MEDIOS DE CULTIVO Y

SUMPLEMENTOS
 Medios de Cultivo
✘ líquido o un gel diseñado para favorecer el
crecimiento de microorganismos, células o
pequeñas plantas.
✘ Los medios de cultivo celular generalmente
contienen una fuente apropiada de energía y
compuestos que regulan el ciclo celular.
✘ aminoácidos, vitaminas, sales inorgánicas, glucosa,
y suero como fuente de factores de crecimiento,
hormonas y factores de adhesión. 2
Tipos de medios de cultivo
celular
Medio Medios
Naturales artificiales

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Tipos de medios de cultivo
celular

4
Medio Naturales

Los medios naturales son muy

útiles y prácticos para el cultivo
de una amplia gama de células
animales. La principal desventaja
de los medios naturales es su
baja reproducibilidad debido a la
falta de conocimiento de su
composición exacta.
 Medio Sintético

Se preparan agregando nutrientes (tanto

orgánicos como inorgánicos), vitaminas,
sales, fases gaseosas de O2 y CO2,
proteínas del suero, carbohidratos, y
cofactores
Diferentes medios artificiales han sido diseñados para servir a uno o
más de los siguientes propósitos:
1) Supervivencia inmediata (solución balanceada de sales, con pH y
presión osmótica específicos);
2) Supervivencia prolongada (solución balanceada de sales
complementada con varias formulaciones de compuestos
orgánicos y/o suero);
3) crecimiento indefinido;
4) Funciones especializadas.
 Medio Sintético:
Clasificación

El suero provee portadores o quelantes de nutrientes lábiles o insolubles

Medio con en agua, hormonas y factores de crecimiento.
suero El suero fetal bovino es el suplemento más común en los medios de
cultivo de células animales.

Medio sin
suero La presencia de suero en el medio tiene varias desventajas y puede llevar a
graves malinterpretaciones en estudios inmunológicos
Estos medios en general han sido diseñados específicamente para el cultivo
de un tipo celular en particular e incorporan cantidades definidas de factores
de crecimiento purificados, lipoproteínas, y otras proteínas, que de otra
manera serían provistas por el suero

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 Medio Sintético:
Clasificación

Medios Estos medios contienen ingredientes orgánicos e inorgánicos ultra puros

químicamente libres de contaminación. Sus componentes son producidos mediante
definidos ingeniería genética en bacterias o levaduras con la adición de vitaminas,
colesterol, aminoácidos específicos y ácidos grasos

Medios libres Sólo poseen componentes no proteicos. Comparados con los medios
de proteínas complementados con suero, los medios libres de proteínas promueven
un crecimiento celular y una expresión proteica superior y facilitan la
purificación posterior de cualquier producto expresado

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Componentes Básicos
del medio de cultivo
Los requerimientos de los medios varían entre líneas celulares, y estas
diferencias son en parte responsables del gran número de formulaciones de
medios de cultivo. Cada componente tiene una función específica

La regulación del pH es crítica para establecer las

Sistemas
condiciones óptimas de cultivo y en general se logra
Tapón
mediante uno de los siguientes sistemas de tamponado:

Sistema de tamponado natural el CO2 gaseoso se equilibra con el contenido de

CO3/HCO3 del medio de cultivo. Los cultivos con
sistema natural de tamponado necesitan de una
atmósfera con 5-10% CO2, generalmente mantenida
por un incubador de CO2. El sistema de tamponado
natural es de bajo costo y no es tóxico

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Componentes Básicos
del medio de cultivo
Los requerimientos de los medios varían entre líneas celulares, y estas
diferencias son en parte responsables del gran número de formulaciones de
medios de cultivo. Cada componente tiene una función específica

La regulación del pH es crítica para establecer las

Sistemas
condiciones óptimas de cultivo y en general se logra
Tapón
mediante uno de los siguientes sistemas de tamponado:

HEPES HEPES, posee una capacidad de tamponado

superior en el rango 7,2-7,4 y no requiere de
una atmósfera gaseosa controlada. El HEPES
es relativamente caro y tóxico para algunos
tipos celulares a concentraciones más altas-
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Componentes Básicos
del medio de cultivo
Los requerimientos de los medios varían entre líneas celulares, y estas
diferencias son en parte responsables del gran número de formulaciones de
medios de cultivo. Cada componente tiene una función específica

La regulación del pH es crítica para establecer las

Sistemas
condiciones óptimas de cultivo y en general se logra
Tapón
mediante uno de los siguientes sistemas de tamponado:

Rojo de Durante el crecimiento celular el medio cambia

fenol de color al cambiar el pH debido a los
metabolitos liberados por las células. A valores
de pH bajos, el rojo de fenol torna el medio
color amarillo, mientras que a valores de pH
superiores torna el medio color púrpura.
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Componentes Básicos
del medio de cultivo
Los requerimientos de los medios varían entre líneas celulares, y estas
diferencias son en parte responsables del gran número de formulaciones de
medios de cultivo. Cada componente tiene una función específica

Las sales inorgánicas en el medio ayudan a mantener el equilibrio

Sales
inorgánicas
osmótico y a regular el potencial de membrana al proporcionar
iones de sodio, potasio y calcio

Se necesitan para la proliferación celular y su concentración determina la

densidad celular máxima alcanzable. La L-glutamina, un aminoácido esencial,
es particularmente importante . La L-glutamina provee nitrógeno para el NAD,
Aminoacidos el NADPH y los nucleótidos y sirve como una fuente de energía secundaria
para el metabolismo.
La suplementación de los medios con aminoácidos no esenciales
estimula el crecimiento y prolonga la viabilidad de las células.
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Componentes Básicos
del medio de cultivo
Los requerimientos de los medios varían entre líneas celulares, y estas
diferencias son en parte responsables del gran número de formulaciones de
medios de cultivo. Cada componente tiene una función específica

Las sales inorgánicas en el medio ayudan a mantener el equilibrio

Sales
inorgánicas
osmótico y a regular el potencial de membrana al proporcionar
iones de sodio, potasio y calcio

Se necesitan para la proliferación celular y su concentración determina la

densidad celular máxima alcanzable. La L-glutamina, un aminoácido esencial,
es particularmente importante . La L-glutamina provee nitrógeno para el NAD,
Aminoacidos el NADPH y los nucleótidos y sirve como una fuente de energía secundaria
para el metabolismo.
La suplementación de los medios con aminoácidos no esenciales
estimula el crecimiento y prolonga la viabilidad de las células.
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Componentes Básicos
del medio de cultivo
Los requerimientos de los medios varían entre líneas celulares, y estas
diferencias son en parte responsables del gran número de formulaciones de
medios de cultivo. Cada componente tiene una función específica

Los carbohidratos en la forma de azúcares son la principal fuente

Carbohidratos de energía. La mayoría de los medios contienen glucosa y
galactosa, sin embargo, algunos contienen maltosa y fructosa.

Son particularmente importantes en medios que no contienen

suero.
Proteínas y Las proteínas y péptidos utilizados con mayor frecuencia son la
péptidos
albúmina, la transferrina y la fibronectina.

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Componentes Básicos
del medio de cultivo
Los requerimientos de los medios varían entre líneas celulares, y estas
diferencias son en parte responsables del gran número de formulaciones de
medios de cultivo. Cada componente tiene una función específica

Son particularmente importantes en los medios libres de

Ácidos
grados y suero ya que generalmente se encuentran presentes en el
lípidos suero.

Las vitaminas no pueden ser sintetizadas en cantidades suficientes

por las células y son, por tanto, suplementos importantes para el
Vitaminas
cultivo de tejidos.
Las vitaminas del grupo B son adicionadas por lo general para la
estimulación del crecimiento.

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Componentes Básicos
del medio de cultivo
Los requerimientos de los medios varían entre líneas celulares, y estas
diferencias son en parte responsables del gran número de formulaciones de
medios de cultivo. Cada componente tiene una función específica
Los medios libres de suero suelen suplementarse con
oligoelementos. Oligoelementos como el cobre, zinc, selenio y los
intermediarios del ácido tricarboxílico son elementos químicos que
Oligoelementos se necesitan en minúsculas cantidades para el correcto
crecimiento celular

Si bien no son necesarios para el crecimiento celular, los

antibióticos suelen utilizarse para controlar el crecimiento de
Antibióticos bacterias y hongos contaminantes. No se recomienda el uso
rutinario de antibióticos para el cultivo celular ya que pueden
enmascarar la contaminación por micoplasma y bacterias
resistentes. Además, los antibióticos pueden interferir en el
metabolismo de células sensibles.
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Componentes Básicos
del medio de cultivo
Los requerimientos de los medios varían entre líneas celulares, y estas
diferencias son en parte responsables del gran número de formulaciones de
medios de cultivo. Cada componente tiene una función específica
Los medios completos de crecimiento recomendados para ciertas líneas
celulares requieren de componentes adicionales que no se encuentran
presentes en los medios basales ni en el suero: hormonas, factores de
Suplementos crecimiento y substancias de señalización

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SUERO EN LOS MEDIOS

El suero es uno de los componentes más importantes de los medios de cultivo

celular y sirve como fuente de aminoácidos, proteínas, vitaminas
(particularmente vitaminas liposolubles como la A, D, E y K), carbohidratos,
lípidos, hormonas, factores de crecimiento, minerales y oligoelementos.

El suero de ternero o feto bovino suele utilizarse para propiciar el crecimiento de

células en cultivo

El suero fetal es una fuente rica en factores de crecimiento y es apropiado para el

clonado celular y el crecimiento de células delicadas

18
SUERO EN LOS MEDIOS

19
 La elección del medio de
Criterios para la selección de
cultivo es extremadamente
importante, y afecta medios
significativamente el éxito
de los experimentos de
cultivos celulares

Tipo de recursos
propósito del
células a ser disponibles en
cultivo
cultivadas el laboratorio

20
 Medios de cultivo celular
más comunes
Medio esencial mínimo de Eagle (del inglés, EMEM)

EMEM fue uno de los primeros medios de amplio uso y fue

formulado por Harry Eagle a partir de un medio basal más
simple. El EMEM contiene una solución salina equilibrada,
aminoácidos no esenciales y piruvato de sodio. Está
formulado con una concentración de bicarbonato de sodio
reducida (1500 mg/l) para usar con 5% de CO2.

21
 Medios de cultivo celular
más comunes
Medio de Eagle modificado por Dulbecco (del inglés, DMEM))

El DMEM tiene casi el doble de concentración de

aminoácidos y cuatro veces la cantidad de vitaminas que el
EMEM, así como nitrato férrico, piruvato de sodio y algunos
aminoácidos suplementarios.

El DMEM fue utilizado en un principio para el cultivo de

células madre de embrión de ratón. Ha demostrado ser
ampliamente aplicable en estudios de células primarias
de ratón y de pollo, de formación de placa viral y de
inhibición por contacto.
22
 Medios de cultivo celular
RPMI-1640 más comunes
l RPMI-1640 usa un sistema de tampón de bicarbonato y
difiere de la mayoría de los medios de cultivo de células de
mamíferos en que su pH típico es de 8.

El RPMI-1640 permite el crecimiento de una amplia

variedad de células en suspensión y crecidas en
monocapa..
Si se lo suplementa adecuadamente con suero o un remplazo
adecuado del suero, el RPMI-1640 tiene un amplio rango de
aplicaciones para células de mamíferos, incluyendo el cultivo de
linfocitos humanos recién extraídos, protocolos de fusión y el
crecimiento de células híbridas.
23
 Medios de cultivo celular
más comunes
Medio Dulbecco modificado por Iscove(del inglés, IMDM)

El IMDM es un medio sintético altamente enriquecido apto para los

cultivos de células de proliferación rápida y de alta densidad

Diversos estudios han demostrado que el IMDM permite

cultivar linfocitos B de ratón, tejido hematopoyético de
médula ósea, células B estimuladas con lipopolisacárido,
linfocitos T y una gran variedad de células de hibridoma.

24
Thanks!

25
 Referencias

✘ Morgan J, Morton H, Parker R. Nutrition of animal cells in tissue culture; initial studies on a
synthetic medium. Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1-8 pubmed
✘ Kerbel R, Blakeslee D. Rapid adsorption of a foetal calf serum component by mammalian cells
in culture. A potential source of artifacts in studies of antisera to cell-specific antigens.
Immunology. 1976;31:881-91 pubmed
✘ Sula K, Draber P, Nouza K. Addition of serum to the medium used for preparation of cell
suspensions as a possible source of artifacts in cell-mediated reactions studied by means of
the popliteal lymph node test. J Immunogenet. 1980;7:483-9 pubmed
✘ Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Commercial serum-free media:
hybridoma growth and monoclonal antibody production. J Immunol Methods. 1991;145:175-
83 pubmed
✘ Barnes D, Sato G. Methods for growth of cultured cells in serum-free medium. Anal Biochem.
1980;102:255-70 pubmed
✘ Iscove N, Melchers F. Complete replacement of serum by albumin, transferrin, and soybean
lipid in cultures of lipopolysaccharide-reactive B lymphocytes. J Exp Med. 1978;147:923-3

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