Selenito Caldo

Medio de enriquecimiento para el aislamiento de Salmonella spp. a partir de materiales clnicos, especialmente heces.

Fundamento
Este caldo selectivo favorece el crecimiento de Salmonella spp.
En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano, la lactosa es
el hidrato de carbono fermentable, el selenito de sodio inhibe la flora Gram positiva y la mayora de la flora entrica
excepto Salmonella spp. durante las primeras 8-12 horas de incubacin.
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones
Peptona 5.0 Suspender 23 g del polvo en un litro de agua
destilada. Mezclar bien y calentar ligeramente hasta
su disolucin completa. Evite el calentamiento
excesivo.
No esterilizar en autoclave.
Distribuir en tubos estriles un volumen no menor a
5 ml. Se recomienda guardar en heladera si no se
usa de inmediato.
Lactosa 4.0
Fosfato de sodio 10.0
Selenito de sodio 4.0
pH final: 7.0 0.2
Siembra
-Materia fecal: a un tubo con 10-15 ml de caldo selenito, agregar 1-2 ml de una suspensin de materia fecal.
-Tejido infectado: macerar 1-2 g de tejido en 10-15 ml de caldo selenito, usando una varilla estril.
-Orina: a un tubo con unos 5 ml de caldo selenito doble concentracin, agregar igual volumen de orina.

Incubacin
A 35-37 C, durante 16-24 horas, en aerobiosis.
Luego, subcultivar en medios selectivos: Salmonella Shigella Agar (B02-138-05/06), Hektoen Entrico Agar (B02-110-
05/06), Verde Brillante Agar (B02-124-05/06), Mac Conkey Agar (B02-114-05/06).

Resultados
Microorganismos Crecimiento
Salmonella enteritidis ATCC 13076 Bueno
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Bueno
Escherichia coli ATCC 25922 Regular-Escaso
Proteus mirabilis ATCC 43071 Regular-Escaso























Mac Conkey Agar.
Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil desarrollo, aerobios y anaerobios
facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clnicas, de agua y alimentos. Todas
las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
Fundamento
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el
hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben
el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva.
Por fermentacin de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador
de pH (rojo neutro), la absorcin en las colonias, y la precipitacin de las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones
Peptona 17.0
Suspender 50 g del polvo por litro de agua destilada.
Reposar 5 minutos y mezclar hasta uniformar.
Calentar suavemente y hervir 1 a 2 minutos hasta
disolver. Esterilizar en autoclave a 121C durante 15
minutos.
Pluripeptona 3.0
Lactosa 10.0
Mezcla de sales biliares 1.5
Cloruro de sodio 5.0
Agar 13.5
Rojo neutro 0.03
Cristal violeta 0.001
pH final: 7.1 0.2
Siembra
- Sembrar en superficie.
- Utilizando la tcnica de Pour Plate: sembrar 1 ml de muestra y agregar aproximadamente 15 ml de medio de cultivo
fundido y enfriado a 45-50 C.
Incubacin
Durante 18-48 horas, a 35-37 C, en atmsfera aerbica
Resultados
Microorganismos Colonias
Escherichia coli ATCC 25922 Rojas con halo turbio
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas mucosas
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Incoloras, transparentes
Shigella flexneri ATCC 12022 Incoloras, transparentes
Proteus mirabilis ATCC 43071 Incoloras, transparentes
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Diminutas, incoloras, opacas
Caractersticas del medio
Medio preparado: rojo prpura


Salmonella Shigella Agar.
Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies de Shigella spp. a partir de
heces, alimentos y otros materiales en los cuales se sospeche su presencia.

Fundamento
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial.
La selectividad, esta dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas,
de la mayora de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp.
Es diferencial debido a la fermentacin de la lactosa, y a la formacin de cido sulfhdrico a partir del tiosulfato de
sodio.
Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo
el indicador de pH, obtenindose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo.
Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de cultivo, y
producen colonias transparentes.
La produccin de cido sulfhdrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formacin de sulfuro de
hierro.
Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar previamente la muestra en Selenito caldo (B02-120-05).
Frmula (en gramos por litro) Instrucciones
Pluripeptona 5.0
Suspender 60 g del polvo por litro de agua destilada.
Reposar 5 minutos y mezclar hasta homogeneizar.
Calentar a ebullicin durante 2 o 3 minutos. NO
ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Enfriar a 45-50C y
distribuir unos 20 ml por placa. Secar la superficie
del medio unos minutos en la estufa.
Extracto de carne 5.0
Lactosa 10.0
Mezcla de sales biliares 8.5
Citrato de sodio 8.5
Tiosulfato de sodio 8.5
Citrato frrico 1.0
Agar 13.5
Verde brillante 0.00033
Rojo neutro 0.025
pH final: 7.0 0.2
Siembra
Sembrar por estriado la superficie del medio de cultivo.
Recomendaciones, se aconseja sembrar en forma conjunta una placa de agar E.M.B. (B02-101-05) o de agar Mac
Conkey (B02-114-05).
Incubacin
Durante24-48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
Resultados
Microorganismos Colonias
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Transparentes, centro negro
Shigella flexneri Incoloras
Shigella sonnei Incoloras
Proteus mirabilis ATCC 43071 Transparentes, centro negro
Escherichia coli ATCC 25922 Rosadas a rojas
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas cremosas y mucosas
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Incoloras, de muy escaso crecimiento
Caractersticas del medio
Medio preparado: rojo naranja.






CASENAS
Introduccion
Las protenas de la leche se dividen en tres grupos: Las casenas, las protenas
del lactosuero y las que forman parte de la membrana del glbulo graso.
Estas ltimas representan solamente del orden del 1% del total de la
protenas de la leche

Las casenas son las principales protenas de la leche. Se sintetizan
exclusivamente en la glndula mamaria, y en la leche se encuentran en su
mayor parte formando agregados multimoleculares conocidos como
micelas de casena. En la leche de vaca, la casenas representan alrededor
del 80% del total de protenas, es decir, de 25 a 28 gramos por litro de leche.
En la leche humana la presencia de protenas del lactosuero es mucho
mayor, de tal forma que las casenas son solamente del orden de la mitad de
las protenas totales, entre 5 y 8 gramos por litro.