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Dra. M. L. Ortiz. Dep. de Microbiología y Parasitología.

Facultad de Farmacia
Tema 15

Recuento total de Microorganismos Psicotroficos


En términos generales psicrotrofo significa desarrollo a bajas temperaturas, por lo que en sentido
amplio son psicrotrofos todos los microorganismos que pueden crecer y multiplicarse en frió.

Los microorganismos psicrotróficos son los que toleran temperaturas, comprendidas entre 4 y
20ºC. Para ser más precisos, serían psicrotróficos los microorganismos que, aunque se multiplican
a temperaturas propias de refrigeración (O y + 6ºC), su temperatura óptima de crecimiento se
estima entre + 10 y +20ºC; y serían diferentes de los psicrófilos que son los que solo crecen a
temperaturas bajas y tienen su óptimo crecimiento a 0ºC o sus proximidades.

Gram - Gram +
- Achromobacter. - Bacillus.
- Pseudomonas, pigmentadas o no. - Corynebacterium.
-Flavobacterium. - Lactobacillus.
- Alcaligenes. - Streptococcus.
- Aeromonas. - Staphylococcus.
-Klebsiella. - Micrococcus.
-Enterobacter.
-Escherichia.
-Proteus.
-Hafnia.
- Serratia.
-Acinetobacter.
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Solución de Ringer 1/4
Cloruro sódico 9g
Recuento total de Microorganismos Psicotroficos Cloruro cálcico anhidro 0,42 g
Hidrógeno carbonato sódico 0,20 g
Agua destilada 1.000 ml

Suspensión madre 1:10 King FG


TW Peptona 20 g
Maltosa 10 g
Fosfato potásico 1,50 g
10 ml Sulfato magnésico 0,75 g
Cloruro sódico 5g
Agar 15 g
Agua destilada 1.000 ml

GSP (Pseudomonas y Aeromonas)


Glutamato sódico 10 g
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 Almidón hidrosoluble 20 g
Dihidrogenofosfato potásico 2 g
Sulfato de magnesio 0,50 g
Rojo fenol 0,36 g
Agar 12 g
Agua destilada 1.000 ml
Agar King FG o GSP

Se entiende por recuento total de microorganismos RECUENTO


psicotróficos, el número colonias no puntiformes que
se desarrollan a partir de 1g o 1ml de alimento U.F.C. = C x 1/D x 1/i
 
Recuento C= nº colonias contadas
D= dilución
I= inóculo
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Tema 16

Investigación y recuento de Vibrio parahaemolyticus

Vibrio parahaemolyticus es un microorganismos halófilo marino que


vive las aguas costeras, sedimentos y plancton, que produce una
gastroenteritis aguda al ingerir pescados o mariscos crudos,
insuficientemente cocidos o contaminados después de su preparación
culinaria. Es únicamente patógeno para el hombre. No se encuentra en
heces de individuos sanos, pero es abundante en las de enfermos
afectados de esta gastroenteritis.

Se desarrolla cuando la temperatura es superior a los 15ºC, por lo cual se


aísla del agua, preferentemente, en verano. Dada su presencia en el agua,
contamina peces, crustáceos y moluscos de costas y estuarios.

V. parahaemolyticus pertenece a la familia Vibrionaceae. Esta especie


está integrado por formas bacilares con tendencia al pleomorfismo, sin
esporas ni cápsulas. Son formas móviles, por un flagelo polar único.
Gram-. Anaerobias facultativas, y necesitan para su desarrollo
concentraciones de sal del 3%. El pH optimo es de 7,5 a 8,5. Crecen
entre 15-43 ºC, siendo la temperatura óptima de 37ºC.

Soportan concentraciones de cloruro sódico del 6 y 8% , pero no del


10%. En ausencia de cloruro sódico no crecen. Decarboxilan la lisina y
la ornitina. Fermentan el manitol y la arabinosa; no fermentan la
sacarosa ni la lactosa. No forman acetil-metil-carbinol.
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Tema 16
Investigación y recuento de Vibrio parahaemolyticus
SCB Caldo Sal Colistina
Método de Presencia - Ausencia TCBS Extracto de levadura 3g
Tiosulfato Ccitrato Bilis Sacarosa Triptona 10 g
Suspension madre 1:10 sol. salina Peptona de caseína 5g Cloruro sódico 20 g
3% Peptona de carne 5g Agua destilada 1.000 ml
10 ml Extracto de levadura 5g CSP Caldo Sal Polimixina
Citrato sódico 10 g Extracto de levadura 3g
100 ml caldo de enriquecimiento Tiosulfato sódico 10 g Peptona 10 g
a doble concentración: GSTB, Bilis de buey 5g Cloruro sódico 20 g
SCB o CSP Colato sódico 3g Polimixina B 250 U/ml
Sacarosa 20 g Agua destilada 1.000 ml
Incubación a 37ºC, 18-24h Cloruro sódico 10 g
GSTB
Con asa de siembra Citrato de hierro 1g
Glucosa Sal con Teepol
Azul de timol 0,04g
Extracto de carne 30 g
Azul de bromotimol 0,04 g
Agar T.C.B.S. Triptona 10 g
Agar 14 g
Incubación a 37ºC, 24h Agua destilada 1.000 ml
Cloruro sódico 30 g
Glucosa 5g
Colonias típicas Violeta de metilo 0,002 g
Colonias típicas, verdes Teepol 610 4 ml
Pruebas confirmativas con centro azul por no Agua destilada 1.000 ml
fermentan la sacarosa

PRUEBAS CONFIRMATIVAS
Pruebas confirmativas
ClNa 0% ClNa 6%ClNa 8% ClNa 10% 42ºC Indol+ Resistencia al compuesto
LDC+ V-P - V-P - Vibriostático O/129

Glucosa+
Sacarosa-
Lactosa-
SH2 -
Tolerancia a la Sal
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GSTB Tema 16
Investigación y recuento de Vibrio parahaemolyticus Glucosa Sal con Teepol
CSP Caldo Sal Polimixina
Extracto de carne 30 g
Técnica en medio líquido. NMP Triptona 10 g Extracto de levadura 3g
Cloruro sódico 30 g Peptona 10 g
Suspension madre 1:10 Sol. Salina 3% Glucosa 5g Cloruro sódico 20 g
Violeta de metilo 0,002 g Polimixina B 250 U/ml
1 ml 1 ml 1 ml Agua destilada 1.000 ml
Teepol 610 4 ml
Agua destilada 1.000 ml
SCB Caldo Sal Colistina TCBS
Extracto de levadura 3g Tiosulfato Ccitrato Bilis Sacarosa
Triptona 10 g Peptona de caseína 5g
Cloruro sódico 20 g Peptona de carne 5g
Agua destilada 1.000 ml Extracto de levadura 5g
10-1 10-2 10-3
Citrato sódico 10 g
Tiosulfato sódico 10 g
Bilis de buey 5g
Colato sódico 3g
Sacarosa 20 g
Cloruro sódico 10 g
Incubación a 37ºC, 18-24h
Citrato de hierro 1g
Tubos + : turbidez Azul de timol 0,04
Incubación a 37ºC, 24h Colonias típicas, verdes gAzul de bromotimol 0,04 g
Agar T.C.B.S.
con centro azul por no Agar 14 g
Colonias típicas fermentan la sacarosa Agua destilada 1.000 ml

Pruebas confirmativas
ClNa 0% ClNa 6%ClNa 8% ClNa 10% 42ºC Indol+ Resistencia al compuesto
LDC+ V-P - Vibriostático O/129

Glucosa+
Sacarosa-
Lactosa-
SH2 -
Tolerancia a la Sal
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Investigación y recuento de Vibrio parahaemolyticus


Diferenciación de Vibrio parahaemolyticus Reacción de Kanawaga Agar triptona soja tetrazolio
y Vibrio alginolyticus Agar triptona soja (TSA) 40 g
Sacarosa 20 g
Es una reacción de hemólisis específica de Cloruro sódico 25 g
V. parahaemoyticus sobre un medio Sales biliares 0,50 g
especial, que se relaciona con las cepas Cloruro Trifenil Tetrazolio 3 g
Agar Triptona Soja al CTT
patógenas. Agua destilada 1.000 ml

Agar Wagatsuma
A partir de un cultivo reciente del
microorganismo en TW + 3% ClNa, hacer
una picadura en varios puntos de una placa
Petri con medio Agar Wagatsuma. Incubar
37ºC, 18-20h
Agar Wagatsuma
Vibrio parahaemolyticus Extracto de levadura 5g
Colonias de color rojo por la reducción del Tripticasa 10g
TTC a Formazano, de color rojo Cloruro sódico 70g
Manitol 5g
Cristal violeta 0,001g
Agar 15 g
Agua destilada 1.000 ml

La reacción es positiva cuando aparece un


halo de hemólisis alrededor de los puntos
Vibrio alginolyticus de siembra de 5 mm de diámetro
Colonias blancas mas pequeñas