UNIVERSIDAD DE CARABOBO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA DE BIOANÁLISIS – SEDE CARABOBO
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BÁSICAS
ASIGNATURA: ANÁLISIS INSTRUMENTAL

PRÁCTICA N° 6
DOSIFICACIÓN DE CREATININA
MÉTODOS DE CALIBRACIÓN

INTRODUCCIÓN.
La creatinina es el anhidro de la creatina, el cual se forma en el hígado a
través de una serie de reacciones enzimáticas, la creatinina una vez que pasa
a la sangre no vuelve a ser utilizada y se excreta de manera constante por la
orina.

En condiciones normales, la cantidad diaria de creatinina producida es

constante (aproximadamente un 2% de la Creatina), dependiendo casi
exclusivamente del tamaño corporal y del índice metabólico.
La producción de la creatinina es proporcional a la masa total del
músculo y no es modificada relativamente por la dieta, por la actividad física, o
el volumen urinario normal, por esta razón la dosificación de la creatinina sérica
es el indicador de función glomerular más frecuentemente empleado para
evaluar la función renal de un paciente.

Los valores normales o referenciales de creatinina sérica son: 0,4 – 1,2

mg.dL-1, variando con la edad y el sexo.
La mayor parte de los métodos para determinar creatinina utilizan la
Reacción de Jaffé, la cual se basa en la reacción del Ácido Pícrico en medio
alcalino con la creatinina, produciéndose un tautómero de picrato de creatinina
de color rojo-anaranjado cuya intensidad de color es proporcional a la
concentración de creatinina presente en la muestra, el cual puede ser medido
fotométricamente.
OH
Creatinina + Picrato Complejo de Janovski (rojo-anaranjado)

La principal desventaja de este método es su falta de especificidad, ya

que la creatinina es sólo uno de los compuestos que reaccionan con el ácido
pícrico en medio alcalino (según el método empleado, las interferencias pueden
producir hasta un 50 % de color, entre ellos se encuentran las proteínas,
acetonas, barbitúricos, etc.)
Distintas modificaciones de la reacción original de Jaffé mejoran la
especificidad del ensayo, siendo la modificación cinética (análisis cinético
durante la formación temprana de color) muy utilizada y adaptable a la
automatización.
OBJETIVO GENERAL
Determinar la concentración de creatinina de un paciente, empleando la
técnica de dosificación usada en el laboratorio clínico, aplicando los métodos
de factor de calibración y curva de calibrado.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS
 Preparar las soluciones patrones necesarias para realizar la curva de
calibrado de la creatinina, a partir de una solución concentrada.
 Realizar la curva de calibrado de la creatinina, obteniendo la
representación gráfica de las absorbancias de cada patrón en función de
sus concentraciones.
 Determinar el factor de calibración promedio de los patrones preparados
en el laboratorio.
 Determinar la concentración de creatinina en la muestra problema a
través de la técnica de dosificación utilizada en el laboratorio clínico, y
empleando los dos métodos de calibración estudiados (gráfico y
analítico).
 Comparar y analizar los resultados obtenidos en cada uno de los
métodos de calibración.

INSTRUMENTAL
 Fotocolorímetros: Klett Summerson.
 Espectrofotómetros: Spectronic 20, Helena Sea Jr.
 Baño de María.
 Centrífuga.

CRISTALERÍA
 Balones aforados.
 Tubos de ensayo (16 x 150 mm).
 Vasos de precipitado.
 Pipetas (serológicas y volumétricas).
 Celdas.

OTROS
 Papel de filtro, gradillas, guantes, jeringas, algodón, alcohol.

REACTIVOS
 Ácido Pícrico saturado (C6H3O7N3).
 Hidróxido de Sodio (NaOH).
 Solución concentrada de Creatinina (100 mg/dL).

PROCEDIMIENTO
El método a utilizar es el Método de Popper – Mandel – Meyer basado en
la Reacción de Jaffé, el cual requiere una desproteinización previa de la
muestra, tal como fue indicado anteriormente:
1. Preparación de las Soluciones Patrón de Trabajo:
La solución madre (concentrada) es de 100 mg/dL.
A partir de la solución concentrada prepare patrones de concentraciones
equivalentes a: 0,75 mg/dL; 1 mg/dL; 1,5 mg/dL; 2 mg/dL y 3 mg/dL de
Creatinina.
Realizar los cálculos correspondientes, medir los volúmenes de solución
madre y enrasar con agua destilada.

2. Filtrado Libre de Proteínas:

En un tubo de ensayo, colocar 8 mL de Acido Pícrico + 2 mL de suero y
agitar. Llevar a baño de agua hirviendo durante 30 segundos. Filtrar
inmediatamente (en caliente).

3. Reacción Colorimétrica:

PATRONES/mg.dL-1
REACTIVOS BLANCO (mL) PROBLEMA
(mL) (mL)

0,75 1,0 1,5 2,0 3,0

Filtrado - - - - - - 5
Patrón - 1 1 1 1 1 -
Agua destilada 1 - - - - - -
Acido Pícrico 4 4 4 4 4 4 -
NaOH 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2
Mezclar muy bien por inversión y dejar en reposo a temperatura ambiente
durante 10 minutos. Leer a 520 nm.
NOTA: El color es estable durante 1 hora.

Realice el ajuste del instrumento y comience a leer a partir del patrón de

menor concentración.
Una vez obtenidas las lecturas, haga la representación gráfica en un
papel milimetrado y calcule la concentración del problema por el método gráfico
y analítico.

Valores de Referencia de Creatinina Sérica:

Hombres = 0,5 – 1,3 mg.dL-1
Mujeres = 0,4 – 1,1 mg.dL-1
BIBLIOGRAFIA

Prieto, S., Amich, S., Salve, M. (2001). Manual de Laboratorio Clínico Básico.
Editorial Mc Graw Hill. Bogotá, Colombia.

Universidad de Carabobo. Facultad de Ciencias de la Salud. Escuela de

Bioanálisis. Guía de Trabajos Prácticos de Análisis Instrumental. (1985).

Universidad de Carabobo. Facultad de Ciencias de la Salud. Escuela de

Bioanálisis. Guía de Trabajos Prácticos de Análisis Instrumental. (2002).
 UNIVERSIDAD DE CARABOBO
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA DE BIOANÁLISIS – SEDE CARABOBO
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BÁSICAS
ASIGNATURA: ANÁLISIS INSTRUMENTAL

INFORME DE LA PRÁCTICA N° 6

DOSIFICACIÓN DE CREATININA SÉRICA A TRAVÉS DE LA

CURVA DE CALIBRADO Y FACTOR DE CALIBRACIÓN.

a) Cálculos necesarios para la preparación de las Soluciones Patrón

de Trabajo de Creatinina
 b) Resultados obtenidos en la actividad practica:

Estudiante: _______________________________________________
Fecha: ____________________
Instrumento: _______________________________________________
Serial: ________________________ N°: ______________
Observaciones:
_____________________________________________________
_______________________________________________________________
___

PATRONES
Factor de
Lectura
Concentración/mg.dL-1 Absorbancia Calibración/mg.dL-1
Obtenida

PACIENTE (Problema)
Factor de Calibración
Promedio/mg.dL-1

Concentración del
Problema/mg.dL-1

c) Reporte de Resultados del Paciente:

Nombre del Paciente: __________________________________________

Edad: ___________ Sexo: _____________

Concentración de Creatinina Sérica: ___________ mg.dL -1

Valores de Referencia: ________________ mg.dL -1
Método:
___________________________________________________________

Observaciones:
_____________________________________________________
_______________________________________________________________
___

Firma: ___________________
ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS