
porcentaje de
Tomar muestra Centrifugar a
hematocrito
de sangre venosa 12000 rpm por 5
usando un papel
en un capilar minutos
lector o una regla
milimetrada.

3) DETERMINACIÓN DE LA VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR (VSG).

Dejar reposar
Calcular la
Tomar muestra en una
velocidad de
de sangre superficie plana
sedimentación
venosa en un en posición
globular en
capilar vertical durante
mm/hora.
1 hora.
RESULTADOS

1) DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA - MÉTODO DE DILUCIONES

2) DETERMINACION DEL PORCENTAJE DE HEMATOCRITO

Para calcular el porcentaje de hematocrito se hizo uso de la carta de lectura de

hematocrito y una regla.

Con carta de lectura de hematocrito

A partir de ello se obtuvo de la muestra 36% de hematocrito

Con regla

Con el uso de la regla se calcula de la siguiente

manera:

%𝑯𝒕𝒐 = 𝑳𝟏/𝑳𝟐 𝒙𝟏𝟎𝟎

𝟐. 𝟒
L2 %𝑯𝒕𝒐 = 𝒙𝟏𝟎𝟎
𝟔. 𝟏
%𝑯𝒕𝒐 = 𝟑𝟗%

L1
3) DETERMINACIÓN DE LA VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR (VSG).

Se usó una regla para calcular el volumen de sedimentación.

Se determinó el VSG el cual fue de 17mm/hora.

DISCUSIONES

El método de determinación de la hemoglobina con el reactivo de drabkin se

fundamenta por la lisis de los eritrocitos a partir de un agente tensioactivo en el
reactivo la cual libera la hemoglobina a la solución. La hemoglobina liberada
reacciona con el ferricinauro de potasio por oxidación formando
metahemoglobina, la cual a su ves reacciona con el cianuro de potasio formando
cianmetahemoglobina. La cual se mide a 540 nm, la intensidad del color de la
solución es proporcional a la concentración de hemoglobina en la muestra. 9

CONCLUSIONES

 Se determino el valor de hemoglobina por el método del factor y usando

la curva de calibración y se consideró el valor obtenido según este último
de 10.51 g/dL y se comparó con valores de referencia.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Baynes, J W. Dominiczak, M H. (2005). Bioquímica médica. 2a Edición.

Editorial Elsevier. España.
2. Burger S, Pierre-Louis J. (2002). How to Assess Iron Deficiency Anemia
and Use the HemoCue. Helen Keller International, A division oh Helen
Keller Worldwide, Disponible en línea. New York. USA. Disponible en:
(http://pdf.usaid.gov/pdf_docs/PNACW824.pdf)
3. Burger S, Pierre-Louis J. (2003). A Procedure to estimate the Accuracy
and Reliability of HemoCue Measurements of Survey Workers, USA,
International Life Sciences Institute, Washington DC. Disponible en:
(http://pdf.usaid.gov/pdf_docs/PNACW643.pdf)
4. Reinold C, Dalenius K, Brindley P, Smith B, Grummer-Strawn L. (2010).
Pregnancy Nutrition Surveillance 2008 Report. Atlanta: U.S. Department
of Health and Human Services, Centers for Disease Control and
Prevention. Disponible en:
(http://www.cdc.gov/pednss/pdfs/PNSS_2008.pdf)
5. Alors R. DETERMINACION DE LA HEMOGLOBINA EN EL
LABORATORIO. ISSN 1988-6047. Granda, 2008. Disponible en:
https://archivos.csif.es/archivos/andalucia/ensenanza/revistas/csicsif/revi
sta/pdf/Numero_3/Valoracion%20de%20la%20hemoglobina_rosarioalors
correderas.pdf
6. INS-CENAN. (2009). Manual del encuestador bioquímico. Consultoría
elaborada por Junco J., Monitoreo Nacional de Indicadores Nutricionales,
Documento de trabajo.
7. Cambero S. Manual de prácticas de laboratorio “Biometría Hemática”.
CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLOGICO Industrial y de Servicios
No. 41 BIOMETRIA HEMATICA, 2012. Pág. 23. Disponible en:
http://www.plerus.ac.cr/docs/manual-de-practicas-biometrica-
hermatica.pdf