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INTRODUCCIÓN
El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de ver con el
microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio
que la rodea, y el medio más simple de aumentar el contraste entre la célula y el medio que
la rodea es la utilización de colorantes. Estos pueden emplearse también para localizar
estructuras específicas en la célula o para distinguir entre tipos diferentes de células.
Las células generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de teñirlas,
proceso llamado fijación. Para las bacterias la fijación por el calos es lo más corriente,
aunque también puede fijarse con sustancias químicas como formaldehído, ácidos y
alcoholes. Después de la fijación se realiza habitualmente en células que han sido secadas
sobre un portaobjetos, tratando después éste con el agente fijador y siguiendo
inmediatamente el proceso de tinción. La fijación produce generalmente el encogimiento de
las células, la tinción, por el contrario, hace que las células aparezcan mayores que lo que
son realmente, de manera que las medidas de las células que han sido fijadas o teñidas no
pueden realizarse con mucha precisión.
La mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos que tienen alguna afinidad
específica por los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia son
moléculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con los
constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los ácidos nucleicos y los
polisacáridos ácidos. Ejemplos de colorantes catiónicos son el azul de metileno, el cristal
violeta y la safranina. Otros colorantes son moléculas cargadas negativamente (aniones) y
se combinan con los constituyentes celulares cargados positivamente, tales como muchas
proteínas. Esos colorantes incluyen la eosina, la fucsina ácida y el rojo Congo. Otro grupo
de colorantes son sustancias liposolubles. Los colorantes de este grupo se combinan con los
materiales lipídicos de la célula, usándose a menudo para revelar la localización de
depósitos de grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es el negro Sudán. Algunos
colorantes teñirán mejor sólo después de que la célula haya sido tratada con otra sustancia
química, que no es un colorante por sí mismo. Esta sustancia se denomina mordiente. Un
mordiente habitual es el ácido tánico. El mordiente se
Combina con un constituyente celular y lo altera de modo que ahora sí podrá atacar el
colorante.
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simple que actúa sobre todas las células bacterianas rápidamente y que no produce un color
tan intenso que oscurezca los detalles celulares. Es especialmente útil para detectar la
presencia de bacterias en muestras naturales, puesto que la mayor parte del material no
celular no se tiñe.
TABLA DE CONTENIDO
Pág.
INTRODUCCION
1. TINCION DE GRAM 4
2. TINCIÓN DE GIEMSA 10
3. TINCIÓN WRIGHT 12
4. TINCIÓN DE FIELD 14
5. TINCIÓN DE ESPORAS 16
6. TINCIÓN NEGATIVA 17
7. TINCIÓN ÁCIDO ALCOHOL RESISTENCIA ZIEHL-NEELSEN 17
8. BIBLIOGRAFIA 25
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1. TINCION DE GRAM
PRINCIPIO
Luego del descubrimiento casual realizado por el investigador danés Christian Gram,
pasaron muchos años durante los cuales se efectuaron las más variadas especulaciones
sobre el mecanismo de esta coloración.
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esta membrana diferencia actualmente dos divisiones en sistemática bacteriana: las que no
lo poseen, Firmicutes (Gram +) y las que sí, Gracilicutes (Gram -). La diferencia entre
ambos grupos es pues de enorme importancia taxonómica. El comportamiento como
patógenos y en la sensibilidad antibacteriana difieren sustancialmente; de ahí que la
realización rápida de una coloración de Gram, reviste enorme importancia en Bacteriología
Clínica.
Por esto el complejo de color formado con la pared de las bacterias Gram positivas no
puede ser removido con el agente decolorante que es el alcohol acetona. La célula
permanece de color azul violeta, en cambio las bacterias Gram negativas, al decolorarse
con el alcohol acetona, se dejan colorear con la fuscina ó safranina, quedando de color
rosado.
FUNDAMENTO.
El cristal violeta sirve como colorante básico uniéndose a la pared celular bacteriana, con al
ayuda del mordiente que refuerza la unión del colorante. Las bacterias GRAM POSITIVAS
debido a la estructura y composición bioquímica de su pared celular retiene el complejo
cristal violeta-lugol y aún después del tratamiento con el decolorante conserva el colorante
básico, por lo que se observan al microscopio de color azul oscuro o violeta una vez
concluida la técnica de tinción.
Las bacterias GRAM NEGATIVAS pierden el colorante básico cuando son tratadas con el
decolorante debido a que el alcohol disuelve el contenido lipídico de la pared celular lo que
aumenta la permeabilidad celular, dando como resultado la pérdida del complejo cristal
violetalugol. Las bacterias decoloradas captan entonces el colorante de contraste, razón por
la cual estas células bacterianas se observan al microscopio de color rosado una vez
concluida la técnica de tinción.
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La tinción de Gram tiene valor diagnóstico y puede ser aplicada a diversos y múltiples tipos
de especímenes clínicos como líquidos corporales estériles (LCR), exudados, excreciones
(orina), secreciones (esputo), abscesos y tejidos. También puede aplicarse a diferentes tipos
de materiales de uso hospitalario como catéteres y soluciones para el diagnóstico y control
de las enfermedades intrahospitalarias.
TÉCNICA
3. Colocar la placa sobre un soporte y cubrirla con cristal violeta durante un minuto.
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RESULTADO
CONTROL DE CALIDAD
Los controles puedes realizarse con bacterias Gram Positivas (estafilococos) y bacterias
Gram Negativas (Escherichia Coli). Para ello deben utilizarse cultivos procedentes de
medios de cultivo incubados durante 18-24 horas.
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lactobacilos
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2. TINCIÓN DE GIEMSA
PRINCIPIO
MUESTRAS
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Se deben usar láminas nuevas y prelavadas con alcohol de 96% para quitar la grasa. Se
toman dos (2) láminas, una para la gota gruesa y la otra para el extendido, se limpia el dedo
del paciente con Alcohol, y deja secar. Se realiza la punción, la primera gota se descarta y
con las láminas se recoge una sola gota en cada una de ellas. (No se debe tocar la piel con
la lámina). En una de las placas se hacen movimientos circulares hasta alcanzar un
diámetro de 1 cm para la gota gruesa, en la otra lamina se hace un extendido delgado y
corto.
PROCEDIMIENTO
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4. Se colorea la lámina boca abajo durante 30 minutos y se lava con agua del chorro y se
deja secar.
CONTROL DE CALIDAD
3. TINCIÓN WRIGHT
PRINCIPIO
MUESTRAS
Se deben usar laminas nuevas y prelavadas con alcohol de 96% para quitar la grasa. Deben
utilizarse frotis frescos de sangre total o frotis frescos procedentes de sangre anti coagulada
con EDTA. Los frotis más gruesos (p.ej., médula ósea) generalmente requieren tiempos de
tinción más largos.
PROCEDIMIENTO
1. Realizar en una placa un extendido de la muestra con el borde de otra placa. Dejar secar.
4. Tras 1 minuto, añadir un volumen igual de BUFFER GIORDANO PH: 7.0 PARA
WRIGHT, soplar para homogenizar hasta permitir que la mezcla adquiera un brillo verde
metálico.
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CONTROL DE CALIDAD
4. TINCIÓN DE FIELD
PRINCIPIO
MUESTRAS
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Se deben usar láminas nuevas y prelavadas con alcohol de 96% para quitar la grasa.
Se limpia el dedo del paciente con Alcohol, y deja secar. Se realiza la punción, la primera
gota se descarta y con la lámina se recoge una sola gota. (No se debe tocar la piel con la
lámina). Con la ayuda de otra lámina se hace un extendido delgado y corto.
PROCEDIMIENTO
CONTROL DE CALIDAD
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5. TINCIÓN DE ESPORAS
PROCEDIMIENTO
1. Sobre el portaobjetos con la preparación se echa verde malaquita que tiñe las células
de verde.
2. Luego se lava con agua destilada con lo que las células se quedan
4. Finalmente se usa la safranina para obtener bacterias de color rosa mientras que las
endosporas continúan con su color verde del verde malaquita.
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6. TINCIÓN NEGATIVA
Es el reverso del procedimiento de tinción usual: las células se dejan sin teñir pero se
colorea un cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las
células. La sustancia utilizada para la tinción negativa es un material opaco que no tiene
afinidad por los constituyentes celulares y que simplemente rodea las células, tal como la
tinta china (que es una suspensión de partículas de carbono coloidal) o la nigrosina (un
colorante negro insoluble en agua). La tinción negativa es un modo satisfactorio de
aumentar el contraste de las células en microscopia óptica, pero su máxima utilidad está en
revelar la presencia de cápsulas alrededor de las células bacterianas.
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Esta tinción sirve principalmente para clasificar micobacterias y actinomicetos, que tienen
un alto contenido en lípidos y en ácidos micólicos y que no pueden ser calificadas por la
tinción de Gram. Para empezar se hecha sobre el portaobjetos una mezcla de fucsina –
fenol, en la que la fucsina hace de colorante rosa y el fenol de mordiente. Las células se
tiñen de rosa, tanto las ácido – alcohol sensibles como las resistentes. Después se usa un
decolorante orgánico que hace que las bacterias ácido – alcohol sensibles se decoloren
mientras que las ácido – alcohol resistentes se quedan rosa. Como en la tinción de Gram se
utiliza un colorante de contraste que en este caso es el azul de metileno que tiñe las células
ácido – alcohol sensibles de color azul quedando las células ácido – alcohol resistentes de
color rosa.
PROCEDIMIENTO
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2. Extensión de la muestra
3. Fijación
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6. Enjuagar
7. Secado
8. Examen sistemático de la
extensión
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TECNICA DE LECTURA.
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INFORME DE RESULTADOS
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26. BIBLIOGRAFIA
http://analisisaproductoscarnicos.blogspot.com/2012/06/tinciones-utilizadas-en-
microbiologia.html
http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf
http://www.ihrdiagnostica.com/tecnicas/pdf/ColoracionWRIGHTv2.pdf
http://www.ihrdiagnostica.com/tecnicas/pdf/ColoracionFIELDv2.pdf
http://www.ihrdiagnostica.com/tecnicas/pdf/ColoracionGIEMSAv2.pdf
http://www.britanialab.com/productos/183_inserto_es.pdf
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