NUTRICIÓN MICROBIANA

Suministrar a las células los ingredientes químicos y

fuentes de energía que requieren para sintetizar los
monómeros de sus biomoléculas.

Escherichia coli
 Macronutrientes:Se requieren en grandes
cantidades: C,H,O,N,S,P y otros como Na,K, Ca,
Mg , Fe.
Utilizados en la síntesis de
macromoléculas,esenciales en la estabilización
Nutrientes de la estructura y transporte de nutrientes.
Micronutrientes: Se requieren en pequeñas
concentraciones:
Cr,Co,Cu,Mn,Mo,Ni,Se,W,V,Zn
Utilizados en general como cofactores de
enzimas biosintéticas

Compuestos orgánicos necesarios en

Factores de
pequeñas cantidades y solo por algunas
crecimiento células
Clasificación de los organismos por sus
requerimientos de Factores de Crecimiento

Protótrofos:
No requieren factores de crecimiento.
Pueden sintetizar lo que necesitan a partir de los nutrientes
del medio

Auxótrofos:
Requieren factores de crecimiento:
Vitaminas (cofactores de enzimas)
Amino ácidos
Purinas y pirimidinas
Los micro y macronutrientes así como los factores de crecimiento
requeridos para favorecer la propagación de los microorganismos,
deben ser proporcionados en soluciones nutritivas llamadas:

MEDIOS DE CULTIVO

Los medios de cultivo son mezclas de sustancias orgánicas e

inorgánicas que proporcionan los nutrientes necesarios para que
los microorganismos lleven a cabo sus funciones vitales.
MEDIOS DE CULTIVO

Los medios de cultivo de manera

comercial, se presentan: en polvo ó
granulado para disolver y esterilizar ó
bien preparados listos para utilizarse
CLASIFICACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

Complejos ó naturales:No se conoce su

composición química exacta
Por su
composición
Simples,definidos ó sintéticos:Se conoce
su composición química exacta
MEDIOS SIMPLES Ó SINTÉTICOS

Medio de Ashbey
Manitol 15 gr
Sulfato de magnesio 0.2gr
Fosfato dibásico de potasio 0.2 gr.
Cloruro de calcio 0.2 gr
Sol. Acuosa de Trióxido 0.05 ml
de Molibdeno al 10%
Sol.de Cloruro 0.05 ml
férrico 10%
Agua 1000 ml
MEDIOS SIMPLES Ó SINTÉTICOS

Medio Mineral
Nitrato de amonio 15 gr
Sulfato de magnesio 2gr
Fosfato dibásico de potasio 0.2 gr.
Cloruro de calcio 0.1 gr
Agua de la llave 1000 ml
CLASIFICACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

Sólidos: Solidificados con el carbohidrato

complejo: agar agar (1.5-2%) extraído de
algas marinas del género Gellidium. Útiles
para separar microorganismos y favorecer
el desarrollo de colonias aisladas

Líquidos: (Caldos) Útiles para enriquecer

Por su estado y propagar cultivos, rehidratar cepas y
físico hacer diluciones

Semisólidos: (Agar 0.4-0.5%) Usados

para determinar la movilidad de loas
microorganismos
 AGAR-AGAR

Gellidium corneum
(Agarofita)

Agarobiosa es un disacárido compuesto de D-galactosa y 3,6 anhidro L-

galactopiranosa. La agaropectina es una mezcla heterogénea moléculas
que se encuentran en pequeñas cantidades, formadas por unidades
alternadas de D-galactosa y L-galactosa fuertemente modificadas con
grupos polares, tales como el sufato y piruvato
Rafael Armisen and Fernando Galatas. "Chapter 1 - Production, Properties and Uses of Agar". Fao.org.
 CLASIFICACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

Selectivos: Favorecen el desarrollo de un tipo de

microorganismo y suprimen el crecimiento de otros.

Enriquecimiento: Favorecen la multiplicación,

enriquecimiento ó aumento de un grupo de
microorganismos .
Enriquecidos: Permiten el desarrollo de heterótrofos
exigentes y son muy ricos en nutrientes
Por su uso
Diferenciales: Contienen sustancias nutritivas ó
indicadoras que ponen de manifiesto alguna actividad
metabólica característica de un microorganismo.
De mantenimiento: Preservan satisfactoriamente la
viabilidad de las células de un cultivo
Enriquecimiento: Favorecen la multiplicación,
enriquecimiento ó aumento de un grupo de microorganismos .

Ej.Caldo Selenito-Cistina y Caldo Tetrationato

Estos medios permiten enriquecer

la población de patógenos
intestinales como Salmonella sp.y
Shigella sp.de los coprocultivos
mientras se inhibe a la microbiota
normal con el selenito de sodio y el
tetrationato de sodio
respectivamente.
CALDO SELENITO CISTINA
Peptona de caseína 5 gr
L(-) Cistina 0.01 gr
Lactosa 4 gr
Fosfato de sodio 10 gr
Selenito de sodio 4 gr
BASE CALDO TETRATIONATO
Agua 1000 ml
Peptona de caseína 2.5 gr
Peptona de carne 2.5 gr
Mezcla de sales Biliares 1 gr
Carbonato de calcio 10 gr
Tiosulfato de sodio 30 gr
Agua 1000 ml
Se agrega I2/KI para formar el tetrationato
de sodio.

Estos medios NO SE ESTERILIZAN

Enriquecidos: Permiten el desarrollo de heterótrofos
exigentes y son muy ricos en nutrientes

Agar sangre, Agar

chocolate
Extracto de corazón 10 gr
Triptosa 10 gr
Cloruro de sodio 5 gr
Agar 15 gr
Sangre de carnero al 5%
(Se añade en condiciones
estériles)
Agua 1000 ml.
Medios diferenciales y selectivos
Para: Salmonella typhi

Sulfito de E. Carne 5 gr, Peptona carne 10 gr, D (+)Glucosa 5 gr, Sulfato

ferroso 0.3 gr, Fosfato dibásico de sodio 4 gr, Sulfito de Bismuto 8
Bismuto gr, Verde brillante 0.025 gr, Agar 15 gr, Agua 1000 ml

E. Levadura 3 gr, Cloruro de sodio 5 gr, Xilosa 3.5 gr, Lactosa 7.5 gr, Lisina 5 gr,
XLD Citrato de fierro y amonio 0.8 gr, Desoxicolato de sodio 2.5 gr, Tiosulfato de
sodio 6.8 gr, Rojo fenol 0.08 gr,Agar 13.5 gr, Agua 1000 ml.

Hecktoen Proteosa peptona 12 gr, Cloruro de sodio 5 gr, E. Levadura 3 gr, Sacarosa 12 gr,
Lactosa 12 gr Salicina 2 gr,Tiosulfato de sodio 5 gr,Citrato de fierro y amonio 1.5
gr,Mezcla de sales biliares 9 gr,Azul de bromotimol 0.064 gr y fucsina ácida 0.04
gr, Agar 13.5 gr, Agua 1000 ml.
AGAR SS
AGAR TERGITOL 7

http/himedialabs.com

http/carlroth.com
 Agar Mac Conkey

Colonias Lactosa (-) Colonias Lactosa (+)

Peptona de caseína 17 gr, Peptona de carne 3 gr, Lactosa 10 gr,

Cloruro de sodio 5 gr,Sales biliares 1.5 gr, Cristal violeta 0.001 gr,
Rojo neutro 0.03 gr,Agar 15 gr , Agua 1000 ml.
Agar
Mac
Conkey
Agar EMB

Peptona de caseína 10 gr, Fosfato monobásico de potasio 2 gr, Lactosa 10 gr,Sacarosa

5 gr, Azul de metileno 0.065gr,Eosina Y amarillenta 0.4 gr.

Salmonella, Shigella Lac (-),Sac(-)

Proteus,Citrobacter,Aeromonas (Lac -), Sac (+)
E. coli: Lac(+), Sac (+)
Agar EMB
 E. Carne 5 gr , peptona de carne 5 gr, Citrato de sodio
Agar Salmonella - 10 gr, Citrato de fierro, Tiosulfato de sodio 8.5
gr.,Lactosa 10 gr., Bilis desecada de buey 8.5 gr. Verde
Shigella brillante 0.0003 gr. Rojo neutro 0.025 gr.,Agar 12 gr.

No se esteriliza

Peptona de gelatina 20 gr, Cloruro de Magnesio 1.4

Agar Cetrimida gr,Sulfato de potasio 10 gr, N-Cetil-N-N-N
Timetilamonio bromuro (Cetrimida) 0.3 gr.,Agar 13.6
gr. Altamente selectivo para el género Pseudomonas.
 Manitol Sal Agar

Peptona de carne 10gr

Extracto de carne 1 gr
Manitol 10 gr
Cloruro de sodio 75gr
Rojo de fenol 0.025 gr
Agar 12gr
Agua 1000 ml.

Staphylococcus aureus y Staphylococcus epidermidis en

Manitol Sal Agar
Agar Baird Parker

Peptona de caseína 15 gr
Extracto de carne 4.8 gr
Extracto de levadura 1 gr
Piruvato de sodio 10 gr
S. aureus creciendo en agar
Glicina 12 gr
Baird Parker
Cloruro de Litio 5 gr
Agar 15 gr
Agua 1000 ml
Se adiciona de 50 ml una suspensión al 50% de yema
de huevo estéril y telurito de potasio al 1%
Medios Generales

Agar cerebro corazón

Tripticase soya agar
Agar nutritivo
Agar cuenta estándar
Agar extracto de levadura

Crecen la mayoría de los microorganismos que se trabajan de

rutina en Microbiología
Medios para la realización de Pruebas Bioquímicas

Para la identificación de un microorganismo se cuenta en el laboratorio

de Microbiología de numerosas técnicas que nos permiten conocer la
expresión fenotípica de su genoma.

Esta identificación bioquímica se realiza identificando los productos

finales de sus procesos metabólicos y estudiando a detalle cómo ocurren
paso a paso las reacciones químicas que los producen; cuáles enzimas
intervienen, cuáles son los productos intermediarios involucrados para
así reconstruir la secuencia de las reacciones bioquímicas que se llevan
a cabo dentro de la célula.
Para realizar éste estudio se utilizan medios especiales a los que en
conjunto llamamos para:

PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Al cultivar a los microorganismos en un medio para una prueba
bioquímica ponemos de manifiesto la actividad de alguna enzima
codificada por el genoma bacteriano

Las enzimas son catalizadores biológicos, son proteínas capaces de

influir sobre una reacción química específica.
En los medios para pruebas bioquímicas el microorganismo se cultiva en
un medio que contiene una nutriente específico y después del período
de incubación, se ponen de manifiesto los cambios que hayan ocurrido,
por la influencia de la enzima que deseamos estudiar, para ello se añade
al medio distintos indicadores ó bien se revela la presencia de los
productos metabólicos utilizando algún agente revelador.
Fermentación de carbohidratos

Carbohidrato (CHO)n

Reacciones catabólicas:
Ej.Glucólisis

Ác. Láctico
Ác. Acético y fórmico
Ac. Pirúvico
Ác. Láctico y alcohol etílico
Etanol
Acetilmetilcarbinol y CO 2
Fermentación de carbohidratos:
Caldo Sacarosa Rojo de fenol
En esta prueba se busca conocer sí el microorganismo
produce la enzima: Invertasa

Sacarosa Glucosa + Fructuosa

Indicador: Rojo de
fenol

Prueba +: Amarillo Prueba -: Rojo, rosa intenso ó

medio sin cambios
ROJO DE METILO VOGES PROSKAUER
En esta prueba se busca conocer sí el microorganismo al
fermentar produce sustancias ácidas ó neutras

Glucosa

Ác. pirúvico Ác. mixtos Añadir rojo de metilo

(Láctico, fórmico,
acético etc)
Acetil metil
carbinol
1. 0.2 mL de KOH 40%
2. 0.5 mL de a naftol

Diacetilo
(Complejo rojo)
 Se inoculan 2 tubos del mismo medio para
cada cepa
Incubación
Adicionar al tubo 1 Adicionar al tubo 2
rojo de metilo KOH + a-naftol
Agitar el tubo, oxígeno

Ácidos mixtos
Formación de diacetilo
Prueba +: Color rojo
Prueba +: Color rojo
Prueba -: amarillo
Prueba -: amarillo

- + - +
Prueba de OF (Hugh y Leiffson)
Esta prueba tiene como objetivo conocer sí el microorganismo realiza
un metabolismo oxidativo, fermentativo ó ambos
MEDIO SIM

S = Producción de H2S

I = Indol

M = Movilidad
MEDIO SIM

Fundamento
 1.- Medio sin inocular

2.- S -, I -, M +

3.- S -, I +, M -
4.- S +, I -, M +

1 2 3 4
DEGRADACIÓN DE PROTEÍNAS: CASEÍNA
En esta prueba se busca conocer sí el microorganismo
produce exoproteasas.

Medio: Agar Leche Descremada

Inocular el medio mediante
estría recta

Incubar 24-48 h

Observar halo alrededor de la Prueba +: Halo alrededor

estría de la siembra
Prueba -: Sin halo
ESTERILIZACIÓN
Muerte de todos los organismos viables y sus virus.

Calor seco
Calor húmedo
MÉTODOS DE Incineración
ESTERILIZACIÓN
Filtración
Radiaciones
Agentes Químicos
MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN

Calor seco: 180ºC, 2 hrs. Material de vidrio

limpio, polvos, material quirúrgico.
Calor Húmedo: 121ºC, 1.1Kg/cm2 ó 15 lb/in2
15 min. Medios de cultivo, soluciones no
termolábiles, ropa de quirófano, material de
polipropileno, cultivos para desechar.
Esterilización por Incineración: Con este método se oxida
calor totalmente toda la materia orgánica, con
calor directo , es decir se transforma en
carbón.Su uso se limita a eliminación de
residuos biológicos potencialmente
infecciosos.(Cultivos, restos de sangre,
heces, animales muertos, tejidos, asas de
cultivo etc.)
Esterilización por calor húmedo

AUTOCLAVE
Esterilización por calor húmedo
 AUTOCLAVE

Control: Suspensión de esporas de

Geobacillus stearothermophilus
(1 x 10 6 cels/ml)
MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN

FILTRACIÓN:
Se utiliza para sustancias
termolábiles como sueros,
vitaminas, antibióticos,azúcares
etc.cuyas soluciones se hacen
pasar a través de membranas
generalmente de ésteres de
celulosa, cuyo tamaño de poro
oscila entre 0.22 y 0.45 micras.
MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN
RADIACIONES:
Son utilizadas radiaciones electromagnéticas:
Microondas: Efecto térmico
Radiaciones UV (220-300nm) :Mutaciones
(dimerización Timina) ,
Se utilizan para la
esterilización de superficies,
áreas de trabajo.
Radiaciones ionizantes: Rayos X, Rayos
gama( 160Co y 137Cs) utilizadas para la
esterilización de suministros quirúrgicos, material
de laboratorio de un solo uso, medicamentos,
injertos y en la industria de alimentos.
MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN
Métodos químicos de esterilización
Aplicación de óxido de etileno: Material desechable de
plástico: Cajas Petri, jeringas,guantes,cánulas,bolsas diálisis.
 PASTEURIZACIÓN
La pasteurización es un
tratamiento térmico que se
le da a los alimentos para
disminuir el número de
bacterias, en especial se
eliminan patógenos
termosensibles como:
Salmonella, Listeria,
Campylobacter, E. coli,etc.

La pasteurización NO ES UN MÉTODO DE
ESTERILIZACIÓN.......
Pasteur la aplicó a los vino por primera vez a fin
de evitar su contaminación con bacterias,
actualmente se utiliza en muchos alimentos
especialmente en leche, en la que ésta se hace
pasar a través de un intercambiador de calor
elevando su temperatura a 72°C durante 15 seg.
 LIOFILIZACIÓN

La liofilización NO ES UN PROCESO DE ESTERILIZACIÓN

Es un proceso en el que se congela un producto

(que puede ser un alimento ó una cepa
bacteriana) para posteriormente deshidratarlo por
LIOFILIZACIÓN sublimación, de esta manera de elimina el agua
desde el estado sólido al gaseoso sin pasar por el
líquido, lo que permite un máximo de
conservación de las estructuras de la materia viva.