Universidad Nacional

Federico Villarreal

PREPARACION DE
MEDIOS DE CULTIVO

Mg. David lazón M,

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GENERALIDADES

El crecimiento de
microorganismos en
sustancias alimenticias
artificiales es una de las
técnicas más importantes
usadas en el laboratorio.
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CONCEPTOS:
 Dado el pequeño tamaño de los microorganismos, la cantidad de información que
puede obtenerse de un individuo es muy limitada. Por ello es necesario el estudio de
poblaciones, que contienen miles o millones de individuos. Estas poblaciones se
obtienen al hacer crecer los microorganismos bajo condiciones más o menos bien
definidas, se conocen como cultivos.

 La mezcla de sustancias, naturales, sintéticas o ambas, que permite el crecimiento y la

reproducción de microorganismos o bien que permite mantener su viabilidad es lo que
conocemos como Medio de Cultivo

Medio
de
cultivo

Cultivo
 El agar es un elemento solidificante muy empleado para la
preparación de medios de cultivo. Se licúa completamente a la
temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados.
Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las
bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en él.
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PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

MEDIOS DE CULTIVO
▪ Un medio de cultivo es un
conjunto de nutrientes,
factores de crecimiento y otros
componentes que crean las
condiciones necesarias para el
desarrollo de los
microorganismos.
▪ La diversidad metabólica de
estos es tan grande que la
variedad de medios de cultivo
es enorme,
▪ No existiendo un medio de
cultivo universal adecuado
para todos ellos,
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CONDICIONES GENERALES PARA EL CULTIVO

DE MICROORGANISMOS
El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve
afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos
casos, son ajenos por completo al propio medio.

TEMPERATUR
A

NUTRIENTES
Y FACTORES GRADO DE
DE HUMEDAD
CRECIMIENTO

ACIDEZ O PRESIÓN DE
ALCALINIDAD OXÍGENO
 LAS CARACTERÍSTICAS MÁS IMPORTANTES DE LOS MICROORGANISMOS A SER
CONSIDERADAS AL MOMENTO DE PREPARAR UN MEDIO DE CULTIVO SON:

✓ Tipo trófico: autótrofos, heterótrofos, quimiotrofos, fotótrofos.

Autótrofos producen su "comida" a través de la fotosíntesis usando la energía del sol

Heterótrofos no pueden hacer su propio alimento, por lo que deben comer o absorberlo

Quimiótrofos son capaces de utilizar compuestos inorgánicos reducidos como sustratos para obtener energía

Fotótrofostienen capacidad de tomar fotones de la luz de Sol como fuente de energía,

✓ Tipo respiratorio: aerobios, anaerobios, anaerobios facultativos,

microaerófilos.

✓ Temperatura: psicrófilos (menos de 5 °C), mesófilos (20 y los 45 °C) y

termófilos ( por encima de los 45ºC

✓ pH: acidófilos, neutrófilos, basófilos.

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COMPOSICIÓN QUÍMICA - MACROELEMENTOS

FUENTE DE CARBONO:
✓ Pueden ser CO2 o compuestos carbonados orgánicos.
✓ Se utilizan en la construcción de innumerables moléculas necesarias para la
célula.
✓ Los hidratos de carbono se consideran fuente de carbono y energía.
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COMPOSICIÓN QUÍMICA - MACROELEMENTOS

FUENTE DE NITRÓGENO

✓ Es metabolizado para proveer proteínas, ácidos nucleicos y polímeros de

pared.

✓ Algunos microorganismos pueden incorporar nitrógeno en forma de

aminoácidos, bases purínicas o pirimidínicas.

✓ En ciertos medios de cultivo, el aporte de nitrógeno es realizado por las

peptonas
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COMPOSICIÓN QUÍMICA - MACROELEMENTOS

• FUENTE DE FÓSFORO • FUENTE DE AZUFRE

✓ Se agrega fosfatos de sodio o ✓ Se adiciona como SO4, cisteína

potasio. o metionina.

✓ El fósforo se incorpora a ácidos ✓ En la célula se incorpora a

nucleicos, fosfolípidos, polímeros aminoácidos y diferentes de

membrana, ATP, y sustancias coenzimas.

de reserva.
COMPOSICIÓN QUÍMICA - MACROELEMENTOS
• FUENTE DE K+ , Mg2+ , Ca2+ • FUENTE DE Na
✓ Son cationes que estabilizan ✓ Contribuye a equilibrar la
macromoléculas aniónicas. presión osmótica del medio

✓ K+ actúa como coenzima y extracelular.

• estabilizador de RNA. ✓ Se suele suministrar como

✓ Mg2+ se integra a la clorofila en NaCl.
organismos fotosintéticos.
✓ Ca2+ abunda en esporas como
dipicolinato de calcio.
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COMPOSICIÓN QUÍMICA – FACTORES DE

CRECIMIENTO
• Son compuestos orgánicos requeridos en muy bajas concentraciones.

• No pueden ser sintetizados por la propia célula.

• Deben ser agregados al medio de cultivo

• Pueden ser aportados en forma de:

✓ Extracto de carne

✓ Extracto de levadura

✓ Extracto de malta
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COMPOSICIÓN QUÍMICA – AGENTES SOLIDIFICANTES

• Su uso es opcional y el más usado es el agar.

• Se le adiciona en diferentes

concentraciones.

✓ 1.5 – 2 % en medios sólidos

✓ 0.2 – 0.3% en medios semisólidos

✓ 5% en medios de consistencia firme

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El agar o agar-agar
▪ es una sustancia carragenia, un polisacarido sin ramificaciones
obtenido de la pared celular de varias especies de algas de los
géneros Gelidium, Eucheuma y Gracilaria, entre otros, resultando,
según la especie, de un color característico.
▪ La palabra “agar” viene del malayo agar-agar, que significa jalea.
También es conocido como “gelosa”, “gelosina”, “gelatina vegetal”,
“gelatina china” o “gelatina japonesa”.
▪ Las algas y el gel extraído de ellas han sido utilizada desde
tiempos antiguos en los países de Extremo oriente (China, Japón,
Corea, etc.) y fue llevada a Europa hacia la mitad del siglo XIX.
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COMPOSICIÓN QUÍMICA – AGUA

• Representa del 80-90% del peso total de una

célula.

• Es fundamental para la realización de todos los

procesos metabólicos, funciones enzimáticas ….

• Los medios de cultivo se preparan en el

laboratorio con agua destilada.

TEMPERATURA
pH
HUMEDAD
 PRESIÓN OSMÓTICA

mayor osmolaridad en el medio

soluciones que tienen la menor concentración de externo, por lo que una célula en
misma presión osmótica soluto en el medio exterior en dicha solución pierde agua (H2O)
relación al medio interior de la debido a la diferencia de presión
célula
LUZ
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CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE

CULTIVO

Composición

Finalidad
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POR SU COMPOSICIÓN
MEDIOS LÍQUIDOS

• Llamado también caldo.

USO:

✓ diluciones

✓ homogenizar mezclas

✓ enriquecer cultivos

✓ rehidratar cepas liofilizadas

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POR SU COMPOSICIÓN
MEDIOS SÓLIDOS
• Llamado también agar.
• Se le añade 2% de agar.
• En placas petri o en tubos
• USO:
✓ Para separar
microorganismos
✓ Para favorecer el desarrollo
de colonias aisladas
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POR SU COMPOSICIÓN
MEDIOS SEMISÓLIDOS
• Consistencia leve o
gelatinosa.
• Medio líquido al que se
adiciona agar (0.4 a 0.8%).

USO:
✓ Para determinar la movilidad
de los microorganismos
microaerófilos.
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POR SU FINALIDAD
Contiene los nutrientes
mínimos necesarios para
el desarrollo de bacterias
MEDIO COMÚN poco exigentes: caldo
común, caldo carne, etc.
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POR SU FINALIDAD MEDIO DE

ENRIQUECIMIENTO

Son medios líquidos que

favorecen el crecimiento
de un tipo de
microorganismo en
particular.

Permite aumentar el
número de bacterias de
ese tipo.

El medio de cultivo enriquecido es una combinación de un

agar nutritivo como base más una sustancia o compuesto
enriquecido. Los medios enriquecidos por excelencia son el agar
sangre y el agar chocolate.
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POR SU FINALIDAD
MEDIO
ENRIQUECIDO

Se le agrega una
sustancia que
aumenta el poder
nutritivo.

Aporta algún factor

de crecimiento
necesario para el
microorganismo que
el medio no lo posea.
Agar Chocolate es un medio de cultivo enriquecido y no selectivo.
Para bacterias que necesitan factores de crecimiento, como el NAD y
hemina, contienen los glóbulos rojos. Haemophilus influenzae, N
Gonorrhoeae
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POR SU FINALIDAD
MEDIO SELECTIVO

Favorece el crecimiento de
un grupo de
microorganismos e inhiben
el crecimiento de otros.

Útiles en muestras mixtas.

Al medio se le adiciona
sustancias inhibitorias
como antibióticos o
ciertos colorantes.

Ejemplo: El agar Mac Conkey que

contiene cristal violeta
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POR SU FINALIDAD

MEDIO DIFERENCIAL

Permite diferenciar
bioquímicamente a las
bacterias por su
actividad metabólica.
Usa las propiedades metabólicas frente a determinado
nutriente y de un indicador que evidencia por ejemplo,
un pH ácido en su entorno.
Existen muchos medios diferenciales:
•Agar TSI Triple sugar iron (hierro tres azúcares)
•Agar citrato Revela características
•LIA: Lisine iron agar (lisina hierro)
•SLU: Sacarosa, lactosa y urea. Visualizaciòn de
fisiológicas de los
movimiento microorganismos.
.
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POR SU FINALIDAD

MEDIO SELECTIVO
DIFERENCIAL

Contiene sustancias
inhibidoras y sustancias
diferenciales.

El medio Sal Manitol

para Staphylococcus
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POR SU FINALIDAD
MEDIO DE
TRANSPORTE

Medio líquido o
semisólido.

Permite el
mantenimiento de
muestras clínicas

Contiene agua y
amortiguadores del
pH.
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• Ejemplos de medios de transporte son:

• Medio de transporte Stuart : Medio destinado a la recolección, transporte y preservación de

muestras clínicas aptas para exámenes bacteriológicos. Es útil para mantener la viabilidad
de gonococos y de otros microorganismos de difícil desarrollo.

• Caldo de Tioglicolato para anaerobios estrictos

• Venkat-Ramakrishnan (VR) medio para el V. cholerae.

• Amies-carbón: Medio Amies con carbón activado se utiliza para secreciones de heridas y
urogenital , para el cultivo y aislamiento de gérmenes fastidiosos , tratados o en
tratamiento con antimicrobianos y/o expuestos a metabolitos tóxicos para su desarrollo. .V.
cholerae permanece viable y cultivable durante sesenta días en el medio de transporte
Amies con carbón
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PREPARACIÓN – MEDIO DE CULTIVO

Pesar Añadir agua Someter a Colocar en

baño maría cajas petri o
tubos
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VIDEO: PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

https://www.youtube.com/watch?v=xl264Tos
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