Norma técnica colombiana

NTC 5567
2017 – 12 – 12

Microbiología de alimentos y de alimentos animales

Método horizontal para la detección de shigella spp
María Elena ,Edgar Mauricio, María Camila
 Muestra

• X gr o ml de muestra de ensayo

• 9 x ml de caldo shigella de cultivo +0,5 µg/ml de novobiocina

 Enriquecimiento

• Homogenice y ajuste el pH a 7,0 ± 0,2, si es necesario

• Incube anaeróbicamente a 41,5 °C ± 1 °C durante 16 a 20 horas
 Cultivo sobre placa
• Subcultive el caldo en cada uno de los tres agares selectivos, para obtener
colonias aisladas.
Agar MacConkey (baja selectividad)
Agar XLD (selectividad moderada)
Agar HE (alta selectividad)
• Incube a 37 °C ± 1 °C durante 24 a 48hr. Para observar enriquecimiento, revisar
a las 24 hr.
• Examine las placas para determinar colonias típicas o sospechosas de Shigella.
Seleccione y marque 5 colonias (si hay) en cada placa para la confirmación
 Selección de colonias
• Inocule cada colonia seleccionada en cada placa de agar nutritivo,
para obtener un cultivo puro con colonias aisladas.
• Incube a 37 °C ± 1 °C durante 24 a 48hr
• Ensaye el cultivo puro hasta llegar un positivo o que todos sean
negativos
 Identificación
• Ensayos bioquinicos
• Ensayos serológicos
Las colonias identificadas por los ensayos bioquímicos se ensayan con
intisueros polivalentes
Aglutinación con uno de los antisueros identifica la especie