DIAGNOSTICO PRENATAL

DE ALTERACIONES
GENETICAS
PRESENTADO POR:
- LIC.T.M. Sharol Aliaga Crdova

INTRODUCCION

Los anlisis genticos permiten predecir el

riesgo de padecer enfermedades genticas y
en ocasiones estos resultados son de gran
valor para establecer consejos genticos a
familiares y parientes del afectado.

Los diagnsticos genticos son de enorme

potencial mdico ya que se pueden realizar en
el feto en gestacin o en embriones producidos
tras la fecundacin in vitro, previa a la
implantacin en el tero materno. De esta
manera se analiza la presencia de alteraciones
cromosmicas y genticas en embriones de
manera muy rpida.

Alrededor de un 6% de los recin

nacidos presenta algn tipo de
anomala congnita.
Entre stas, las alteraciones
cromosmicas son las responsables
de alrededor de un 2,5% de la
mortalidad infantil.
Una creciente batera de pruebas
genticas se van incorporando como
herramientas de gran valor
diagnstico precoz para un elevado
porcentaje de anomalas
cromosmicas.

Conceptos fundamentales

Gen (segmento de ADN que contiene la informacin

para sintetizar una cadena peptdica)
Genotipo (constitucin gentica de un individuo)
Fenotipo (apariencia, fsica, bioqumica y fisiolgica
de un individuo, que es resultado de la interaccin del
ambiente y del genotipo)

Locus gentico
Alelos
dominante
recesivo
codominante
Homocigoto
Heterocigoto

Enfermedades hereditarias
Malformaciones congnitas
Mendeliana. Monognica (AD,AR,LX)
Cromosmica (numricas, estructurales)
Multifactorial (polignica, predisposicin)
Espordica. Ambiental.
Desconocida

Al inicio
El gineclogo, determinaba pruebas
en determinadas circunstancias:
Edad materna avanzada
o Anomalas ecogrficas
o Antecedentes familiares
o Hijos anteriores con anomalas
genticas
o Abortos recurrentes
o Triple screening alterado o exposicin
a ciertos teratgenos.
o

Qu es el diagnstico
gentico prenatal?

Es el conjunto de acciones clnicas que

tienen como fin diagnosticar antes del
parto cualquier anomala congnita.
El diagnstico gentico prenatal esta
indicado siempre y cuando exista un
riesgo elevado de presencia de alguna
anomala congnita o de transmisin de
una alteracin cromosmica o de una
enfermedad gentica.

A qu parejas puede
beneficiar el DGP?
1.

2.

3.
4.

5.

Identificacin del sexo del embrin en

portadoras de enfermedades genticas
ligadas al cromosoma sexual X.
Diagnstico de enfermedades
monognicas autosmicas.
Portadores de anomalas cromosmicas.
Parejas con abortos espontneos
recurrentes.
Parejas con edad reproductiva elevada.

A qu parejas puede
beneficiar el DGP?
6.

7.
8.

Parejas provenientes de ICSI (inyeccin

intracitoplasmtica del espermatozoide) por
factor masculino severo en los cuales se ha
detectado un incremento significativo de
anomalas cromosmicas en los
espermatozoides.
Parejas con fallos repetidos de implantacin
en ciclos de FIV (fecundacin in vitro).
Parejas en los que se sospecha de la
existencia de un mosaicismo gonadal, es
decir que el testculo o el ovario tienen algn
grupo celular con diversas alteraciones
genticas.

A qu parejas puede
beneficiar el DGP?
9.

10.

Individuos de riesgo de transmitir una

mutacin de un gen determinado de
susceptibilidad a padecer algunos
cnceres hereditarios.
Parejas que pretenden tener otro hijo
que pueda ser un donante plenamente
compatible de clulas madres
hematopoyticas de cordn umbilical (o
mdula sea) para otro hijo con una
enfermedad hematolgica.

Diagnostico prenatal:
Presencia de un cambio gentico particular en el
individuo
Diferente METODOS DE ESTUDIO

1. Estudio directo
del ADN
(Acido
Desoxiurribonucleico)

2. Estudios de
los cromosomas.

3. Estudio del
producto
o protena del
gen de inters.

Estudio directo
del ADN
(Acido
Desoxiurribonucleico)

El estudio directo del ADN

se realiza a travs de
tcnicas moleculares para
detectar mutaciones
producidas por cambios
de pares de bases en la
secuencia gentica.
Se realiza por:
Equipos

de secuenciacin
automatizados
Reaccin en cadena de
polimerasa (PCR) para
producir ADN para su
anlisis

2. Estudios
De los
cromosomas.

Los cromosomas
representan un importante
material para anlisis
cuando se sospecha una
anomala como causa de
una situacin determinada.
Uso de tcnicas de
citogentica molecular:
FISH

(Hibridacin in situ por

fluorescencia, siglas en
ingls)
Cariotipo espectral, en
donde podemos detectar
anomalas y cambios no
visibles, con tcnicas
convencionales.

3. Estudio del
Producto
o protena del
gen de inters

El estudio de los
productos codificados por
los genes, las protenas,
se basa en el anlisis de
estos productos alterados
que puede realizarse por
varios mtodos.
Por ejemplo,
una enzima cuya
reactividad qumica ha
sido alterada
por un cambio gentico.

MTODOS INVASIVOS DE
DIAGNSTICO PRENATAL

Biopsia de
vellosidades coriales
Amniocentesis
Cordocentesis
(Muestra de sangre
fetal)
Diagnstico gentico
Preimplantacin
Cariotipo en restos
abortivos
MLPA PCR
cuantitativa
fluorescente (QF-PCR)

BIOPSIA DE VELLOSIDADES
CORIALES

La BVC, consiste en la introduccin de un catter, aguja o

instrumentos para biopsia en el interior del corion
frondoso por va transcervical o transabdominal y as
obtener una muestra para diagnstico prenatal.

La muestra es adecuada para el estudio en el 95% de los

casos.

La BVC se puede realizar desde las semanas 7 y 8 de

gestacin; sin embargo, el momento ptimo es entre las
semanas 10 y 12.
El cariotipo fetal se obtiene en el primer trimestre del
embarazo, cuando la interrupcin tiene menos
consecuencias.

Vellocidades coriales- embriologa

Biopsia de Vellocidades coriales

BIOPSIA DE VELLOSIDADES
CORIALES
Preparacin y procesamiento

Realizar una historia clnica que incluya rbol genealgico

y dar un consejo gentico basado en los antecedentes
familiares y de embarazos anteriores.

Se deben evaluar los riesgos y las limitaciones del

procedimiento e informar a la pareja de ello, para que
firmen la hoja de consentimiento.

Tambin se debe realizar un ultrasonido para evaluar la

posicin del corion y la situacin del embrin y, por
ltimo, preparar el laboratorio para procesar la muestra.

BIOPSIA DE VELLOSIDADES
CORIALES
Preparacin y procesamiento

Las vellosidades pueden ser procesadas

citogenticamente con una preparacin directa, cuyo
resultado est disponible en un lapso de 3 a 4 das, o a
travs de cultivo de tejido corial que por lo comn
requiere de 6 a 8 das.
Es recomendable esperar los dos resultados, antes de
dar una conclusin definitiva.
El proceso citogenetico nos da resultados rpidos sobre
el citotrofoblasto y minimiza la contaminacin debida a la
decidua materna.
El cultivo del tejido corial est sujeto a la contaminacin
con clulas maternas, pero es mejor para identificar y
determinar discrepancias que pudieran existir entre el
citotrofoblasto y el estado fetal.

BIOPSIA DE VELLOSIDADES
CORIALES
Tcnica

Transcervical

Evaluacin ecogrfica, para confirmar la presencia de

actividad cardaca fetal.
Biometra para precisar la edad gestacional.
Determinacin de la localizacin del corion.
Estado de la vejiga urinaria y posicin del tero.

BIOPSIA DE VELLOSIDADES
CORIALES
Tcnica

Transabdominal

La muestra que se obtiene es de mejor calidad.

La incidencia de complicaciones es
menor y la paciente tolera mejor el procedimiento.
El procedimiento se puede hacer con una o dos agujas.

BIOPSIA DE VELLOSIDADES
CORIALES

Se ha sugerido que la BVC puede estar asociada

con una mayor incidencia de defectos en las
extremidades y del sndrome de hipogenesia
buco-mandibular, cuando se realiza antes de la
semana 9.

El mecanismo mediante el cual la BVC pudiera

originar una malformacin fetal no est claro, se ha
sugerido que la ruptura placentaria puede causar
hipoperfusin, embolismo placentario hacia los
vasos fetales o vasoconstriccin, con lo cual se
disminuye el riego sanguneo necesario para el
desarrollo del rgano o extremidad; sin embargo,
ninguna de estas teoras se han podido demostrar.

AMNIOCENTESIS

Consiste en la puncin de la membrana amnitica con

una aguja para extraer o introducir lquidos en la cavidad
amnitica bajo visin ecogrfica continua, con fines
diagnsticos y/o teraputicos.

Esta exploracin puede ser hecha a partir de las

semanas 8 y 9 de gestacin hasta el trmino; sin
embargo, para el diagnstico gentico, se realiza entre
las semanas 14 y 18, aunque algunos prefieren realizarla
entre las semanas 16 y 20.

Es la tcnica ms extendida y a medida que se va

reduciendo el riesgo de aborto asociado a
amniocentesis (menos del 1%).

http://www.circagen.com/pruebas.htm

AMNIOCENTESIS

Indicaciones:

AMNIOCENTESIS
Anlisis cromosmico

Debido a que las clulas suspendidas en el lquido

amnitico no crecen y no se dividen activamente,
necesitan ser cultivadas y estimuladas para crecer y
dividirse, en un proceso que dura de 7 a 14 das.

Posterior al crecimiento, la membrana externa se

rompe y libera los cromosomas que son teidos y
visualizados con la tcnica de bandas. Luego se
agrupan en 23 pares, para ser examinados y
contados y as poner en evidencia posibles
deleciones, traslocaciones y mosaicismo, as como
alteraciones ligadas al cromosoma sexual. Tambin
permite determinar el sexo del feto.

AMNIOCENTESIS
Alteraciones

Trisomas

13 (sndrome de Patau)
18 (sndrome de Edward)
21 (sndrome de Down)
sndrome de Cri-du-Chat (grito del gato)
47XXY (sndrome de Klinefelter)
Trisoma 16

Monosoma y las alteraciones

ligadas al cromosoma sexual

45X (sndrome de Turner)

Hemofilia
Distrofia muscular de Duchenne.

AMNIOCENTESIS
Tcnica

Se realiza una historia clnica detallada, con nfasis

en los aspectos genticos, para dar un consejo
gentico que evale los riesgos, limitaciones y
beneficios.
Se debe explicar el procedimiento a seguir, para
obtener un consentimiento escrito firmado por la
pareja.
Evaluacin ecogrfica con la finalidad de confirmar:
actividad cardaca fetal, biometra para determinar
edad gestacional, crecimiento y posicin del feto,
localizacin placentaria, evaluar la cantidad de
lquido amnitico para identificar un lago donde
punzar.
En la ecosonografa se debe hacer estudio de
normalidad anatmica fetal.

AMNIOCENTESIS

AMNIOCENTESIS
Fracasos

Imposibilidad de extraccin.- El fracaso en la

obtencin del lquido amnitico puede ocurrir
por diversas causas, entre las que se destacan:
obesidad.

Fracaso en el cultivo celular.- Puede fracasar

si la muestra est contaminada y hay
proliferacin bacteriana, porque las clulas no
responden a las condiciones del laboratorio o
bien el volumen de la muestra es insuficiente.

AMNIOCENTESIS
Fracasos

Cultivo de clulas maternas.Contaminacin con clulas maternas.En

estos casos, las clulas que se examinan
son las maternas en lugar de las fetales, lo
que ocasiona un diagnstico errneo.

Pseudomosaicismo.- Se presenta cuando

es un solo cultivo o clon celular y no es
representativo del cariotipo fetal, por lo que
carece de significado clnico

Amniocentesis

CORDOCENTESIS

La cordocentesis o lo que es lo mismo, la

funiculocentesis, es otra de las pruebas invasivas que
se realizan en ltimo lugar por su complejidad y riesgos,
como la biopsia corial.

Consiste en la puncin de uno de los vasos del cordn

umbilical, preferiblemente, de la vena umbilical. Se
introduce la aguja, guiada mediante visin ecogrfica
continua, a travs del abdomen materno dentro del
tero y se busca punzar alguno de los vasos
sanguneos del cordn fetal para obtener la sangre.

Solo se realiza en centros con experiencia

especializada en el procedimiento e igualmente sirve
para obtener clulas para estudios de ADN y protenas

CORDOCENTESIS

Realizacin: 19 21 semanas
guiada por ecografia del cordn
umbilical y extraccin de sangre
fetal

Diagnostico rpido (2-3 das)

Cariotipo procedente de sangre

fetal. Indicada cuando no se
obtengan resultados concluyentes
por amniocentesis o cuando adems
se quieran obtener otros datos
importantes de la sangre fetal
(anticuerpos)

CORDOCENTESIS

- PROCEDIMIENTO

Identificacin de la base de insercin

del cordn en la placenta y
determinacin del punto de acceso a la
base del cordn sin interposicin de
partes fetales (punto ptimo de
puncin).
Asepsia de la piel con solucin
bactericida de amplio espectro.
Puncin ecoguiada hasta la base del
cordn con aguja de 20 G.
Extraccin del mandril o estilete.
Aspiracin con jeringa de insulina, de 1
a 2 cc de sangre fetal.
Extraccin de la aguja mediante control
ecogrfico.

PROCEDIMIENTO
CORDOCENTESIS

En la muestra de sangre fetal se

puede realizar el estudio del
cariotipo de linfocitos que tienen
una evolucin gentica rpida, por
lo que el estudio demora de 2 a 3
das.

INDICACIONES DE
CORDOCENTESIS

GENETICA: Estudios cromosmicos Y

Anlisis de ADN
1. Embarazada de 35 aos o ms para el
momento del parto.
2. Riesgo elevado en el despistaje srico de
sndrome de Down.
3. Resultados anormales de alfa-feto-protena
srica.
4. Antecedente personal y/o familiar de
defecto gentico, malformacin congnita o
de anomalas ligadas al cromosoma sexual.

INDICACIONES DE
CORDOCENTESIS
5. Padres portadores de defecto gentico.
6. Malformacin fetal actual diagnosticada
por ultrasonido, compatible con anomala
cromosmica.
7. Prdida fetal recurrente.
8. Amniocentesis que resulta en un
mosaicismo.
9. Sndrome X frgil.
10. Investigacin de la paternidad

INDICACIONES DE
CORDOCENTESIS

Infecciones fetales

Isoinmunizacin Rh

Trombocitopenias: Las mujeres con trombocitopenia

idioptica tienen 15% de posibilidad de tener un neonato con
disminucin del contaje plaquetario. Se puede iniciar terapia
anteparto

Hemoglobinopatias: Establecer si el feto es portador o

padece de drepanocitosis, talasemia, esferocitosis u otros

Inmunodeficiencias

Homeostasis fetal (Eq Acido-Base, gases)

Cordocentesis
VENTAJAS:
Diagnostico rpido
Cultivo rpido de celulas en
sangre fetal
Distingue entre verdaderos y
falsos mosaicos.
DESVENTAJAS:
Entrenamiento especial
Prdida fetal 1-2 %
Infeccin
Hematoma fetomaterno
Sangrado de cordn autolimitado

Diagnstico prenatal

Diagnostico
preimplantacional
Determinacin del sexo fetal
Diagnstico de enfermedades mendelianas
Alteraciones cromosmica

Es un procedimiento que se realiza in vitro, a

partir del embrin de tres das de fertilizado que
contiene
aproximadamente
8
blastmeras
totipotenciales e indiferenciadas o del preembrin
de 5 das, en el cual las clulas se han
diferenciado en una masa celular interna que va a
formar el embrin y una masa celular externa que
forma el trofoblasto.
M.T.Calvo. Alcaiz

Diagnstico preimplantacional

Definicin

Es una tcnica diagnstica que permite seleccionar los

embriones gentica y cromosmicamente normales
antes de implantarlos en el tero materno aumentando
considerablemente las tasas de embarazo, reduciendo
el riesgo de un aborto espontneo y evitando la
enfermedad gentica familiar, y, por consiguiente, el
tener que tomar la dura decisin por parte de la pareja

de un aborto teraputico.

INDICACIONES
Alto riesgo de transmisin de anomalas genticas
Portadores de enfermedades monognicas
Portadores de anomalas cromosmicas

Reproduccin asistida
Abortos de repeticin
Edad materna elevada
Factor masculino

Nuevasindicaciones
Compatibilidad HLA
Riesgo de enfermedades de comienzo tardo
Predisposicin a cncer

ETAPAS
1.- La creacin de embriones en el laboratorio
con tcnicas de ICSI (Inyeccin
intracitoplasmtica de espermatozoide).
2.- La extraccin de una o ms clulas de cada
embrin sin que se lesione su desarrollo
posterior. Existen 3 sistemas utilizados en la
actualidad:

Biopsia del corpsculo polar del ovocito

Biopsia de Blastmera
Biopsia del blastocisto

3.- Los embriones se mantienen en cultivo hasta

conocer el diagnstico, mximo 48 h.,
momento en que se transferirn los
embriones sanos al tero materno.

Sistemas utilizados para el DGP

Biopsia del corpsculo polar del ovocito:

Se generan durante la ovognesis, y no intervienen en

la formacin del embrin.

Se usa para determinar el estado gentico del primer

cuerpo polar que, es complementario del contenido en
el proncleo del oocito u vulo.

Aplicable para alteraciones de origen materno

(aneuploidas y anomalas cromosmicas de origen
materno), autosmicas recesivas. Ejm. Fibrosis quistica

Se usa la tcnicas de micromanipulacin semejantes a

las usadas en la inyeccin intracitoplasmtica de
espermatozoide y tiene la ventaja de no haber
posibilidad de dao embrionario porque se realiza
antes de que ocurra la fertilizacin. Los resultados se
obtienes en menos de 24 horas, y se puede determinar
cules son los ovocitos que no portan enfermedades
genticas.

Sistemas utilizados para el

DGP
Biopsia de Blastmera:

Analizar una clula de cada embrin

obtenido por un procedimiento ICSI.

Dichos embriones se mantienen en cultivo

y despues de 3 das que siguen a la
fertilizacin in vitro, mediante tcnicas de
micromanipulacin, en las que, del
preembrin de 4 u 8 clulas, se aspiran una
o dos blastmeras para el estudio gentico.

Se realiza el diagnstico gentico de cada

blastmera, y se esperan los resultados.

Proceso

Diagnstico preimplantacional

espermatozoide

ovocito

Da 0

M.T.Calvo.

Diagnstico preimplantacional

Inyeccin Intracitoplasmtica de espermatozoide (ICSI)

ovocito

espermatozoide

M.T.Calvo. Alcaiz

Proceso

espermatozoide

Da +1

Da
+4

Da +2

ovocito

Da 0

Da +3

Diagnstico preimplantacional

Extraccin de una
blastmera

M.T.Calvo. Alcaiz

Qu sucede con los embriones?

Se transfieren, con ayuda de un catter, 1-2 embriones seleccionados,
al tero materno y se protege con progesterona.
A los 10-12 das de la transferencia, si el embarazo es positivo se
proseguir el tratamiento con progesterona.
Los embriones no transferidos podrn ser congelados y transferidos
en ciclos sucesivos. Sin embargo su supervivencia es muy baja por lo que
son eliminados o en ocasiones, donados.

Qu cromosomas estudiamos?

Diagnstico preimplantacional

Mnimo 9 cromosomas

Cromosomas analizados

% fetos alteraciones cromosmicas

28 %

47% *

9 (13,15,16,17,18,21,22,XY)

70% **

12 (8,13,14,15,16,17,18,20,21,22,XY)

80%

* Staessen et al 2004 y Plateau y al 2005

** Giamaroli et al 1999 y Munne et al 2003

TECNICA EMPLEADA EN EL
LABORATORIO DE GENETICA
Hibridacin fluorescente in situ (fluorescence in-situ
hybridization), FISH:

Posibilita la deteccin de ms procesos (sexo de los

embriones en enfermedades hereditarias ligadas al
sexo, alteraciones cromosmicas o aneuploidas el
sndrome de Down y anormalidades cromosmicas
estructurales traslocaciones).

PCR

Cuando se trata de enfermedades debidas a un solo

gen, que permite detectar una mutacin en el DNA.
La PCR consiste en la amplificacin de una
determinada secuencia de DNA para obtener un
nmero de copias suficiente de la misma que permita
su anlisis.

Diagnstico preimplantacional

FISH

Hibridacin fluorescente in situ.

Es la que usa el ADN desnaturalizado y una de sus
cadenas se coloca junto con una molcula fluorescente
que sirve de marcador de la enfermedad. Si la cadena
posee el gen, se unen y se puede concluir que el gameto
o embrin puede padecer la enfermedad.

Diagnstico por FISH

Diagnstico preimplantacional

13

1 hibridacin:

18

13 lsi

rojo

16 a satlite

aqua

18 a satlite

azul

21 lsi
22 lsi

21

16

verde
amarillo

22

Diagnstico preimplantacional

Diagnstico por FISH

13 +

Diagnstico preimplantacional

Diagnstico por FISH

18 +

Diagnstico preimplantacional

Diagnstico por FISH

21 +

Edad materna

Diagnstico preimplantacional

Edad Materna

% embriones alterados

35-37

40-48%

38-41

50-55%

41-45

65%

Riesgo de tener un nio afectado de alguna

anomala cromosmica:
1/385 a los 30 aos
1/179 a los 35 aos
1/63 a los 40 aos
1/19 a los 45 aos

M.T.Calvo. Alcaiz

Diagnstico preimplantacional

Gestacin en DGPI

La probabilidad xito cada implantacin es limitada: (1540%)

Insuficientes vulos o embriones para analizar

No todos los vulos fecundados crecern bien

Algunos embriones pueden daarse al extraer
material

No todos los embriones sern aptos para

transferir al tero
No todos los embriones sanos se implantan

correctamente
en el tero
M.T.Calvo. Alcaiz

DGPI + D. prenatal

Diagnstico preimplantacional

S.

Porque:
El DGPI no es una tcnica alternativa al diagnstico prenatal.

Se aconseja siempre tras un ciclo de FIV y DGPI realizarse un

diagnstico prenatal (amniocentesis o vellosidades coriales) ya
que presenta a una fiabilidad del 92% .
En la actualidad est limitado el nmero de cromosomas a
analizar.

Alternativas al DGPI

Diagnstico preimplantacional

Diagnstico prenatal en embarazos naturales (sin recurrir a

fecundacin in vitro)
Inseminacin artificial con gametos donados
Adopcin
Embarazo natural confiando en las probabilidades de que el

nio nazca sano

Diagnstico preimplantacional

Biolgicos:

* Tcnica que no precisa mas de

48 h.
* Una sola clula (ocasionalmente
2) para estudiar

Tcnicos:

* Conocimiento de la mutacin
familiar
* Desarrollo de tcnicas mas
rpidas y seguras

Lmites del DGPI

Diagnstico preimplantacional

Peligroso para el embrin?

Proceso complejo, preciso y ajustado en el tiempo, pero en

manos expertas

No evidencia cientfica de que afecte negativamente a la

evolucin del embrin

gracias