Facultad de Tecnología Médica

Semana N° 09:
Staphylococcus
Asignatura: BACTERIOLOGIA
M.Sc. César E. Guerrero Barrantes

Año Académico 2020

Universidad Nacional
Federico Villarreal
Facultad de Tecnología Médica

Staphylococcus
• Cocos Gram(+), con un diámetro de 0.5-1 μm.
• Prueba de la catalasa (+): como Staphylococcus, Micrococcus,
Kocuria, Kytococcus y Alloiococcus).
• Anaerobios facultativos. Crecen en elevada concentración de
NaCl (10%) y temperatura 18-40 °C.
• Del griego staphylé, «racimo de uvas», presentes en piel y
mucosas en el humano. Staphylococcus aureus (narinas
anteriores), Staphylococcus capitis (glándulas sebáceas) y
Staphylococcus haemolyticus y Staphylococcus homínis (zonas
dotadas de glándulas apocrinas).
 Universidad Nacional
Federico Villarreal
Facultad de Tecnología Médica

Staphylococcus
• Patógenos en el ser humano. Amplio espectro de enfermedades
sistémicas, infecciones de la piel, las partes blandas, los huesos y
el aparato genitourinario e infecciones oportunistas.
• Especies asociadas con mayor frecuencia a enfermedad en el ser
humano son S. aureus (el miembro más virulento y mejor
conocido del género), Staphylococcus epidermidis, S.
haemolyticus, Staphylococcus lugdunensis y Staphylococcus
saprophyticus.
Universidad Nacional
Federico Villarreal
Facultad de Tecnología Médica

Staphylococcus
• La capa más externa de la pared celular estafilocócica se puede
recubrir de una cápsula de polisacárido qu protege a las
bacterias de los leucocitos polimorfonucleares (PMN).
• La mayor parte de los estafilococos producen una biopelícula
hidrosoluble laxa (capa de polisacárido extracelular) formada
por monosacáridos, proteínas y pequeños péptidos.
• Esta sustancia extracelular une las bacterias a los tejidos y
cuerpos extraños, como catéteres, injertos, prótesis valvulares y
articulares, propiedad importante para la supervivencia de los
estafilococos coagulasa negativos, los cuales son relativamente
avirulentos.
Universidad Nacional
Federico Villarreal
Facultad de Tecnología Médica

Staphylococcus: Peptidoglicano
• Peptidoglicano, es una estructura que representa la mitad
del peso de la pared celular.
• Posee una actividad de tipo endotoxina, ya que estimula la
producción de pirógenos endógenos, la activación del
complemento, la formación de interleucina-1 por parte de
los monocitos y la agregación de los leucocitos PMN (la
formación de abscesos).
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Federico Villarreal Facultad de Tecnología Médica

Staphylococcus: Acidos Teicoicos

• Ácidos Teicoicos. Polímeros fosfatados específicos de especie.
Se unen de manera covalente a residuos de ácido N-
acetilmurámico de la capa de peptidoglucano o a través de una
unión lipofílica a la membrana citoplásmica (ácidos
lipoteicoicos).
• El ácido teicoico de ribitol con residuos de N-acetilglucosamina
(«polisacárido A») se encuentra presente en S. aureus, mientras
que el ácido teicoico de glicerol con residuos glucosilo
(«polisacárido B») aparece en S. epidermidis.
 Staphylococcus: Acidos Teicoicos
 Ácidos Teicoicos. Polímeros fosfatados específicos de especie.
Se unen de manera covalente a residuos de ácido N-
acetilmurámico de la capa de peptidoglucano o a través de una
unión lipofílica a la membrana citoplásmica (ácidos
lipoteicoicos).
 El ácido teicoico de ribitol con residuos de N-
acetilglucosamina («polisacárido A») se encuentra presente en
S. aureus, mientras que el ácido teicoico de glicerol con
residuos glucosilo («polisacárido B») aparece en S. epidermidis.
 Staphylococcus: Acidos Teicoicos
 Los Acidos Teicoicos, median en la unión de los
estafilococos a las superficies mucosas a través de su
unión específica a la fibronectina.
 Son poco inmunogénicos, sin embargo estimulan una
respuesta humoral específica cuando se encuentran
unidos al peptidoglicano.
 Staphylococcus: Proteina A
 La superficie de la mayoría de las cepas de S. aureus
(pero no los coagulasa-negativos) está recubierta de la
“proteína A”.
 Está unida a la capa de peptidoglicano o a la membrana
citoplásmica y tiene afinidad al receptor Fc de las
inmunoglobulinas IgGr; IgG2 e IgG4, previniendo la
inmunidad por anticuerpos.
 Staphylococcus: Coagulasa
 La superficie externa de la mayoría de las cepas de S. aureus
contiene un factor de agregación (también llamado
coagulasa ligada).
 Estaproteína constituye un factor de virulencia en S. aureus.
Se une al fibrinógeno y lo convierte en fibrina insoluble, lo
que hace que los estafilococos se agreguen o formen
grumos.
 La detección de esta proteína constituye la prueba principal
de identificación de S. aureus.
 Staphylococcus: Patogenia-Toxinas
 La patología depende de la producción de proteínas de
superficie que intervienen en la adhesión de las bacterias y
de proteínas extracelulares, como toxinas específicas.
 Toxina α: Altera el músculo liso de los vasos sanguíneos y
es tóxica para hematíes, leucocitos, hepatocitos y
plaquetas. Forma poros de 1 a 2 nm alterando flujos de K+
y de entrada de Na+, Ca2+ y otras moléculas y conduce a
aumento de volumen por osmosis y a lisis.
 Toxina β: Hidroliza los fosfolípidos de la membrana y la
lisis es proporcional al contenido de esfingomielina
expuesta en la superficie celular. Específica para la
esfingomielina y fofosfatidilcolina
 Staphylococcus: Toxinas
 Toxina δ: Actúa como un surfactante que altera las membranas
celulares mediante una acción de tipo detergente, no es específica.
 Toxina γ y leucocidina: Proteínas S (HlgA, HlgC, LukS-PV) y
proteínas F (HlgB, LukF-PV). Estas toxinas pueden lisar neutrófilos
y macrófagos, y tienen actividad hemolítica. La toxina leucocidina
es leucotóxica. La lisis celular se genera por la formación de poros,
aumento de la permeabilidad a los cationes e inestabilidad osmótica.
 Toxinas exfoliativas: Esta toxina media el síndrome de la piel
escaldada estafilocócica (SPEE), hay dos formas distintas de toxina
exfoliativa (ETA y ETB). Son serina proteasas, actúan sobre los
puentes intracelulares (desmosomas) en el estrato granuloso de la
epidermis.
 Staphylococcus: Toxinas
 Enterotoxinas: Ocho tipos (A a E; G a I) y tres subtipos de la
enterotoxina C.
 Las enterotoxinas son estables a 100 °C durante 30 minutos y
resistentes a la hidrólisis de las enzimas gástricas e
intestinales
 Superantígenos capaces de inducir la activación inespecífica
de los linfocitos T y la liberación de citosinas, con infiltración
de neutrófilos en epitelio y lámina propia, y pérdida células
del cepillo.
 Se cree que la estimulación de la liberación de los mediadores
inflamatorios por parte de los mastocitos origina la emesis
característica de la intoxicación alimentaria estafilocócica.
 Staphylococcus: Otras enzimas
 Coagulasa: Provoca la formación de una capa de
fibrina alrededor del absceso estafilocócico, quedando la
infección localizada y los microorganismos protegidos
de la fagocitosis.
 Catalasa: Todos los estafilococos producen catalasa, la
cual cataliza la conversión del peróxido de hidrógeno en
agua y oxígeno. 2H2O2 + catalasa  2H2O + O2.
 Hialuronidasa: Hidroliza el ácidos hialurónico,
mucopolisacáridos que se encuentran en la matriz
acelular del tejido conectivo. Favorece la diseminación
de S. aureus en los tejidos. Más del 90% de cepas de S.
aureus la producen
 Staphylococcus: Otras Enzimas
 Fibrinolisina: Prácticamente todas las cepas de S.
aureus fabrican fibrinolisina. Puede disolver los
coágulos de fibrina. La estafilocinasa es diferente de las
enzimas fibrinolíticas producidas por los estreptococos.
 Lipasas: S. aureus y más del 30% de las cepas de
Staphylococcus coagulasa (-) producen diferentes
lipasas. Supervivencia en las zonas sebáceas.
 Nucleasa: Hidroliza ADN.
 Penicilinasa: Los microorganismos desarrollaron con
rapidez resistencia a la penicilina por su produción de
penicilinasa ((3-lactamasa). Plásmidos.
 Staphylococcus
 Síndrome de la piel escaldada.
 Intoxicación alimentaria.
 Síndrome Shock tóxico.
 Infecciones cutáneas.
 Bacteremia y endocarditis.
 Neumonía y empiema.
 •Osteomielitis y artritis séptica.
 Staphyloococcus: Toma de muestra
 La muestra se puede obtener a partir de abscesos, con un hisopo.
 El aspirado con pus contiene material necrótico con un número
relativamente bajo de microorganismos, por lo que la muestra carece
de utilidad.
 Por lo general, hay pocos microorganismos presentes en la sangre de
los pacientes bacteriémicos (menos de 1 microorganismo por mL de
sangre), por lo que las muestras de sangre se deben cultivar pero no se
deben teñir.
 Se observa la presencia de estafilococos en la nasofaringe de los
pacientes con SPEE y la vagina de las pacientes con Síndrome del
Shock Tóxico, el diagnóstico de estas enfermedades se basa en las
manifestaciones clínicas del paciente y se confirma con el aislamiento
de S. aureus en el cultivo.
 Staphylococcus: Diagnóstico Laboratorio
 Microscopía: Cocos gram(+), en racimos.
 Serología: Los anticuerpos frente a los ácidos teicoicos
están presentes en muchos pacientes con infecciones
prolongadas por S. aureus. Se detectan en la mayor parte
de los pacientes con endocarditis estafilocócica, pero es
menos fiable en casos con osteomielitis o heridas.
 Identificación: Pruebas bioquímicas (coagulasa,
proteína A, nucleasa termoestable y fermentación de
manitol) para diferenciar S. aureus y otros estafilococos.
Patrones de sensibilidad antímicrobiana (antibiogramas)
y análisis de ácidos nucleicos.
 Staphylococcus: Cultivo
 Cultivoen Agar sangre, siembra estría y se incuba a
37°C. Hemolisis(+): α, β Hemolisis(-).
 Agar Sal Manitol: Concentración de NaCl (7,5 %) le
proporciona su carácter selectivo (microorganismos
osmotolerantes y osmófilos).
• El manitol, único azúcar presente, es fermentado por
cepas patógenas. La fermentación produce ácidos (viraje)
• Staphylococcus aureus (+): Colonias grandes
rodeadas de un halo amarillo.
• Staphylococcus epidermidis (-): Colonias pequeñas
rodeadas de un halo púrpura (a veces desarrollo de
Enterococcus faecalis, pero pobre).
 Staphylococcus: Diagnóstico Laboratorio
 Coagulasa: enzima capaz de desnaturalizar la fibrina del
plasma. Staphylococcus aureus dan una reacción positiva y
los no patógenos negativa.
•Añadir una suspensión densa de bacterias a un tubo
pequeña con plasma, incubar a 37ºC. Se observa la coagulación
a las 4 y 24 h sin sacarlos de la estufa.
 Catalasa: enzima que protege frente al peróxido de hidrógeno
producido en el metabolismo del oxígeno. Añadir unas gotas
de peróxido de hidrógeno sobre las colonias, la producción
de burbujas indica la presencia de la enzima.
• Streptococcus (negativa)
Staphylococcus (positiva) y Clostridium (negativa) y Bacillus
(positiva).
 Staphylococcus: Diagnóstico
 Se emulsionan varias colonias en un tubo con 0,5 ml de
plasma citratado de conejo. Se incuba a 35 ºC y se
chequea la formación del coágulo a las 4 horas.
 Sies negativo se reincuba toda la noche y se procede a su
lectura a las 18 horas.
 La lectura a las 4 horas es fundamental porque en alguna
oportunidad puede suceder que las fibrinolisinas de S.
aureus lisen el coágulo luego de 18 horas de incubación y
de esta manera se produzcan un test falso negativo.
 Interpretación de resultados: se observa la formación de
un coágulo total o parcial si el test es positivo.
 Staphylococcus: Diagnóstico
CARACTERES S. aureus S. saprophyticus S.epidermidis

Coagulasa + - -

DNAsa + - -

Termonucleasa + - -

Proteina A + - -

Susceptibilidad a R R S
Novobiocina

Reacción positiva; -, reacción negativa; S, sensible; R, resistente

 Staphylococcus: Diferencia de Género

Caracteres Staphylococcus Micrococcus

Lisostafina S R

Sensibilidad a R S
bacitracina (0,04 U)

Utilización de glucosa + -
en anerobiosis (Ferm)
 Staphylococcus: Diagnóstico
 SUSCEPTIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA: Separar S. saprophyticus
(resistente a la novobiocina) de los demás estafilococos coagulasa
negativos.
 Fundamento: varias especies del género Staphylococcus son resistentes a
la novobiocina (disco de 5 µg.) dentro de las cuales se encuentra S.
saprophyticus.
 Procedimiento: se siembra una placa de agar sangre o agar Mueller-
Hinton como si se fuera a realizar un antibiograma.
 Se utiliza un hisopo embebido en una suspensión, con una turbidez
equivalente a un Mc Farland 0,5, de la cepa a estudiar.
 Luego se aplica el disco de novobiocina y se incuba a 35 ºC por 18
horas. Un halo de inhibición de crecimiento menor o igual a 16 mm
corresponde a S. saprophyticus. Un halo de inhibición mayor de 16 mm
corresponde a otros estafilococos coagulasa negativos.
GRACIAS