MACROMOLÉCULAS

BIOMOLÉCULAS
 Proteínas, ácidos nucleicos, carbohidratos y
lípidos.
 Enlaces
 La presencia de moléculas a base de C, N, O y H,
permite que estas exhiban características químicas
como los diferentes tipos de enlace o interacciones
moleculares, que condicionan tanto las propiedades
físicas, químicas, funcionales y estructurales. Estas
características son el punto de partida para el estudio,
análisis e identificación de las diferentes
macromoléculas en el laboratorio.
 SEPARACIÓN DE
MACROMOLÉCULAS

 Centrifugación
 Decantación

(Tamaño molecular y diferente solubilidad)

 CENTRIFUGACIÓN
 Una de las propiedades físicas de las
macromoléculas es que por su alta densidad
tienden a sedimentarse en medio acuoso, lo que
permite que se formen diminutos gránulos. Esta
característica física hace posible separar
macromoléculas con alto peso molecular mediante
la centrifugación.
 DECANTACIÓN
 La decantación es un método físico de separación de
mezclas especial para separar mezclas heterogéneas,
estas pueden ser exclusivamente líquido - líquido ó
sólido - líquido. La decantación se basa en la diferencia
de densidad (física)|densidad entre los dos
componentes, que hace que dejados en reposo, ambos
se separen hasta situarse el más denso en la parte
inferior del envase que los contiene. De esta forma,
podemos vaciar el contenido por arriba.
 Solubilidad
Modificadas por:

 Cambios de pH Sales
 Carga eléctrica solventes orgánicos

Pruebas químicas
Separadas
específicas
 OBJETIVOS
 Extraer y reconocer macromoléculas presentes
en la célula de levadura Saccharomyces
cerevisiae
 DISCUSIÓN
 Maceración: Material abrasivo, arena.
 Ácido tricloroacético: (cambios en el solvente – pH y
carga eléctrica – acentúa la diferencia de solubilidad -
precipitación)
 Decantación: (método de separación, diferencias de
solubilidad)
 Centrifugación: Masa (tamaño molecular) y la densidad
(determinada por su estructura).
 Esta separación se hace en orden ascendente de masa
y densidad. Primero se purifica la de menor masa y
densidad: Glucogéno.
 DISCUSIÓN
 Después de sedimentar? Precipitado? Sobrenadante?
 Glucógeno + etanol: Disminuir la constante dieléctrica?
 Constante dieléctrica del etanol oscila entre 1 -10.
 ¿Por qué el etanol frío? Por que se quiere evitar que la
constante dieléctrica aumente con el aumento de la
temperatura y a temperaturas bajas la energía cinética
es menor y es más fácil precipitarla.
 Centrifugar
 Precipitado se le agrega LUGOL.
PURIFICACIÓN E IDENTIFICACIÓN DEL
GLUCOGENO
MOLÉCULA DE GLUCOGENO
 DISCUSIÓN
Sedimento inicial:

 NaCl 10%
 calentamiento
 Centrifugación

 Las proteínas se precipitan o muestran mínimo de

solubilidad cuando su pH corresponde al pH isoeléctrico,
al que la molécula no posee carga eléctrica?
 DISCUSIÓN
pH isoeléctrico:
 La sal: Aporta aniones y cationes que producen la
ionización de los grupos R disociables, equilibrando las
cargas eléctricas, en estas condiciones no existe
repulsión electrostática entre moléculas de proteínas
vecinas y tienden aglomerarse y precipitar (Lehninger 1987).
 Discusión
 Calentamiento: Contribuye con el proceso de
precipitación, las proteínas pierden su estructura
terciaria y secundaria, conservando intacta la primaria.
 El calor incrementa la cinética de las moléculas
individuales, los enlaces que les confieren su
ESTRUCTURA se rompen, haciéndolas más solubles,
fenómeno conocido como DESNATURALIZACIÓN.
(Lehninger 1987).
 Discusión
 Después de la centrifugación: Sedimento de
proteínas y un sobrenadante de ácidos
nucleicos y solución de NaCl.
 Porqué no precipita primero el ADN que tiene
mayor masa?
 Discusión
 Los ácido nucleicos no se sedimenta, por que al
desnaturalizarse no se rompen los enlaces
covalentes entre el azúcar y la base
nitrogenada, pero si se abre la estructura
duplohelicoidal(Lehninger 1987).
 Discusión
 Al sobrenadante con los ácidos nucleicos y la
solución de NaCl se le agrega el etanol frío.
 Centrífuga
 Sedimento estén los ácidos nucleicos.
 Adiciona amortiguador salino pH 7: regule el pH
y mantenga un estado iónico óptimo de las
moléculas.
 Se adiciona reactivo de ORCINOL (reacción de
color verde es positiva): ARN.
 Prueba de orcinol o prueba de Bial
OH
OH
Cl Cl
3FeCl3
3HCl
H3C OH
H3C OH
Cl
 Discusión
 Sedimento de proteínas: se agrega una
solución de NaCl para redisolverlas.
 Agrega NaOH y solución de sulfato cúprico:
BIURET.
 La prueba de Biuret detecta la presencia de
enlaces peptídicos y es positiva cuando están
presentes dos o más.
 Discusión
 Elalcalí sirve para convertir el complejo
en una solución de sodio soluble. El color
se debe a la presencia de un complejo de
coordinación con Cu+2 en el cual el enlace
peptídico de las proteínas conduce al
complejo estable en el cual se forman de
dos a cinco miembros (Plummer, 1981)
BIURET
REACCIÓN DE BIURET
Parte de cadena peptídica de proteínas
R R R R

CH CH CH CH

N C N C N C N C

H O H O H O H O

Complejo Purpura
R R R R

C C C C

N C N C N C N C

Cu O
Cu O Cu O Cu O
 BIBLIOGRAFIA
 Caicedo, L.D. Guía de Laboratorio de Bioquímica General 1, Práctica de laboratorio 2.
Macromoléculas.
 HICKS2, GOMEZ, J. J. Bioquímica. McGraw-Hill Interamericana, Mexico, 2000. Páginas:
264-7
 Lehninger3. Páginas: 165-176
 MATHEWS4, C. K, VAN HOLDE, AHERN, K.G. Bioquímica. Tercera Edición, Prentice Hall,
Madrid, 2003. Páginas. 202-3,
 SKOOG, D, West D. Química Analítica. 4 ed, Mc Graw-Hill, Mexico, 1994. Páginas: 333.
 BROCK. Biología de los Microorganismos. 10ª Edición, Prentice Hall, Madrid, Paginas: 52.
  Microsoft® Encarta® 2007 [DVD]. Microsoft Corporation, 2006. "Hongos.", “Levadura”,
”Hidratos de carbono”, “ARN”, ”Proteínas”, “Carbohidratos”, “Ácidos nucléicos”.

 http://es.wikipedia.org/wiki/Gluc%C3%B3geno
 La estructura y la polaridad de la molécula de agua hacen que esta sea un
disolvente capaz de reducir las fuerzas de atracción que existen entre partículas
de cargas opuestas (o de reducir la repulsión entre partículas de cargas
iguales). La constante dieléctrica no tiene unidades, pero es una medida de esa
reducción y se define como:

 El punto isoeléctrico es el pH al que una sustancia anfótera tiene carga neta

cero. El concepto es particularmente interesante en los aminoácidos y también
en las proteínas. A este valor de pH la solubilidad de la sustancia es casi nula.
 Las moléculas complejas, tales como las proteínas, se combinan con los iones
hidrógeno y con otros iones presentes en la disolución, dando lugar a la carga
neta de la molécula. A la concentración de iones hidrógeno, o al pH, para el cual
la concentración del ion híbrido de una proteína es máxima y el movimiento neto
de las moléculas de soluto en un campo eléctrico es prácticamente nulo, se le
denomina punto isoeléctrico.