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Impreso el: mié. nov. 15 2023, 11:59:45 a. m.
(EST) Estado: Oficial Vigente al 15-nov-2023 DocId: GUID-481C30EA-8A49-4A77-9E81-D0CD7C533498_1_es-ES

Impreso por: Lorena Parra Fecha Oficial: Oficial desde antes del 2013 Tipo de Documento: Capítulos Generales @2023 USPC
No Distribuir DOI Ref: uke3t DOI: https://doi.org/10.31003/USPNF_M98810_01_02
1
á71ñ PRUEBAS DE ESTERILIDAD

◆
Algunas partes de este capítulo general han sido armonizadas con los textos correspondientes de la Farmacopea Europea
y/o la Farmacopea Japonesa. Las partes no armonizadas están marcadas con los símbolos (◆◆) para indicar esta situación.◆
Estos procedimientos farmacopeicos no se han diseñado para garantizar que una partida de un producto es estéril o ha sido
esterilizada. Esta garantía se consigue principalmente mediante la validación del proceso de esterilización o de los
procedimientos del procesamiento aséptico.
La prueba se aplica a sustancias, preparaciones o artículos cuya esterilidad es requerida por la Farmacopea. Sin embargo, un
resultado satisfactorio únicamente indica que no se han encontrado microorganismos contaminantes en la muestra examinada bajo
las condiciones de la prueba.
PRECAUCIONES CONTRA LA CONTAMINACIÓN MICROBIANA
La prueba de esterilidad se lleva a cabo bajo condiciones asépticas, por lo que, para lograr tales condiciones, el entorno de
la prueba debe adaptarse a la manera en que ésta se realice. Las precauciones para evitar la contaminación se deben tomar de
modo tal que no se afecte a ningún microorganismo que deba detectarse en esta prueba. Las condiciones de trabajo en las que
se efectúan las pruebas se monitorean regularmente mediante el muestreo adecuado del área de trabajo y la realización de
controles apropiados.
MEDIOS DE CULTIVO Y TEMPERATURAS DE INCUBACIÓN
l
Los medios para la prueba se pueden preparar según se indica a continuación o se pueden usar medios equivalentes
ia
disponibles comercialmente siempre y cuando cumplan con los requisitos de la Prueba de Promoción del Crecimiento de
Organismos Aerobios, Anaerobios y Hongos.
Se ha hallado que los medios de cultivo siguientes son adecuados para la prueba de esterilidad. El Medio Líquido de
Tioglicolato sirve principalmente para el cultivo de bacterias anaerobias. Sin embargo, también detecta bacterias aerobias. El
Medio de Digerido de Caseína y Soja es adecuado para el cultivo tanto de hongos como de bacterias aerobias.
fic
Medio Líquido de Tioglicolato
L-Cistina 0,5 g
Cloruro de Sodio 2,5 g
Dextrosa Monohidrato/Anhidra 5,5/5,0 g
Agar 0,75 g
O
Extracto de Levadura (soluble en agua) 5,0 g
Digerido Pancreático de Caseína 15,0 g
Tioglicolato de Sodio 0,5 g
o Ácido Tioglicólico 0,3 mL
Solución de Resazurina Sódica (1 en 1000), recién preparada 1,0 mL
Agua Purificada 1000 mL
El pH después de la esterilización es de 7,1 ± 0,2.

Mezclar la L-cistina, el agar, el cloruro de sodio, la dextrosa, el extracto de levadura y el digerido pancreático de caseína con
el agua purificada y calentar hasta su disolución. Disolver el tioglicolato de sodio o el ácido tioglicólico en la solución y, de ser
necesario, agregar hidróxido de sodio 1 N de modo que, después de la esterilización, la solución tenga un pH de 7,1 ± 0,2. Si
se requiere filtración, calentar nuevamente la solución sin llegar a ebullición y filtrar mientras está caliente a través de un papel
de filtro humedecido. Agregar la solución de resazurina sódica, mezclar y colocar el medio en recipientes adecuados, de forma
que la relación entre superficie y profundidad sea tal que no más de la mitad superior del medio haya experimentado un cambio
de color indicativo de la captación de oxígeno al final del período de incubación. Esterilizar usando un proceso validado. Si el
medio se almacena, mantenerlo a una temperatura entre 2° y 25° en un envase estéril y hermético. Si una porción mayor que
el tercio superior del medio ha adquirido un color rosado, el medio puede recuperarse una vez calentando los recipientes en
un baño de agua o en vapor fluente hasta que desaparezca el color rosado, y enfriar rápidamente tratando de evitar la entrada
de aire no estéril en el recipiente. No usar el medio por un periodo de almacenamiento más largo que el que ha sido validado.
El Medio Líquido de Tioglicolato debe incubarse a 30°–35°. Para productos que contienen un conservante mercurial que no
se pueden analizar mediante el método de filtración por membrana, se puede utilizar Medio Líquido de Tioglicolato incubado a
20°–25° en lugar de Medio de Digerido de Caseína y Soja, siempre y cuando haya sido validado según se indica en Prueba de
Promoción del Crecimiento de Organismos Aerobios, Anaerobios y Hongos. Es posible utilizar el siguiente medio de tioglicolato
alternativo para los casos en que se prescriba o justifique y autorice. Preparar una mezcla que tenga la misma composición que
la del Medio Líquido de Tioglicolato, pero omitiendo el agar y la solución de resazurina sódica. Esterilizar según se indica
anteriormente. El pH después de la esterilización es 7,1 ± 0,2. Calentar en un baño de agua antes de usar e incubar a 30°–35°
bajo condiciones anaeróbicas.
https://online.uspnf.com/uspnf/document/4_GUID-481C30EA-8A49-4A77-9E81-D0CD7C533498_1_es-ES 1/8
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Medio de Digerido de Caseína y Soja

Digerido Pancreático de Caseína 17,0 g
Digerido Papaínico de Harina de Soja 3,0 g
Cloruro de Sodio 5,0 g
Fosfato Dibásico de Potasio 2,5 g
Dextrosa Monohidrato/Anhidra 2,5/2,3 g
Agua Purificada 1000 mL
El pH después de la esterilización es de 7,3 ± 0,2.

Disolver los sólidos en el Agua Purificada, calentando ligeramente hasta lograr la disolución. Enfriar la solución a temperatura
ambiente y ajustar el pH con hidróxido de sodio 1 N de modo que, después de la esterilización, se obtenga un pH de 7,3 ± 0,2.
Filtrar el medio si fuera necesario para lograr una solución transparente, y verter en recipientes adecuados y esterilizar usando
un procedimiento validado. Almacenar a temperatura entre 2° y 25° en un recipiente estéril y bien cerrado, a menos que se use
inmediatamente. No usar el medio por un periodo de almacenamiento más largo que el que ha sido validado.
El Medio de Digerido de Caseína y Soja debe incubarse a 22,5 ± 2,5°.
◆
Medios para Penicilinas o Cefalosporinas
Cuando deban usarse medios de prueba de esterilidad en el método de Inoculación Directa del Medio de Cultivo que se indica
l
en Prueba de Esterilidad del Producto a Examinar, modificar la preparación del Medio Líquido de Tioglicolato y del Medio de Digerido
de Caseína y Soja según se indica a continuación. Transferir asépticamente a los recipientes de cada medio una cantidad de
penicilinas o cefalosporinas haya sido valorado previamente.

ia
β-lactamasa suficiente para inactivar la cantidad de antibiótico presente en la muestra de prueba. Determinar la cantidad de
β-lactamasa requerida para inactivar el antibiótico empleando una preparación de β-lactamasa cuyo poder inactivante de
[NOTA—Los medios complementados con β-lactamasa también pueden usarse en la prueba de filtración por membrana.]
Alternativamente (en un lugar completamente separado del usado para las pruebas de esterilidad), confirmar que se
fic
incorpora una cantidad adecuada de β-lactamasa en el medio, siguiendo cualquiera de los dos métodos indicados en Prueba
de Aptitud del Método, usando como desafío menos de 100 unidades formadoras de colonias (ufc) de Staphylococcus aureus (ver
Tabla 1). Debe observarse un crecimiento microbiano típico del cultivo inoculado como confirmación de que la
concentración de β-lactamasa es adecuada.◆
Tabla 1. Cepas de Microorganismos de Prueba Adecuados para Usar en la Prueba de Promoción del Crecimiento y en la
Prueba de Aptitud del Método
O
Bacterias Aerobias
Staphylococcus aureus ATCC 6538, CIP 4.83, NCTC 10788, NCIMB 9518, NBRC 13276
Bacillus subtilis ATCC 6633, CIP 52.62, NCIMB 8054, NBRC 3134
Pseudomonas aeruginosa◆1 ◆ ATCC 9027, NCIMB 8626, CIP 82.118, NBRC 13275
Bacteria anaerobia
Clostridium sporogenes◆2 ◆ ATCC 19404, CIP 79.3, NCTC 532 or ATCC 11437, NBRC 14293
Hongos
Candida albicans ATCC 10231, IP 48.72, NCPF 3179, NBRC 1594
Aspergillus brasiliensis(Aspergillus Niger) ATCC 16404, IP 1431.83, IMI 149007, NBRC 9455
◆1 Un microorganismo alternativo es Kocuria rhizophila (Micrococcus luteus) ATCC 9341.

◆
◆2 Una alternativa para Clostridium sporogenes, cuando se desea usar un microorganismo no formador de esporas, es Bacteroides vulgatus (ATCC 8482).
◆
Los medios usados cumplen con las pruebas siguientes, realizadas antes o en forma paralela, con la prueba sobre el producto a
examinar.
Esterilidad
Incubar porciones del medio durante 14 días. No se produce crecimiento de ningún organismo.
Prueba de Promoción del Crecimiento de Organismos Aerobios, Anaerobios y Hongos

Evaluar cada lote de medio listo para usar, y cada partida de medio preparado ya sea a partir de medio deshidratado o
mezclando los ingredientes. Las cepas adecuadas de microorganismos se indican en la Tabla 1.
Inocular porciones de Medio Líquido de Tioglicolato con un número pequeño (no más de 100 ufc) de los microorganismos
siguientes, usando una porción de medio distinta para cada una de las especies: Clostridium sporogenes, Pseudomonas
aeruginosa y Staphylococcus aureus. ◆Inocular porciones de medio de tioglicolato alternativo con un número pequeño (no más
3
de 100 ufc) de Clostridium sporogenes.◆ Inocular porciones de Medio de Digerido de Caseína y Soja con un número pequeño (no
más de 100 ufc) de los microorganismos siguientes, usando una porción de medio distinta para cada una de las especies:
Aspergillus brasiliensis, Bacillus subtilis y Candida albicans. Incubar durante no más de 3 días en el caso de bacterias y durante no
más de 5 días en el caso de hongos. Las técnicas de mantenimiento de cultivos de lote de siembra (sistemas de lote de siembra)
se usan para que los microorganismos viables empleados para la inoculación correspondan a no más de cinco pasajes desde el
lote de siembra maestro original.
Los medios son adecuados si se produce un crecimiento claramente visible de los microorganismos.
◆
LÍQUIDOS DE DILUCIÓN Y LAVADO PARA FILTRACIÓN POR MEMBRANA
Líquido A
PREPARACIÓN
Disolver 1 g de digerido péptico de tejido animal en agua para obtener 1 litro, filtrar o centrifugar para clarificar, si fuera
necesario, y ajustar a un pH de 7,1 ± 0,2. Transferir a envases y esterilizar empleando un proceso validado.
PREPARACIÓN PARA PENICILINAS O CEFALOSPORINAS

Agregar asépticamente a la Preparación anterior, si fuera necesario, una cantidad de β-lactamasa estéril suficiente para
inactivar cualquier actividad residual de antibióticos en las membranas después de haber filtrado la solución de la muestra de
prueba (ver Medios para Penicilinas o Cefalosporinas).
l
Líquido D
ia
Agregar 1 mL de polisorbato 80 por cada litro de Líquido A, y ajustar a un pH de 7,1 ± 0,2. Transferir a envases y esterilizar
empleando un proceso validado. Usar este líquido para artículos que contengan lecitina o aceite, o para dispositivos etiquetados
“para administración estéril”.
fic
Líquido K
Disolver 5,0 g de digerido péptico de tejido animal, 3,0 g de extracto de carne bovina y 10,0 g de polisorbato 80 en agua
para obtener 1 litro. Ajustar el pH para obtener, después de la esterilización, un pH de 6,9 ± 0,2. Transferir a envases y esterilizar
empleando un proceso validado.◆
O
PRUEBA DE APTITUD DEL MÉTODO
Llevar a cabo una prueba según se describe más adelante en Prueba de Esterilidad del Producto a Examinar usando exactamente
los mismos métodos, a excepción de las modificaciones siguientes.
Filtración por Membrana

Después de transferir a la membrana el contenido del envase o envases a analizar, agregar un inóculo de un número pequeño
de microorganismos viables (no más de 100 ufc) en la porción final del diluyente estéril usado para enjuagar el filtro.
Inoculación Directa
Después de transferir al medio de cultivo el contenido del envase o envases a analizar (para catgut y otros materiales de
sutura quirúrgica para uso veterinario: hebras), agregar al medio un inóculo de un número pequeño de microorganismos viables
(no más de 100 ufc).
En ambos casos, usar los mismos microorganismos que los mencionados anteriormente en Prueba de Promoción del
Crecimiento de Organismos Aerobios, Anaerobios y Hongos. Realizar una prueba de promoción del crecimiento como control
positivo. Incubar todos los recipientes que contienen medio durante no más de 5 días.
Si después de la incubación se obtiene un crecimiento claramente visible de microorganismos, comparable visualmente con
el del recipiente de control sin producto, el producto no posee actividad antimicrobiana en las condiciones de la prueba o tal
actividad se ha eliminado satisfactoriamente. La prueba de esterilidad puede entonces llevarse a cabo sin otras modificaciones.
Si no se obtiene un crecimiento claramente visible en presencia del producto a evaluar, comparable visualmente con el de
los recipientes de control sin producto, el producto posee actividad antimicrobiana que no se ha eliminado satisfactoriamente
en las condiciones de la prueba. Modificar las condiciones con el fin de eliminar la actividad antimicrobiana y repetir la Prueba
de Aptitud del Método.
Esta prueba de aptitud del método se lleva a cabo (a) cuando la prueba de esterilidad tiene que realizarse en un producto
nuevo; y (b) siempre que haya un cambio en las condiciones experimentales de la prueba. La prueba de aptitud del método
podrá llevarse a cabo simultáneamente con la Prueba de Esterilidad del Producto a Examinar.
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PRUEBA DE ESTERILIDAD DEL PRODUCTO A EXAMINAR

◆
Número de Artículos a Evaluar
A menos que se especifique algo diferente en otra parte de este capítulo o en la monografía individual, evaluar el número
de artículos especificado en la Tabla 3. Si el contenido de cada artículo está en cantidad suficiente, (ver la Tabla 2) se puede
dividir para agregarlo a cada uno de los medios especificados en porciones iguales y apropiadas.
[NOTA—Realizar las pruebas de esterilidad empleando dos o más de los medios especificados.]
Si cada artículo no contiene las cantidades suficientes para cada medio, usar el doble del número de artículos indicado en la
Tabla 3.◆
Tabla 2. Cantidad Mínima a Usar para cada Medio

Cantidad Mínima a Usar
Cantidad por Envase (a menos que se justifique y autorice algo diferente)
Líquidos
Menos de 1 mL El contenido total de cada envase
1–40 mL La mitad del contenido de cada envase, pero no menos de 1 mL
Más de 40 mL y no más de 100 mL 20 mL
Más de 100 mL 10% del contenido del envase, pero no menos de 20 mL
l
Líquidos antibióticos 1 mL
Preparaciones insolubles, cremas y ungüentos que deben suspenderse o emulsio- Usar el contenido de cada envase para suministrar no menos de 200 mg
narse
Sólidos
Menos de 50 mg
50 mg o más, pero menos de 300 mg

ia El contenido total de cada envase
La mitad del contenido de cada envase, pero no menos de 50 mg

fic
300 mg–5 g 150 mg
Más de 5 g 500 mg
Catgut y otros materiales de sutura quirúrgica para uso veterinario 3 secciones de una hebra (cada una de 30 cm de longitud)
◆
Apósito quirúrgico/algodón/gasa (en envases) 100 mg por envase
Material de sutura y otro material de un solo uso envasado individualmente El dispositivo completo
O
Otros dispositivos médicos El dispositivo completo, cortado en piezas o desmontado◆
Tabla 3. Número Mínimo de Artículos a Evaluar en Relación con el Número de Artículos en la Partida
Número Mínimo de Artículos a Analizar para cada Medio
Número de Artículos en la Partida* (a menos que se justifique y autorice algo diferente)**
Preparaciones parenterales
No más de 100 envases 10% o 4 envases, lo que resulte mayor
Más de 100 pero no más de 500 envases 10 envases
Más de 500 envases 2% o 20 envases, lo que resulte menor

◆
Para preparaciones parenterales de gran volumen 2% o 10 envases, lo que resulte menor
Antibióticos sólidos
Envases a granel para farmacias (<5 g) 20 envases
Envases a granel para farmacias (≥5 g) 6 envases

Graneles y mezclas Ver Productos sólidos a granel◆
Preparaciones oftálmicas y otras preparaciones no inyectables
No más de 200 envases 5% o 2 envases, lo que resulte mayor
Más de 200 envases 10 envases
Si el producto se presenta en la forma de envases monodosis, aplicar el esquema

mostrado anteriormente para preparaciones para uso parenteral.
Catgut y otros materiales de sutura quirúrgica para uso veterinario 2% o 5 envases, lo que resulte mayor, hasta un total máximo de 20 envases
◆
No más de 100 artículos 10% o 4 artículos, lo que resulte mayor
Más de 100, pero no más de 500 artículos 10 artículos
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Tabla 3. Número Mínimo de Artículos a Evaluar en Relación con el Número de Artículos en la Partida (continuación)
Número Mínimo de Artículos a Analizar para cada Medio
Número de Artículos en la Partida* (a menos que se justifique y autorice algo diferente)**
Más de 500 artículos 2% o 20 artículos, lo que resulte menor◆
Productos sólidos a granel
Hasta 4 envases Cada envase
Más de 4 envases, pero no más de 50 envases 20% o 4 envases, lo que resulte mayor
Más de 50 envases 2% o 10 envases, lo que resulte mayor
* Si no se conoce el tamaño de la partida, usar el número máximo de artículos prescritos.

** Si el contenido de un envase es suficiente para inocular dos medios, esta columna da el número de envases necesarios para los dos medios juntos.
La prueba puede llevarse a cabo mediante la técnica de Filtración por Membrana o por Inoculación Directa del Medio de
Cultivo con el producto a examinar. Se incluyen controles negativos adecuados. La técnica de filtración por membrana se usa
cuando la naturaleza del producto lo permite, es decir, para preparaciones acuosas filtrables, para preparaciones alcohólicas o
aceitosas y para preparaciones miscibles con, o solubles en, disolventes acuosos o aceitosos, siempre que dichos disolventes no
posean un efecto antimicrobiano en las condiciones de la prueba.
Filtración por Membrana

Usar filtros de membrana con un tamaño nominal de poro no mayor de 0,45 µm, cuya eficacia para retener microorganismos
l
haya sido establecida. Por ejemplo, se usan filtros de nitrato de celulosa para soluciones acuosas, oleosas y con bajo contenido
alcohólico; y se usan filtros de acetato de celulosa, por ejemplo, para soluciones con alto contenido alcohólico. Es posible que
ia
para ciertos productos (p. ej., antibióticos) se necesiten filtros especialmente adaptados.
La técnica descrita más adelante supone que se usarán membranas de aproximadamente 50 mm de diámetro. Si se usan
filtros de un diámetro diferente, los volúmenes de las diluciones y los lavados deben ajustarse según corresponda. El aparato
de filtración y la membrana se esterilizan usando técnicas adecuadas. El aparato se diseña de tal modo que la solución a examinar
se pueda introducir y filtrar en condiciones asépticas: permite retirar asépticamente la membrana para transferirla al medio de
fic
cultivo, o es adecuado para llevar a cabo la incubación dentro del aparato mismo después de agregarle el medio.
SOLUCIONES ACUOSAS
Si corresponde, transferir una pequeña cantidad de un diluyente estéril adecuado, como por ejemplo el ◆Líquido A (ver
Líquidos de Dilución y Lavado para Filtración por Membrana),◆ a la membrana en el aparato y filtrar. El diluyente puede contener
sustancias neutralizantes adecuadas y/o sustancias inactivantes apropiadas, por ejemplo, en el caso de los antibióticos.
O
Transferir a la membrana o membranas el contenido del envase o envases a analizar, si fuera necesario, después de diluirlo
hasta el volumen usado en la Prueba de Aptitud del Método con el diluyente estéril elegido, pero usando no menos de las
cantidades del producto a examinar indicadas en las Tablas 2 y 3. Filtrar inmediatamente. Si el producto posee propiedades
antimicrobianas, lavar la membrana no menos de tres veces, filtrando en cada lavado el volumen del diluyente estéril elegido
usado en la Prueba de Aptitud del Método. El ciclo de lavado no debe exceder de cinco lavados con 100 mL por filtro, cada uno,
incluso si durante la prueba de aptitud del método se ha demostrado que tal ciclo no elimina por completo la actividad
antimicrobiana. Transferir la membrana completa al medio de cultivo o cortarla asépticamente en dos partes iguales y transferir
cada mitad a sendos medios adecuados. Usar el mismo volumen de cada medio que el empleado en la Prueba de Aptitud del
Método. Alternativamente, transferir el medio a la membrana en el aparato. Incubar los medios durante no menos de 14 días.
SÓLIDOS SOLUBLES
Usar para cada medio no menos de la cantidad de producto indicada en las Tablas 2 y 3 disuelto en un disolvente adecuado,
como por ejemplo el disolvente suministrado con la preparación, Agua Estéril para Inyección, solución salina estéril o una
solución estéril adecuada como por ejemplo ◆Líquido A (Líquidos de Dilución y Lavado para Filtración por Membrana),◆ y proceder
con la prueba según lo indicado anteriormente para Soluciones Acuosas usando una membrana adecuada para el disolvente
elegido.
ACEITES Y SOLUCIONES OLEOSAS

Usar para cada medio no menos de la cantidad de producto indicada en las Tablas 2 y 3. Los aceites y las soluciones oleosas
de viscosidad lo suficientemente baja se pueden filtrar sin dilución a través de una membrana seca. Los aceites viscosos se
pueden diluir según sea necesario con un diluyente estéril adecuado, como por ejemplo el miristato de isopropilo, que ha
demostrado no tener actividad antimicrobiana en las condiciones de la prueba. Dejar que el aceite penetre la membrana por
su propio peso y, a continuación, filtrar, aplicando presión o succión gradualmente. Lavar la membrana al menos tres veces
filtrando cada vez aproximadamente 100 mL de una solución estéril adecuada, como por ejemplo el ◆Líquido A (ver Líquidos de
Dilución y Lavado para Filtración por Membrana),◆ que contenga un agente emulsionante adecuado a una concentración que
haya demostrado ser apropiada en la Prueba de Aptitud del Método, como por ejemplo polisorbato 80 a una concentración de
10 g por L ◆(Líquido K)◆. Transferir la membrana o membranas al medio o medios de cultivo, o viceversa, según lo descrito
anteriormente para Soluciones Acuosas e incubar a las mismas temperaturas y durante los mismos tiempos.
6
UNGÜENTOS Y CREMAS
Usar para cada medio no menos de las cantidades de producto indicadas en las Tablas 2 y 3. Los ungüentos en base grasa y
las emulsiones del tipo agua en aceite pueden diluirse al 1% en miristato de isopropilo según lo descrito anteriormente,
calentando si fuera necesario a no más de 40°. Es probable que en casos excepcionales se requiera calentar hasta no más de
44°. Filtrar tan rápidamente como sea posible y proceder según lo descrito anteriormente para Aceites y Soluciones Oleosas.
◆
JERINGAS PRELLENADAS
Para jeringas prellenadas sin agujas estériles acopladas, expulsar el contenido de cada jeringa en uno o dos embudos para
filtración por membrana individuales o en recipientes individuales antes de la transferencia. Si se adjunta una aguja estéril,
expulsar directamente el contenido de la jeringa tal como se ha indicado anteriormente y proceder según lo descrito para
Soluciones Acuosas. Evaluar la esterilidad de la aguja mediante el procedimiento de Inoculación Directa que se indica en Prueba
de Aptitud del Método.
SÓLIDOS PARA INYECCIÓN DISTINTOS DE ANTIBIÓTICOS

Reconstituir los artículos de prueba según las instrucciones de la etiqueta y proceder según lo indicado para Soluciones
Acuosas o Aceites y Soluciones Oleosas, lo que corresponda aplicar.
[NOTA—Si fuera necesario, se puede agregar diluyente en exceso para facilitar la reconstitución y filtración del artículo de
prueba reconstituido.]
ANTIBIÓTICOS SÓLIDOS PARA INYECCIÓN
l
Envases a Granel para Farmacias, <5 g—Tomar una cantidad aproximada a 300 mg de sólido de cada uno de 20 envases,
ia
transferir asépticamente a un matraz Erlenmeyer estéril de 500 mL, disolver en aproximadamente 200 mL de Líquido A (ver
Líquidos de Dilución y Lavado para Filtración por Membrana) y mezclar; o bien, reconstituir según lo indicado en la etiqueta, cada
uno de 20 envases y transferir una cantidad de líquido o suspensión que equivalga aproximadamente a 300 mg de sólido a un
matraz Erlenmeyer estéril de 500 mL, disolver en aproximadamente 200 mL de Líquido A y mezclar. Proceder según lo
indicado para Soluciones Acuosas o para Aceites y Soluciones Oleosas, lo que corresponda aplicar.
Envases a Granel para Farmacias, ≥5 g—Tomar aproximadamente 1 g de sólido de cada uno de 6 envases, transferir
fic
asépticamente a un matraz Erlenmeyer estéril de 500 mL, disolver en aproximadamente 200 mL de Líquido A y mezclar; o bien,
reconstituir según lo indicado en la etiqueta, cada uno de 6 envases y transferir una cantidad de líquido que equivalga
aproximadamente a 1 g de sólido a un matraz Erlenmeyer estéril de 500 mL, disolver en aproximadamente 200 mL de Líquido
A y mezclar. Proceder según lo indicado para Soluciones Acuosas.
ANTIBIÓTICOS SÓLIDOS, GRANELES Y MEZCLAS

O
Retirar asépticamente una cantidad suficiente de sólido de la cantidad adecuada de envases (ver Tabla 2), mezclar hasta
obtener una mezcla que equivalga aproximadamente a 6 g de sólido y transferir a un matraz Erlenmeyer estéril de 500 mL.
Disolver en aproximadamente 200 mL de Líquido A y mezclar. Proceder según lo indicado para Soluciones Acuosas.
PRODUCTOS ESTÉRILES EN AEROSOL

Para productos líquidos en forma de aerosol presurizado, congelar los envases en una mezcla de hielo seco y alcohol por lo
menos a –20° durante aproximadamente 1 hora. Si es posible, dejar que el propelente escape antes de abrir asépticamente el
envase y transferir el contenido a un recipiente de combinación estéril. Agregar 100 mL de Líquido D al recipiente de
combinación y mezclar suavemente. Proceder según lo indicado para Soluciones Acuosas o para Aceites y Soluciones Oleosas,
según corresponda.
DISPOSITIVOS CON GUÍAS QUE DECLARAN SER ESTÉRILES

Pasar asépticamente un volumen de Líquido D no inferior a 10 veces el volumen de las guías a través de cada dispositivo
analizado. Recoger los líquidos en un recipiente estéril adecuado y proceder según lo indicado para Soluciones Acuosas o Aceites y
Soluciones Oleosas, según corresponda.
En el caso de jeringas vacías estériles, extraer diluyente estéril hacia el émbolo a través de la aguja estéril, si está acoplada, o
a través de una aguja estéril acoplada para el propósito de la prueba y expulsar el contenido en un recipiente de combinación
estéril. Proceder según lo indicado anteriormente.◆
Inoculación Directa del Medio de Cultivo

Transferir directamente en el medio de cultivo la cantidad de la preparación a examinar que se indica en las Tablas 2 y 3, de
modo que el volumen del producto no sea mayor que el 10% del volumen del medio, a menos que se indique algo diferente.
Si el producto a examinar posee actividad antimicrobiana, realizar la prueba después de neutralizar esta actividad con una
sustancia neutralizante adecuada o mediante su dilución en una cantidad suficiente de medio de cultivo. Cuando sea necesario
usar un volumen grande del producto, probablemente sea preferible usar un medio de cultivo concentrado preparado de tal
modo que se tenga en cuenta la dilución subsiguiente. Cuando corresponda, el medio concentrado podrá agregarse
directamente al producto en su envase.
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LÍQUIDOS OLEOSOS
Usar medios a los que se les haya agregado un agente emulsionante apropiado a una concentración que haya demostrado
ser adecuada en la Prueba de Aptitud del Método, por ejemplo polisorbato 80 a una concentración de 10 g por L.
UNGÜENTOS Y CREMAS
Realizar una dilución de aproximadamente 1 en 10, emulsionando con el agente elegido en un diluyente estéril adecuado,
como por ejemplo el ◆Líquido A (ver Líquidos de Dilución y Lavado para Filtración por Membrana).◆ Transferir el producto diluido a
un medio que no contenga agente emulsionante.
Incubar los medios inoculados durante no menos de 14 días. Observar los cultivos varias veces durante el período de
incubación. Agitar suavemente los cultivos que contengan productos oleosos todos los días. Sin embargo, cuando se use Medio
Líquido de Tioglicolato para detectar microorganismos anaerobios, agitar o mezclar mínimamente con el fin de mantener las
condiciones anaerobias.
CATGUT Y OTROS MATERIALES DE SUTURA QUIRÚRGICA PARA USO VETERINARIO

Usar para cada medio no menos de las cantidades del producto indicadas en las Tablas 2 y 3. Abrir el envase sellado teniendo
en cuenta las precauciones de asepsia y retirar tres secciones de la hebra para cada medio de cultivo. Llevar a cabo la prueba
sobre las tres secciones, cada una de 30 cm de longitud, que se han cortado al comienzo, medio y final de la hebra. Usar hebras
completas de envases recién abiertos. Transferir cada una de las secciones de la hebra a los medios elegidos. Usar suficiente
medio para cubrir adecuadamente el material a analizar (de 20 mL a 150 mL).
◆
l
SÓLIDOS
ia
Transferir una cantidad de producto en forma de sólido seco (o preparar una suspensión del producto agregando diluyente
estéril al envase primario) correspondiente a no menos de la cantidad indicada en las Tablas 2 y 3. Transferir el material así
obtenido a 200 mL de Medio Líquido de Tioglicolato y mezclar. Del mismo modo, transferir la misma cantidad a 200 mL de
Medio de Digerido de Caseína y Soja y mezclar. Proceder según lo indicado anteriormente.
ALGODÓN PURIFICADO, GASA, APÓSITOS QUIRÚRGICOS Y ARTÍCULOS RELACIONADOS

fic
De cada envase de algodón, vendas de gasa enrollada o apósitos quirúrgicos grandes que se deba evaluar, extraer
asépticamente dos o más porciones de 100 a 500 mg cada una de la parte más interna de la muestra. Para materiales de un
solo uso envasados individualmente, extraer asépticamente todo el artículo. Sumergir las porciones o el artículo en cada medio y
proceder según lo indicado anteriormente.
DISPOSITIVOS ESTÉRILES
O
Los artículos pueden sumergirse ensamblados o desmontados. Para asegurar que los conductos del dispositivo también estén
en contacto con los medios, sumergir la cantidad adecuada de unidades en un volumen de medio suficiente para sumergir
completamente el dispositivo y proceder según lo indicado anteriormente. Para dispositivos extremadamente grandes, sumergir
aquellas porciones del dispositivo que han de entrar en contacto con el paciente en un volumen de medio suficiente para lograr
la inmersión completa de esas porciones.
Para catéteres en los que se requiere la esterilidad del lumen interno y de la parte externa, cortarlos en piezas de modo que
el medio entre en contacto con todo el lumen, o llenar el lumen con medio y sumergir la unidad intacta.◆
OBSERVACIÓN E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
A intervalos durante el período de incubación, y al momento de su finalización, examinar los medios en busca de evidencias
macroscópicas de crecimiento microbiano. Si el material que se está evaluando enturbia el medio de modo que no puede
determinarse fácilmente la presencia o ausencia de crecimiento microbiano mediante examen visual, transferir porciones de
medio (no menores de 1 mL cada una) 14 días después de comenzada la incubación, a recipientes nuevos con el mismo medio
y, a continuación, incubar el recipiente original y el de transferencia durante no menos de 4 días.
Si no se hallan evidencias de crecimiento microbiano, el producto examinado cumple con la prueba de esterilidad. Si se
hallan pruebas de crecimiento microbiano, el producto examinado no cumple con la prueba de esterilidad, a menos que pueda
demostrarse claramente que la prueba resultó inválida por causas no relacionadas con el producto examinado. La prueba puede
considerarse inválida solo si se cumplen una o más de las siguientes condiciones:
1. Los datos de monitoreo microbiológico de las instalaciones para pruebas de esterilidad demuestran una falla.
2. Una revisión del procedimiento analítico usado durante la prueba en cuestión revela un error.
3. Se halla crecimiento microbiano en los controles negativos.
4. Después de determinar la identidad de los microorganismos aislados de la prueba, el crecimiento de esta especie (o
especies) puede atribuirse de manera inequívoca a errores con respecto al material o a la técnica usados al realizar el
procedimiento de la prueba de esterilidad.
Si la prueba se declara inválida, se repetirá con el mismo número de unidades de la prueba original. Si no se hallan pruebas
de crecimiento microbiano en la prueba repetida, el producto examinado cumple con la prueba de esterilidad. Si se hallan
pruebas de crecimiento microbiano en la prueba repetida, el producto examinado no cumple con la prueba de esterilidad.
8
APLICACIÓN DE LA PRUEBA A PREPARACIONES PARENTERALES, OFTÁLMICAS Y OTRAS

PREPARACIONES NO INYECTABLES QUE DEBEN CUMPLIR CON LA PRUEBA DE ESTERILIDAD
Al usar la técnica de filtración por membrana, utilizar, siempre que sea posible, el contenido total del envase, pero no menos
de las cantidades indicadas en las Tablas 2, diluyendo cuando sea necesario hasta aproximadamente 100 mL con una solución
estéril adecuada, como por ejemplo el ◆Líquido A (ver Líquidos de Dilución y Lavado para Filtración por Membrana).◆
Al usar la técnica de inoculación directa de medios, usar las cantidades que se muestran en la Tabla 2, a menos que se
justifique y autorice algo diferente. Las pruebas de esterilidad bacteriana y fúngica se llevan a cabo sobre la misma muestra del
producto a examinar. Cuando el volumen o la cantidad de un único envase sea insuficiente para llevar a cabo las pruebas, se
usará el contenido de dos o más envases para inocular los distintos medios.
NÚMERO MÍNIMO DE ARTÍCULOS A ANALIZAR
En la Tabla 3 se indica el número mínimo de artículos a analizar en relación con el tamaño de la partida.
l
ia
fic
O

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Impreso el: mié. nov. 15 2023, 11:59:45 a. m.

(EST) Estado: Oficial Vigente al 15-nov-2023 DocId: GUID-481C30EA-8A49-4A77-9E81-D0CD7C533498_1_es-ES

á71ñ PRUEBAS DE ESTERILIDAD

PRECAUCIONES CONTRA LA CONTAMINACIÓN MICROBIANA

MEDIOS DE CULTIVO Y TEMPERATURAS DE INCUBACIÓN

Cloruro de Sodio 2,5 g

Dextrosa Monohidrato/Anhidra 5,5/5,0 g

Extracto de Levadura (soluble en agua) 5,0 g

Digerido Pancreático de Caseína 15,0 g

Tioglicolato de Sodio 0,5 g

o Ácido Tioglicólico 0,3 mL

Solución de Resazurina Sódica (1 en 1000), recién preparada 1,0 mL

Agua Purificada 1000 mL

El pH después de la esterilización es de 7,1 ± 0,2.

Medio de Digerido de Caseína y Soja

Digerido Papaínico de Harina de Soja 3,0 g

Cloruro de Sodio 5,0 g

Fosfato Dibásico de Potasio 2,5 g

Dextrosa Monohidrato/Anhidra 2,5/2,3 g

Agua Purificada 1000 mL

El pH después de la esterilización es de 7,3 ± 0,2.

penicilinas o cefalosporinas haya sido valorado previamente.

Candida albicans ATCC 10231, IP 48.72, NCPF 3179, NBRC 1594

◆1 Un microorganismo alternativo es Kocuria rhizophila (Micrococcus luteus) ATCC 9341.

Prueba de Promoción del Crecimiento de Organismos Aerobios, Anaerobios y Hongos

PREPARACIÓN PARA PENICILINAS O CEFALOSPORINAS

PRUEBA DE APTITUD DEL MÉTODO

Filtración por Membrana

PRUEBA DE ESTERILIDAD DEL PRODUCTO A EXAMINAR

Tabla 2. Cantidad Mínima a Usar para cada Medio

Menos de 1 mL El contenido total de cada envase

1–40 mL La mitad del contenido de cada envase, pero no menos de 1 mL

Más de 40 mL y no más de 100 mL 20 mL

Más de 100 mL 10% del contenido del envase, pero no menos de 20 mL

50 mg o más, pero menos de 300 mg

La mitad del contenido de cada envase, pero no menos de 50 mg

Otros dispositivos médicos El dispositivo completo, cortado en piezas o desmontado◆

No más de 100 envases 10% o 4 envases, lo que resulte mayor

Más de 100 pero no más de 500 envases 10 envases

Más de 500 envases 2% o 20 envases, lo que resulte menor

Envases a granel para farmacias (<5 g) 20 envases

Envases a granel para farmacias (≥5 g) 6 envases

Preparaciones oftálmicas y otras preparaciones no inyectables

No más de 200 envases 5% o 2 envases, lo que resulte mayor

Más de 200 envases 10 envases

Si el producto se presenta en la forma de envases monodosis, aplicar el esquema

Más de 100, pero no más de 500 artículos 10 artículos

Productos sólidos a granel

Hasta 4 envases Cada envase

Más de 50 envases 2% o 10 envases, lo que resulte mayor

* Si no se conoce el tamaño de la partida, usar el número máximo de artículos prescritos.

Filtración por Membrana

ACEITES Y SOLUCIONES OLEOSAS

SÓLIDOS PARA INYECCIÓN DISTINTOS DE ANTIBIÓTICOS

ANTIBIÓTICOS SÓLIDOS PARA INYECCIÓN

ANTIBIÓTICOS SÓLIDOS, GRANELES Y MEZCLAS

PRODUCTOS ESTÉRILES EN AEROSOL

DISPOSITIVOS CON GUÍAS QUE DECLARAN SER ESTÉRILES

Inoculación Directa del Medio de Cultivo

CATGUT Y OTROS MATERIALES DE SUTURA QUIRÚRGICA PARA USO VETERINARIO

ALGODÓN PURIFICADO, GASA, APÓSITOS QUIRÚRGICOS Y ARTÍCULOS RELACIONADOS

OBSERVACIÓN E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

APLICACIÓN DE LA PRUEBA A PREPARACIONES PARENTERALES, OFTÁLMICAS Y OTRAS