Pruebas

Bioquímicas.

HIDRÓLISIS
DE
GELATINA. MICROBIOLOGIA.
PALABRAS CLAVES.
• PROTEOLISIS: Degradación de las proteínas.
• LICUEFACCIÓN: Es el paso de un componente de un estado solido o
gaseoso a liquido.
• INOCULACION: Injertar o introducir.
• PEPTONA: Polipeptidos
PRINCIPIO.
La gelatina es una proteína que tiene la capacidad de gelificar, cuando es
hidrolizada por la gelatinasa (enzima: proteasa, exoenzima) en los a
minoácidos que la componen pierde su característica de gelificar.
Para que la gelatina sea hidrolizada en el cultivo, el microorganismo
debe posee la enzima proteolítica gelatinasa.

 
OBJETIVO.
a) Nos ayuda a determinar la capacidad de un microorganismo de producir enzim
as de tipo proteolítico (gelatinasas) que licuan la gelatina.
b) Permite diferenciar especies de:
• Staphylococcus aureus +.
• Staphylococcus epidermidis (lento y +)
• Especies de micrococcus (variables y lentas)
• Corynebacterium ulcerans +
• Arcanobacterium haemolyticum +
• Corynebacterium pyogenes (variable)
• Serratia liquefaciens +.
• Serratia marcescens +
• Pseudomona aeruginosa (+ y rápida).
• Especies de Flavobacterium +
• Bacilo cereus +.
BASES BIOQUIMICAS.
Las proteínas que se producen naturalmente son moléculas demasiado grandes, para que la
bacteria las utilice, primero deben ser catabolizadas, para que esto se lleve a cabo, ciertas
bacterias segregan gelatinasas exocelulares para degradar las proteínas y esta capacidad
ayuda a la identificación de la bacteria, el catabolismo de las proteínas por parte de las gelati
-nasas es un proceso de dos pasos, el resultado final es una mezcla de aminoácidos aislados
. 

Las encimas capaces de producir gelatinolisis se denominan gelatinasas, estas enzimas pro-
teolíticas (proteinasas) son importantes factores de virulencia de algunos microorganismos.
Capacidad de un organismo de producir enzimas de tipo proteolítico (gelatinasas) que licuan/
hidrolizan gelatina o muestran cambios característicos debido a la degradación de productos.
 MEDIOS EMPLEADOS.
• Cultivos puros de bacterias crecidos de 18-24 horas en agar
nutritivo.
• Medio de enriquecimiento: tubo de hemolisis con gelatina
nutritiva (proteína)
• No requiere reveladores como colorantes.
Preparación del medio de cultivo de gelatina
nutritiva.

PROCEDIMIENTO.
•Agregar la gelatina al agua destilada y dejar reposar de 15 a 30 minutos
•Calentar hasta ebullición para diluir por completo la gelatina
•Agregar el extracto de carne y la peptona y volver a calentar hasta ebullición para disolver
todos los componentes.
•Distribuir en alícuotas de 5 mL en tubos de ensayo con tapa.
• Esterilizar en autoclave por 15 min a 15 lb a121°C.
•Enfriar en posición vertical, ajustar las tapas y refrigerar para su conservación (4°C)
INOCULACIÓN.
PROCEDIMIENTO.
•Inocular por punción los tubos con gelatina
nutritiva.
•Como control dejar uno sin inocular.
•Incubar a 37°C durante 24 horas a 14 días.
•Colocar en heladera de 30min-2 horas y l
uego observar licuación y crecimiento.
INTERPRETACIÓN.
CONTROLES NEGATIVOS
Si el contenido del tubo inoculado después del enfriamiento
por refrigeración o por baño de hielo es solido, se tiene un
resultado negativo.
4-6°C
CONTROLES POSITIVOS.
Si el contenido del tubo inoculado después del e
nfriamiento por refrigeración o por baño de hielo e
s liquido, se tiene un resultado positivo.
RECOMENDACIONES.
• Hay microorganismo en los que la prueba de hidrólisis de gelatina es tardía,
en resultados negativos volver a incubar el tubo por un tiempo adicional,
posteriormente realizar el control de resultados.
• Es muy importante estar al tanto de la temperatura pues la gelatina es líquida
por encima de 20 ° C; por lo tanto, la determinación de los resultados se
debe completar después de la refrigeración.
• Se pueden emplear varios métodos que permiten la visualización macroscó-
pica como la gelatina adherida a carbón activado.
GRACIAS.
BIBLIOGRAFIA.
• http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/10_PruebasBioqu
imicas_27069.pdf
• http://biology.uprm.edu/files/pruebas_bioquimicas.pdf
• https://es.slideshare.net/iltaitDes/pruebas-bioquimicas-para-
microorganismos-y-medios
• http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/guia.pdf
• https://www.franrzmn.com/prueba-de-la-gelatinasa/
• https://prezi.com/vc0ov2rzxzyl/hidrolisis-de-la-gelatina/