Información general

• Clases teóricas y practicas semanales.

• Cambios de comisión: sólo en las dos primeras semanas de

clases con el correspondiente trámite en despacho de
alumnos (presentar constancia en la cátedra).

• Tendrán 2 exámenes parciales escritos teórico-prácticos.

 Promoción:
• Asistir al 80 % de las clases prácticas. DOS FALTAS.
• Aprobar al menos con 7 puntos los 2 exámenes parciales. NO SE
PROMEDIAN LAS NOTAS.
• Tener aprobadas las asignaturas correlativas.
• No se pueden recuperar parciales para promocionar.

Regularización:
• Asistir al 80% de las clases prácticas. DOS FALTAS.
• Aprobar al menos con 4 puntos los 2 exámenes parciales. NO SE
PROMEDAN LAS NOTAS.
• Se puede recuperar un examen parcial por ausencia o aplazo.
 PRÁCTICO N° 1

Técnicas para el estudio de microorganismos del suelo

Objetivo: Conocer las técnicas básicas para el análisis

microbiológico del suelo

1) Normas prácticas para el muestreo de suelo

2) Técnicas para el cultivo de microorganismos
3) Técnicas de observación al microscopio
4) Métodos de aislamiento y conservación
 Normas prácticas para el muestreo de suelo

1) Diseño de muestreo:
• Cantidad de muestras: topografía y heterogeneidad del lote
• Forma de muestreo: cultivo, sistema de labranza
• Profundidad: 0 – 20 cm

2) Acondicionamiento de las muestras

3) Preparación de las muestras en laboratorio

Cantidad de muestras: topografía y heterogeneidad del lote

Loma
15 Submuestras = 1 Muestra

Medialoma

Bajo
Agricultura de Precisión

Imagen Satelital Mapa de Rendimiento Mapa de Ambientes

 Elementos de muestreo

Pala Barreno Manual Barreno Hidráulico

 Forma de muestreo: cultivo y sistema de labranza

Siembra directa Labranza convencional

Rastrojo de maíz Rastrojo de soja Suelo laboreado

 Forma de muestreo: profundidad

0 cm.

20 cm.
 Acondicionamiento de las submuestras

~200 g.
 Preparación de las muestras en laboratorio

Oreado
Mínimo 24 hs.

Tamizado

Embolsado y
Rotulado
Conservación
Visualización de microorganismos: porta objeto enterrado

Suelo en estudio Riego Portaobjeto enterrado

Incubación
 Actividades

1) Preparación de muestras de suelo en laboratorio:

tamizar, embolsar y rotular.

2) Visualización de microorganismos de suelo:

enterrar un portaobjeto.
 Técnicas para el cultivo de microorganismos

Requerimientos para el cultivo de microorganismos en laboratorio:

1) Condiciones de asepsia: esterilización

2) Medios de cultivos

3) Condiciones ambientales
 Condiciones de asepsia: esterilización

• Esterilización: eliminar todos los organismos vivos

• Métodos de esterilización:
– Calor: húmedo y seco
– Radiación
– Filtración
– Productos químicos
 Calor húmedo: Autoclave
Combinación de calor, presión y humedad
Para sustancias acuosas
Temperatura de esterilización: 121°C - 20 minutos

A gas con regulación manual

Eléctrica con
regulación automática
 Calor seco: Horno de esterilización

Para materiales estables al calor

Vista exterior (vidrio, metal, porcelana etc.)

Vista interior Temperatura de esterilización: 160 °C

Tiempo: 2 hs
 Otros métodos de esterilización

Radiación UV: superficies,

aire y agua

Filtración: soluciones Filtro

lábiles

•Agua Oxigenada
•Alcohol etílico
Productos químicos: mesada, •Hipoclorito
•Formol
manos, tapones, etc.
•Bicloruro de mercurio
 Medios de cultivos

• Definición: mezcla balanceada de requerimientos nutritivos para el

crecimiento de microorganismos

• Tipos:
– Generales
– Selectivos

• Composición química: fuente de carbono, fuente de nitrógeno,

fuente de energía, base mineral y factores de crecimiento

• Características: líquidos o sólidos: agentes solidificantes

 Composición de medios de cultivos

Medio selectivo: Fijadores de Nitrógeno

Medio general
FUENTE COMPUESTO CANTIDAD
FUENTE COMPUESTO CANTIDAD
Fuente de
Cy Sucrosa 20 g Fuente de C Almidón 12 g
energía y energía
Fosfato di potásico 0.05 g Fuente de N NO3 Na 0.5 g

Fosfato 0.15 g PO4 HK2 1.0 g

monopotásico
Base
Cloruro de calcio 0.01 g mineral SO4 Mg 7 H2O 0.5 g
Base
mineral
Sulfato de 0.2 g Agente Agar 15 g
magnesio solidificante
Molibdato de sodio 0.002 g Agua Agua destilada 1000 ml

Cloruro férrico 0.01 g pH = 7

Carbonato de 0.1 g
calcio
Agua Agua destilada 1000 ml

pH = 7
 Preparación de medios de cultivo

Pesar componentes sólidos:

encender colocar recipiente para tarar

pesar

colocar el componente
registrar la a pesar
lectura
 Disolver con agua destilada: hidratar

componentes sólidos agregar agua

disolver
 Regular pH: pHmetro

soluciones reguladoras encendido y lavado lectura

protección del electrodo lavado del electrodo

 Preparación de medio sólido

medio líquido agregar agar

fundir al calor medio agarizado

 Fraccionar y acondicionar para esterilizar

Fraccionamiento de
medio líquido

Fraccionamiento de
medio sólido
(en caliente)

Acondicionado
para esterilizar
Esterilizar en autoclave

Medios en “Pico de flauta”

Cultivo de microorganismos del suelo en medio líquido

Siembra Dilución

Incubación

Actividad: colocar una alícuota de suelo en medios general y selectivo.

Tamaño del
lote
Cantidad Muestreo Profundidad
0-20 cm.
de de suelo con
muestras rastrojos
Topografía

Composición

n° submuestras

Guardar en
conservadora
Una muestra

Preparación de muestras en laboratorio

Oreado Tamizado Envasado y Rotulado Conservación en heladera

 Práctico 1 Laboratorio Práctico 3

Esterilización Medio de cultivo Observación Aislamiento

• Autoclave - horno
• Radiación
• Filtración
• Productos químicos
Composición química Preparación de medios

• Base mineral Líquidos Sólidos

• Fuente de carbono
• Fuente de energía • Pesar drogas • Pesar drogas
• Agua • Disolver con • Disolver con agua destilada
agua destilada • Regular pH
• Regular pH • Agarizar
• Fraccionar • Fundir
• Fraccionar

Esterilización en autoclave

* Visita al Laboratorio de Siembra de suelo

Microbiología Agrícola F.C.A. Incubación