Determinación de Staphylococcus aureus coagulasa positiva en muestras de alimentos

Andrea Carolina Caballero Eguis

Karen Johana Baquero Ramírez

Daniela Camila Corzo Muñoz
Nayla Maryeth Vera Nova

Profesora: Yumar Ruidiaz Mendez

Universidad Popular Del Cesar

Facultad de Ingenierías y Tecnologías
Ingeniería Agroindustrial
Microbiología Agroindustrial
Valledupar/Cesar
 Introducción

Staphylococcus aureus coagulasa positiva es un microorganismo patógeno de amplia distribución. Posee

características particulares de virulencia y resistencia contra antibióticos lo cual representa un grave
problema de salud. Este patógeno es uno de los principales causantes de enfermedades transmitidas por
alimentos (ETA). Algunos de estos son buscados en alimentos comercializados para verificar la inocuidad
de estos.
 Objetivos

 Detectar Staphylococcus coagulasa positiva en muestras de alimentos.

 Enumerar Staphylococcus coagulasa positiva siguiendo la NTC 4779
 Procedimiento

• Mezclar muy bien la muestra (si es liquida) para asegurar su homogenización.

• Desinfectar con alcohol al 75% el sitio por donde se vaya a extraer la muestra.

• Abrir asépticamente ( con el mechero en medio) y adecuadamente la muestra.

• Pesar 11 gramos de la muestra (Galleta Tosh, salada) en balanza analítica si es sólida, sobre un
papel craff estéril Macerar, picar o triturar.
• Añadir al recipiente de dilución que contiene 99 ml de agua peptonada: dilución 10 1

• Preparar la dilución 102 trasfiriendo 1 ml de la dilución 10 1 a un tubo de Ensayo que contiene 9

ml de agua peptonada, agitar cuidadosamente, asi hasta completar la dilución 10 3

• Transferir por duplicado alícuotas de 0.1 ml de cada una de las diluciones consecutivas en cajas
de agar Baird parker previamente temperadas.

• Extender el inoculo sobre la superficie del agar, con la ayuda de la varilla de hockey, hasta que La
superficie quede seca.

• incubarlas a 35ºC + / - 2ºC durante 48 horas

• Seleccionar las cajas que presenten entre 20 y 200 colonias aisladas y contar las colonias negras
y brillantes, con bordes reducidos blancos, rodeados de zonas claras que contrastan con el medio
opaco, zona de precipitado.

Prueba coagulasa:
• Tomar un mínimo de 3 a 5 colonias colonias y realizar la prueba de coagulasa.

• Trasferir el número de colonias a confirmar a un número igual de tubos que contienen 5 ml de

Caldo infusión cerebro corazón (BHI).

• Incubarlas a 35ºC + / - 2ºC durante 18 – 24 horas.

• Pasado este tiempo transferir 0.3 ml de cada uno de los cultivos de BHI a tubos que contienen 0.3
de plasma deshidratado de conejo con EDTA.

• Control positivo sembrando una cepa de estafilococo coagulasa positiva.

• Tubo 0.3 ml de plasma deshidratado de conejo como control negativo

• Incubarlas a 35ºC + / - 2ºC durante 4 a 6 horas.

• Una vez finalizado el tiempo de incubación, hacer la lectura con base en los tubos que presentan
coagulación del plasma comparándolos con los controles positivos y negativos.

• Sobre el número total de colonias después de las 48 horas de incubación y la proporción de

colonias confirmadas por la prueba de la coagulasa, hacer el cálculo de estafilococos coagulasa
positiva.
 Materiales

 Agua embotellada de 300 ml

 Micropipeta.
 Caja de Petri.
 Guantes
 Bata de laboratorio
 Tapabocas
 Gorro
 Mechero bunsen.
 Frasco con 100 ml de caldo lactosado
 Agua peptonada.
 Cinta de marcar
 Marcador
 Agar Baird Parker
 Micropipeta
 Mortero
 Galleta Tosh
 Balanza analítica

Equipos
 Incubadora
 Resultados

No hubo presencia de Staphylococcus coagulasa positiva en 11 gr de la muestra (galleta).

• Los resultados son expresados según la guía de laboratorio. Al no haber presencia de colonias, no
se continua con el procedimiento de la prueba coagulasa en tubo de ensayo 0.3 ml de plasma
deshidratado de conejo como control negativo.

 Si dos de las cajas, correspondientes a la muestra de ensayo no contienen ninguna colonia de

estafilococos coagulasa positiva y si el inóculo ha sido hecho con 0,1 ml de muestra, reportar los
resultados como:

 Menor de 10/d estafilococos coagulasa-positiva por gramo (otros productos), donde d es el factor
de dilución de la suspensión inicial.

Diluciones 10-1

Diluciones 10-2

Análisis de resultados

Pasado el periodo de
incubación (48 horas) al
no haber presencia de
Staphylococcus coagulasa positivo, no se pudo observar ningún crecimiento de colonias. Lo que indica
que el producto cuenta con una garantía de alta calidad y significa que es apto para consumo humano.
Este aplica para ambas diluciones 10-1 y 10-2 en este resultado se presenta de esta forma debido a lo
mencionado anteriormente.

La presencia de Staphylococcus en alimentos puede causar intoxicación, mientras este se encuentre

contaminado. Uno de los factores para que actúe de esta manera es que sea por un mal control en
temperatura. Es por eso que se lleva a cabo un control de calidad en sus procesos de producción.
 Conclusión

En el medio de cultivo se observó que no hubo crecimiento de colonias de Staphylococcus coagulasa

positivo lo que indica que la galleta que se utilizó contaba con un excelente tratamiento de calidad y
según la norma NTC 4779 concluye que es un producto inocuo para las personas
 Bibliografía

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Enumeration of coagulase-positive staphylococcus (Staphylococcus aureus and other species)

Standard Method
NTC 4779 Método Horizontal Para El Recuento De Estafilococos Coagulasa positiva
(Staphylococcus aureus Y Otras Especies)

DA SILVA, N. HIROMI, M. Microbiological Examination Methods of Food and Water. Instituto

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Anexos