UNIVERSIDAD JORGE BASADRE GROHMANN

FACULTAD DE CIENCIAS
E. P. de BIOLOGÍA MICROBIOLOGÍA

RECUENTO DE
ENTEROCOCOS

Dr. CÉSAR JULIO CÁCEDA QUIROZ

 ENTEROCOCOS

• Bacterias esféricas Gram

positivas

• Forman pares de cadenas

durante su crecimiento.

• Aerobios facultativos.
 ENTEROCOCOS

• Forman parte de la flora entérica normal.

• Crecen en presencia de NaCl 6,5%.

• Catalasa negativos.

• Algunos son móviles.

 ENTEROCOCOS

• Se incluyen tres especies que han sido

reclasificados dentro del género Enterococcus:

 E. faecalis

 E. faecium

 E. durans
 ENTEROCOCOS

• Los enterococos pueden enumerarse en los

alimentos, siendo un parámetro útil:

 Para evaluar las condiciones sanitarias en las que

fueron producidos.

• Debe esperarse que muchos alimentos contengan

enterococos como parte de su flora normal.

FUENTE: ICMSF, 2000

 ENTEROCOCOS

•Los Enterococcus:
 ENTEROCOCOS

•Las especies de Enterococcus más importantes,

son:
 ENTEROCOCOS

•Se necesita para el aislamiento de enterococos:

Tabla 01
Coliformes y enterococos como indicadores de la calidad higiénica de los
alimentos
Característica Coliformes Enterococos
• Morfología Bacilos Cocos
• Incidencia en el tracto intestinal 107-109/g de heces 105-108/g de heces
Incidencia en la materia fecal de Ausentes en algunas Presentes en la mayoría
varias especies animales
• Especificidad para el tracto Generalmente específicos Generalmente menos específicos
intestinal
• Existencia fuera del tracto Frecuentes en pequeñas cantidades Frecuentes en mayores cantidades
intestinal
• Facilidad de aislamiento e Relativamente fáciles Más difíciles
identificación
• Respuesta a las condiciones Menos Resistentes Más resistentes
ambientales desfavorables
• Respuesta a la congelación Menos resistentes Más resistentes
• Supervivencia relativa en Generalmente baja Elevada
alimentos congelados
• Supervivencia relativa en Baja Elevada
alimentos desecados
• Incidencia en hortalizas frescas Baja Generalmente elevada
Incidencia en carnes frescas Generalmente baja Generalmente baja
• Incidencia en carnes curadas Baja o ausentes Generalmente elevada
• Relación con patógenos Generalmente elevada Más baja
intestinales transmitidos por
alimentos
• Relación con patógenos no Baja Baja
intestinales transmitidos por
alimentos
FUENTE: JAY, 2002
 ENTEROCOCOS

• Alimentos fermentados, como

los quesos y ciertos embutidos:

 Pueden contener números

muy altos de estos M’os

Sin dejar de ser aptos para

el consumo humano.

FUENTE: ICMSF, 2000

 ENTEROCOCOS

• Sobreviven a los tiempos y temperaturas

utilizadas en la pasteurización de la leche.

 Algunas cepas crecen a T° de sólo 2 ºC.

• Su capacidad de supervivencia en los

alimentos congelados y en el agua:

 Es superior a la de la bacterias coliformes.

FUENTE: ICMSF, 2000

 ENTEROCOCOS

• El agar sangre azida cristal violeta de Packer

y el agar KF son dos medios comunes :

 Para recuentos en placa de enterococos

presentes en alimentos.

FUENTE: ICMSF, 2000

 ENTEROCOCOS

• Los medios se basan en la tolerancia relativa de

los enterococos a condiciones adversas:

 Utilizan un compuesto químico como la azida

de sodio:

 Para inhibir el crecimiento de otros géneros

de bacterias.

FUENTE: ICMSF, 2000

 ENTEROCOCOS

•Junto con otra sustancia indicadora que detecta

la producción de ácido:

 Púrpura de bromocresol para el medio KF.

 CristalVioleta (0,1% p/v) para el medio agar

sangre azida cristal violeta de Packer.

FUENTE: MERCK, 1994

 ENTEROCOCOS

• Las colonias de los enterococos se reconocen

por su característica coloración:

 Colonias de color violeta en el agar Packer.

 Colonias de color rojo intenso (E. faecalis) y

rosa claro (E. faecium) en el agar KF.

• Las pruebas de confirmación se lleva a cabo

con las cepas aisladas.
FUENTE: ICMSF, 2000
 OBJETIVO

• Realizar el recuento de Enterococcus de una

muestra de agua (puede ser un alimento).
MATERIALES Y REACTIVOS
 Biológico: Muestra de agua (alimento).

 Medios: Agar sangre azida cristal violeta de

Packer y/ o agar KF.

 Peróxido de hidrógeno al 3%.

 Medio Infusión Cerebro Corazón (BHI).

FUENTE: ICMSF ,2000

 MATERIALES Y REACTIVOS

 BHI adicionado de un 6,5% de NaCl.

 Reactivos para tinción Gram.

 Agua peptonada (diluyente).

 Material de vidrio necesario

 Asa de Digrasky

FUENTE: ICMSF ,2000

 METODOLOGIA

RECUENTO DE PROBABLES
ENTEROCOCOS

Técnica (ICMSF, 2000)

 25 gramos de la muestra
+ 1 ml.
225 ml. de diluyente (agua peptonada) 1 ml.

1 ml.

9 ml de
agua
peptonada
1 ml. 1 ml.
10-1 10-2 1 ml. 10-3 10-4

1º Agregar 1 ml de
la dilución
2º verter medio
Agar KF

Homogenizar Incubar 35 – 37 ºC x 48
horas (KF + TTC al 1%).

Lectura: Agar KF

- Colonias color rojo intenso (E. faecalis)

- Colonias rosa claro (E. faecium)
  
Elegir para el recuento las placas que presenten entre (30 – 300) colonias, calcular el
número de presuntos enterococos por mililitro de muestra.

Fuente: ICMSF, 2000

 METODOLOGÍA

CONFIRMACIÓN DE
ENTEROCOCOS
Técnica (ICMSF, 2000)
 Escoger de 5 a 10 colonias características y
tomar asadas e inocularlas individualmente

E en tubos de Infusión Cerebro Corazón

Tinción de Gram Medio BHI

(Gram positivos, coco
ovales, en pares o en
cadenas cortas).
Incubar a 35 – 37 ºC x 18 – 24 horas
o hasta que aparezca turbidez.

3 ml

0,5 ml. de H22O22 al

3%

LECTURA: Catalasa Negativo (ausencia de producción de burbujas)

confirma que se trata de Estreptococos.

FUENTE: ICMSF, 2000

LECTURA: Catalasa negativa (ausencia de producción de burbujas). Confirma que se trata de
estreptococos.

Una vez confirmados que son estreptococos , realizar:

Medio BHI (templar los tubos en

baño de 44 – 46 ºC
e incubarlos x 48 horas).

Medio BHI + 6,5 % de NaCl

(35 – 36 ºC x 72 h.).

Un estreptococo catalasa negativo que crece a 44 – 46 ºC y también en

presencia de un 6,5 % de NaCl corresponde a un ENTEROCOCO.

FUENTE: ICMSF, 2000

 BIBLIOGRAFÍA

• I.C.M.S.F. 2000. Microorganismos de los alimentos. Vol. I: Su

significado y métodos de enumeración. 2da. Edición. Editorial Acriba,
S. A. - Zaragoza (España) .

• PASCUAL ANDERSON, MARÍA DEL ROSARIO. 2000. Microbiología

Alimentaria. Editorial Días de Santos S.A. Madrid- España.

• JAY JAMES. 1994. Microbiología moderna de los alimentos. 2da

Edición. Editorial Acribia S.A. Zaragoza-España.

• DOYLE, MICHAEL. 1997. Microbiología de los Alimentos. 4ta

Edición. Editorial Acribia S. A. Zaragoza - España.
GRACIAS