Enzimas

Enzimas

• Mecanismos y cinética
enzimática

• Nomenclatura de las enzimas

• Inhibición enzimática
 Enzimas
• Proteínas
- Monomoéricas (una subunidad)
- Multiméricas (varias subunidades)
- Complejos multienzimáticos (asociaciones de enzimas)

• Catalizan reacciones con alta eficiencia y especificidad

• Reducen la energía necesaria para la reacción

• Aumentan la velocidad de la reacción sin modificar la

posición de equilibrio (no hacen más favorable una
reacción)
Cinética de las reacciones
enzimáticas
Cinética enzimática
 Cinética de Michaelis-Menten

[S] mM Velocidad inicial

mM/minuto (Vo)

2,0 4,0

4,0 7,0

6,0 12,0

8,0 19,0

10,0 26,0

12,0 26,0

15,0 26,0

Vo depende de la concentración de sustrato ([S])

[E] es constante
 Cinética de Michaelis-Menten

Vm (velocidad máxima):
velocidad en la cual los sitios
activos están saturados.
Velocidad ya no depende de [S]

Km (constante de michaelis):
concentración de sustrato a la
cual la reacción se efectúa a la
mitad de su velocidad máxima

A menor Km, mayor afinidad de la enzima por el sustrato

 Cinética de Michaelis-Menten
A menor Km, mayor afinidad de la enzima por el sustrato
Alcohol
deshidrogenasa
CH3CH2OH + NAD+ CH3CHO + NADH + H+
Aldehído
deshidrogenasa
CH3CHO + NAD+ + H2O CH3COO- + NADH + 2H+

Aldehído deshidrogenasa mitocondrial: baja Km (ej: 20 mM)

Aldehído deshidrogenasa citosólica: alta Km (ej: 100 mM)
Baja tolerancia al alcohol:
Mutación en aldehído deshidrogenasa mitocondrial: baja
actividad de la enzima: Acumulación de CH3CHO: Taquicardia
Cinética enzimática
 Cinética enzimática

Pendiente

Intercepto
 Cinética enzimática

1 Km 1 1
 
Vo V max [ S ] V max

y = m x + b
Inhibición enzimática
 Inhibidores
Compuestos que se unen a las enzimas e interfieren con
su actividad:
- Disminuir la velocidad de una reacción
- Bloquear la reacción

• Inhibición irreversible: Disociación lenta del complejo E-I

• Inhibición reversible: Disociación rápida del complejo E-I
 Inhibidores reversibles
Mecanismos:
- Evitan formación del complejo ES
- Bloqueando la reacción de formación de producto

1. Competitiva

2. No competitiva
 Inhibición competitiva
El inhibidor (I) es similar estructuralmente al sustrato (S) y compite por el sitio
activo de la Enzima (E)
Vmax no cambia y Km aumenta
Reduce la proporción de moléculas de enzima unidas al sustrato
Esta inhibición se puede contrarrestar aumentando la concentración de
sustrato

* I y S se unen al mismo sitio

 Inhibición competitiva
Vmax no cambia y Km aumenta
Reduce la proporción de moléculas de enzima unidas al sustrato
Esta inhibición se puede contrarrestar aumentando la
concentración de sustrato

* Metotrexato: Inhibe enzima implicada en

síntesis de DNA
* Análogo estructural (afinidad 1000 veces
mayor)

* Tratamiento del cáncer

 Inhibición No competitiva
Vm disminuye y Km no cambia
El inhibidor (I) se une a la enzima (E) en un sitio diferente
al sitio de unión del sustrato (S)

* I se une a E o a ES
Inhibidores Enzimáticos
Competitivo No competitivo

Km: aumenta Km: no cambia

Vm: no cambia Vm: disminuye

A menor valor de Ki, mayor inhibición

 Inhibidores reversibles

Tipo de inhibidor Efecto en constantes Parámetros

cinéticas
Competitivo Incrementa Km Aumenta pendiente
No modifica Vmax No cambia intercepto
No competitivo Disminuye Vmax Aumenta pendiente
No modifica Km Aumenta intercepto
 Ejercicio
En una gráfica de doble inverso se obtiene una familia de rectas con
las siguientes pendientes e intersecciones:

Reacción Pendiente Intercepto

Sin inhibidor 0.4 0.01

Con inhibidor 0.8 0.02

a. Determine el tipo de inhibición

b. Determine el valor de Km para las reacciónes inhibida y no inhibida
c. Determine el valor de Vm para las reacciónes inhibida y no inhibida
 Ejercicio
En una gráfica de doble inverso se obtiene una familia de rectas con
las siguientes pendientes e intersecciones:

[I] Pendiente Intercepto

0.0 0.4 0.01

1.5 0.8 0.02

a. Inhibición No competitiva
b. Km no inhibida = 40; Km inhibida = 40
c. Vm no inhibida = 100; Km inhibida = 50
Nomenclatura de enzimas
 Clasificación internacional de enzimas
Clase EC Nombre Tipo de reacción catalizada

1 Oxidoreductasas Transferencia de electrones entre moléculas

2 Transferasas Transferencia de grupos entre moléculas

3 Hidrolasas Hidrólisis de enlaces químicos

4 Liasas Eliminación de dobles enlaces (adición de grupos)

Formación de dobles enlaces (eliminación de grupos).
Ruptura de enlaces (no hidrolítica)
Formación de enlaces (sin gasto de ATP)

5 Isomerasas Transferencia de electrones y grupos dentro de la

misma molécula para generar isómeros
6 Ligasas Formación de enlaces C-C, C-S. C-O y C-N por
reacciones de condensación acopladas a ruptura de
ATP o similares
Clasificación internacional de enzimas

1. Oxidoreductasas (EC1)

Catalizan reacciones de oxidación-reducción:

Transferencia de electrones desde un donador (agente
reductor) a un aceptor (agente oxidante)
- Al donar electrones la molécula se oxida
- Al ganar electrones la molécula se reduce

EC1.1: grupos CH-OH como donantes

EC1.2: grupos aldehido o cetona como donantes
EC1.3: grupos CH-CH como donantes
EC1.6: NADH o NADPH
Clasificación internacional de enzimas

1. Oxidoreductasas (EC1)

Oxidado EC1.6 Reducido

Clasificación internacional de enzimas

1. Oxidoreductasas (EC1)

Oxidado Reducido
Clasificación internacional de enzimas

1. Oxidoreductasas (EC1)

Reducido Oxidado
Clasificación internacional de enzimas

1. Oxidoreductasas (EC1)

FAD FADH2

Reducido Oxidado
Clasificación internacional de enzimas

2. Transferasas (EC2)
Catalizan reacciones de transferencia de un grupo entre moléculas
Amino transferasas, Fosfo transferasas (quinasas)

EC2.1: Transfieren grupos metilo

EC2.2: Transfieren grupos aldehido o cetona
EC2.3: Transfieren grupos acilo
EC2.4: Transfieren grupos glicosilo
EC2.6: Transfieren grupos amino
EC2.7: Transfieren grupos fosfato
Clasificación internacional de enzimas

2. Transferasas (EC2)

EC2.6
Clasificación internacional de enzimas

2. Transferasas (EC2)
Clasificación internacional de enzimas

3. Hidrolasas (EC3)
Catalizan reacciones de hidrólisis de enlaces químicos
Fosfatasas, fosfodiestearasas, peptidasas

EC3.1: Actúan sobre enlaces ester

EC3.2: Actúan sobre enlaces glicosilo
EC3.4: Actúan sobre enlaces peptidicos
EC3.5: Actúan sobre enlaces C-N no peptidicos
EC3.6: Actúan sobre enlaces anhídridos de ácido
Clasificación internacional de enzimas

3. Hidrolasas (EC3)

EC3.1
Clasificación internacional de enzimas

3. Hidrolasas (EC3)
Clasificación internacional de enzimas

3. Hidrolasas (EC3)
Clasificación internacional de enzimas

3. Hidrolasas (EC3)
Clasificación internacional de enzimas

4. Liasas (sintasas) (EC4)

Catalizan lisis de un sustrato.
Formación o eliminación de dobles enlaces
Decarboxilasas, aldolasas, sintasas

EC4.1: Actúan sobre enlaces C-C

EC4.2: Actúan sobre enlaces C-O
EC4.3: Actúan sobre enlaces C-N
EC4.4: Actúan sobre enlaces C-S
Clasificación internacional de enzimas

4. Liasas (sintasas) (EC4)

EC4.1
Clasificación internacional de enzimas

4. Liasas (sintasas) (EC4)

Clasificación internacional de enzimas

4. Liasas (sintasas) (EC4)

H2O
Clasificación internacional de enzimas

5. Isomerasa (EC5)
Catalizan cambios estructurales dentro de una misma
molécula
Mutasas, Racemasas

EC5.1: Racemasas, epimerasas

EC5.2: cis-trans-isomerasas
EC5.3: Oxidoreductasas intramoleculares
EC5.4: Transferasas intramoleculares
Clasificación internacional de enzimas

5. Isomerasa (EC5)
Catalizan cambios estructurales dentro de una misma molécula
Mutasas, Racemasas

EC5.1
Clasificación internacional de enzimas

5. Isomerasa (EC5)
Clasificación internacional de enzimas

5. Isomerasa (EC5)
Clasificación internacional de enzimas

6. Ligasas (usualmente llamadas sintetasas) (EC6)

Catalizan unión de dos sustratos
Necesitan ATP
Carboxilasas

EC6.1: Formación uniones O-C

EC6.2: Formación uniones C-S
EC6.3: Formación uniones C-N
EC6.4: Formación uniones C-C
Clasificación internacional de enzimas

6. Ligasas (usualmente llamadas sintetasas) (EC6)

EC6.3
Clasificación internacional de enzimas

6. Ligasas (usualmente llamadas sintetasas) (EC6)

 Enzimas alostéricas

Cinética de Michaelis-Menten Cinética de una enzima alostérica

 Enzimas alostéricas

La unión de un ligando modifica significativamente la estructura

cuaternaria de la proteína (Hemoglobina)
Se caracterizan por poseer múltiples subunidades y múltiples
centros activos
 Enzimas alostéricas
- En estado R (con ligando unido) los sitios de unión a
ligando están libres de tensión
- Pueden unir más ligando con mayor afinidad que en el
estado T (sin ligando unido)
- Al pasar del estado T a R la unión del ligando incrementa la
afinidad de unión a los demás centros

“Cooperatividad”
Enzimas alostéricas

Enzima + Modulador
positivo

Enzima + Modulador negativo