Hernndez Villa Norma Gabriela

Microbiologa General

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CUESTIONARIO TERCER PARCIAL Laboratorio

1.- Defina qu es actividad de agua (aw). Es la razn entre la presin de vapor del aire en equilibrio con una sustancia o solucin y la presin de vapor, a la misma temperatura del agua pura, es as como se expresa la disponibilidad del agua que tenga un organismo a su disposicin para crecer, y no solo depende del contenido de agua en el ambiente, sino tambin de la concentracin de solutos en ella, ya que las sustancias disueltas tiene una gran afinidad por el agua, lo que hace que sta sea inutilizable por los organismos. Es la cantidad de agua metablicamente disponible 2.- Qu es un organismo xeroflico? Qu es un organismo xerotolerante? En qu condiciones crece cada uno? De un ejemplo.
Organismo xeroflico xerotolerante Definicin Organismos que crecen a altas concentraciones de solutos (Bajas cantidades de Aw) Los organismos que no requieren altas concentraciones de solutos para crecer pero que pueden soportarlas. Ejemplo Tetragenococcus shalophila Bacterias como Staphylococcus aureus Hongos

Se deberan sembrar en medios con baja actividad de agua. Si crecen, es necesario sembrar en un medio a ms alta actividad para comprobar si son xeroflico o xerotolerantes. 3.- Qu es la presin osmtica? Qu estructura compensa y soporta la presin osmtica en una clula bacteriana? La presin osmtica es la presin ejercida sobre una membrana semipermeable sometida a diferentes concentraciones de soluto hasta llegar al equilibrio. La membrana citoplsmica se ve afectada por cambios en la concentracin osmtica fuera de la clula. Las clulas por su alta concentracin de componentes celulares tienen una presin osmtica mayor que el medio de cultivo. Siempre hay una tendencia natural de entrada de agua a la clula y de mantenerse en un estado de turgencia (fenmeno por el cual las clulas al absorber agua, se hinchan, ejerciendo presin contra las membranas celulares, las cuales se ponen tensas) La pared celular la protege del choque osmtico. Para adaptarse a los ambientes con altas concentraciones de solutos o baja actividad de agua, los organismos tienen que controlar la prdida del agua citoplsmica debida a la elevada osmolaridad del ambiente incrementando su concentracin de solutos internos, ya sea bombeando iones hacia el interior de la clula o a travs de la acumulacin de un soluto compatible en su citoplasma, el cual no debe inhibir el metabolismo celular y puede ser sintetizado por el microorganismo (azcares, polialcoholes, etc.) o tomado del exterior y acumulados activamente (K+, betana). La pared celular compensa y soporta la presin osmtica. Los micoplasmas son clulas bacterianas sin pared celular. 4.- Explique en qu consisten los fenmenos de plasmlisis y plasmptisis.
plasmlisis plasmptisis Fenmeno en el cual el agua que se encuentra dentro de la clula sale al medio hipertnico, por lo que la clula se deshidrata y muere. Fenmeno por el cual las clulas al absorber agua, se hinchan, ejerciendo presin contra las membranas celulares, las cuales se ponen tensas, se rompen y la clula muere.

5.- Definir:
Organismo Osmoflico Osmotolerante Definicin Organismos que requieren de medios con gran osmolaridad. desarrollan en medios hipertnicos Crecen a Alta actividad de Agua (Aw). No requieren de presiones altas para su crecimiento, pero las soportan. Se Ejemplo Vibrio fischeri Staphylococcus aureus

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Haloflico Sacaroflico

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Halobacterium

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Saccharomyces cerevisiae

Organismos que requieren altas concentraciones de sal para vivir Organismo que requere altas concentraciones de azcar para vivir.

6.- Discuta los resultados que observ en su prctica de laboratorio. Resultados de concentracin de NaCl Staphylococcus aureus Presenta una pared celular que representa el 50% del peso molecular de la bacteria y el peptidoglicano funciona como estabilizador osmtico y evita la lisis de la bacteria por al gradiente en la concentracin de sal. Contiene Prolina como soluto compatible. Escherichia coli Es una bacteria Gram (-) la cual en su pared celular consta de una capa muy delgada de peptidoglicana y una membrana externa, a parte de que posee Colina como soluto compatible que le ayuda a resistir la presin osmtica Bacillus megaterium y Bacillus subtilis Posee una capa gruesa de peptidoglicana la cual le proporciona rigidez y resistencia osmtica. Contiene Betana (glicnbetana), un derivado trimetilado de la glicocola (contenida en cianobacterias y en algunas Gram-positivas) como soluto compatible. Micrococcus luteus tiene una gruesa pared celular que puede abarcar tanto como el 50% del materia celular. Contiene Betana (glicnbetana), un derivado trimetilado de la glicocola (contenida en cianobacterias y en algunas Gram-positivas) como soluto compatible. Salmonella typhi. Posee una membrana externa as como una pared delgada de peptidoglicana Sacharomyces cerevisiae y Pichia sp A las levaduras les resultan txicos algunos iones lo que inhibe su crecimiento en este caso el ion Na+. Resultados de concentracin de sacarosa Sacharomyces cerevisiae y Pichia sp La tolerancia que presentan las levaduras a la presin osmtica y por lo tanto resistencia a las altas concentraciones de sacarosa se debe a que algunas de estas levaduras como S. cerevisiae posee una familia multigenica de transportadores de azucares. En las cepas bacterianas se observa nicamente que algunos crecen a determinadas concentraciones de azcares.

Microorganismo Staphylococcus aureus Escherichia coli Bacillus megaterium Bacillus subtilis Micrococcus luteus Salmonella typhi Sacharomyces cerevisiae

Clasificacin NaCl Halofilico moderado Halotolerante Halotolerante Halotolerante Halotolerante Halotolerante No soporta bajas a concentraciones Sacarosa Sacarotolerante Sacarotolerante Sacarotolerante Sacaroflico moderado Sacaroflico moderado Sacarotolerante Sacaroflico

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Pichia sp

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Sacaroflico

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No soporta bajas a concentraciones

7.- Cules son las temperaturas cardinales? Para cada microorganismo existe una temperatura mnima por debajo de la cual no existe crecimiento, una temperatura ptima a la cual el crecimiento es el ms rpido posible y una temperatura mxima, rebasada la cual, no existe crecimiento. Estas tres temperaturas son denominadas temperaturas cardinales. 8.- Mencione la clasificacin de los organismos con base en su temperatura ptima. Mencione un ejemplo en cada caso y dnde encontrara a cada uno.
Clasificacin Psicrfilos Mesfilos Termfilos Hipertermfilos Caractersticas Organismos con temperaturas ptimas de crecimiento por debajo de los 15 C. Ej: Polaromonas vacuolata, flavobacterium. Organismos con temperaturas ptimas de crecimiento entre 15 y 45 C. Ej: E. coli, Bacillus Megaterium Organismos con temperaturas ptimas de crecimiento por arriba de los 45C. Ej. Pyrococcus furiosus, Thermus aquaticus Organismos con temperaturas ptimas de crecimiento por arriba de los 80C. Ej. Sulfolobus acidocaldarius

9.- Qu es un organismo euritrmico? Qu es un organismo estenotrmico? Euritrmico Estenotrmico Organismos que crecen en intervalos de temperatura amplios. Ejemplo: Enterococcus faecalis 0 y 44C Organismos que crecen en intervalos de temperatura estrechos. Ejemplo: Neisseria gonorrhoeae 30 y 38 C

10.- Cules son los mecanismos adaptativos a temperaturas bajas o elevadas extremas que le permiten sobrevivir a los microorganismos? Mecanismo Agrupacin Enzimas Descripcin Entre ms agrupados estn las clulas del centro pueden protegerse mejor que los microorganismos que se encuentran aislados Las enzimas de los organismos termorresistentes difieren en unos cuantos aminocidos que las de los organismos que no lo son, sin embargo, estos cambios propician un plegamiento especial, plenamente homofbico, en la protena que le confiere esa termorresistencia Los puentes salinos interpeptdicos incrementan la capacidad calorfica de la protena y las hace ms resistentes al calor. Los organismos psicroflicos presentan cadenas de cidos grasos insaturados en su membrana, lo que la hace ms fluda, en cambio los termfilos e hipertermfilos poseen en su membrana ac. Grasos saturados lo que le da mayor rigidez a la membrana impidiendo que se fluidice tan fcilmente por accin de la temperatura. Enlaces ter, monocapas lipdicas, y cadenas de isoprenos.

Formacin de puentes de sal Estructura de la membrana citoplsmica En las arqueas

11.- Cul es la importancia biotecnolgica de los productos de los organismos extremfilos? Las enzimas de estos microorganismos son ms resistentes y que las enzimas de los organismos mesfilos,lo que prolonga su vida til. Esto nos permite utilizarlas en procesos biotecnolgicos, catalizando reacciones a temperaturas extremas, como lo es el caso de la DNApol de Thermus acuaticus, que vive en aguas termales entre 55-88C. Esta plimerasa, llamada Taq polismerasa, ha permitido que la PCR (Protein Chain Reaction) pueda llevarse a cabo ms eficientemente, utilizando actualmente lo que se conoce como termocicladores, en donde sta tcnica para la amplificacin de secuencias especficas de DNA puede llevarse a cabo en ciclos repetitivos con una sola muestra de enzima. Tambin

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en procesos industriales se reduce la contaminacin, al hacer ms eficientes los procesos. 12.- Qu es el tiempo trmico mortal y el punto trmico mortal? Tiempo trmico mortal Punto trmico mortal Tiempo en el cual mueren todas las clulas a una temperatura dada Mnima temperatura para que todos los organismos de una poblacin mueran en 10 minutos de exposicin.

13.- Qu evalu en la prctica de tiempo trmico mortal y punto trmico mortal? Yo? Nada. Pero en esa prctica se evala el punto trmico mortal y el tiempo trmico mortal de diferentes microorganismos en diferentes soportes o medios de suspensin: agua, jugo de naranja, leche y sacarosa. 14.- Qu soporte protegi ms a las bacterias a temperatura elevada: leche, agua o jugo? La proteccin de las bacterias depende del medio. En este caso, por las altas concentraciones de protenas y cidos grasos, la leche result protegerlos ms, el jugo tiene un pH elevado, es el siguiente y por ltimo el agua. 15.- Qu es pasteurizacin? Cul es el fundamento? Descrbalo ampliamente. Es un proceso que reduce las poblaciones microbianas en los alimentos que son sensibles al calor, debe su nombre a su descubridor, Louis Pasteur. El procedimiento no es una forma de esterilizacin puesto que existen numerosos microorganismos capaces de resistir a estos tratamientos, denominados termodricos, por ello, la pasteurizacin slo es un tratamiento trmico cuyo objetivo es la destruccin de la mayor parte de las clulas vegetativas de los microorganismos patgenos que alteran los alimentos, conducindolos a procesos de fermentacin indeseables o al dao de las personas que los consumen. Actualmente se consigue haciendo pasar el alimento por un intercambiador de calor, con una velocidad de flujo y una temperatura determinadas (que no excede los 100 C), y luego se enfra rpidamente (4C) para producir un choque trmico que evita que el DNA y las protenas desnaturalizadas por el calor se renaturalicen. Las bacterias gram (-) son ms susceptibles a este cambio brusco, porque su pared celular de peptidoglicana es ms delgada, sin embargo es en este grupo donde se encuentran la mayor parte de patgenos entricos. 16.- Cmo se llaman los microorganismos que resisten la pasteurizacin? Mencione tres ejemplos. Termodricos. Streptococcus, Micrococcus y Lactobacillus, Lysteria Monocitogenes. 17.- Explique ampliamente cmo realiz la pasteurizacin en el laboratorio, en qu medios sembr y cmo interpret los resultados; cmo obtuvo el porcentaje de sobrevivencia y cmo evalu que el procedimiento fue eficiente. De un tubo de ensaye que contena leche a la que se le adicionaron las cepas Escherichia coli y Bacillus subtillis se hicieron dos series de diluciones decimales. La primera, se realiz con la leche sin someterse a un proceso de calentamiento a 63c, 30 minutos y rpido enfriamiento en un bao de hielo, la segunda se realiz con la leche que ya haba sido sometida a este proceso de pasteurizacin. Para determinar el % de sobreviviencia, se sembr 0.1 mL de muestra en cajas de gelosa simple de cada una de las diluciones y se extendi con varilla acodada, para despus incubarse a 37C. Se realiz la cuenta de colonias en las placas que tuvieran entre 25 y 250 colonias, tanto para la serie de placas sembradas con leche antes de la pasteurizacin como despus de la pasteurizacin y se determin el nmero de UFC/mL de muestra, reportndose como UFC/mL antes de pasteurizar y UFC/mL despus de pasteurizar. De aqu se dijo que las UFC/mL antes de pasteurizar son equivalentes al 100% de

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sobrevivencia, y por lo tanto, por una relacin se obtiene el % de sobrevivencia para UFC/mL despus de pasteurizar. La eficiencia se considera como la unidad menos el % de sobrevivencia. Tambin se realiz una prueba cualitativa, sembrando en placas de gelosa simple y medio EMB por estra cruzada a partir de las muestras de leche antes y despus de la pasteurizacin, en ambas placas pudo identificarse la presencia de ambos microorganismos para la siembra de la muestra antes de la pasteurizacin: E. coli era identificable en el medio EMB como colonias oscuras con brillo metlico, ya que E. coli es una bacteria gram (-) y Bacillus subtillis se observaba en medio EMB como una colonia opaca, blanca y de bordes irregulares y sabemos que es una gram (+), en el medio gelosa simple no era tan apreciable la diferencia salvo que E. coli presentaba aspecto hmedo a diferencia de B. subtillis y bordes definidos. Sin embargo en las placas sembradas despus de la pasteurizacin solo el gram (+) creci, E. coli haba sido eliminada, por lo cual sabemos que la pasteurizacin se llev a cabo de manera eficiente. 18.- Cmo evalu el efecto del pH sobre el crecimiento microbiano? Mencione la clasificacin de los organismos con base en su pH ptimo. Qu mecanismos tienen los organismos para poder resistir los bajos y altos de pH? El efecto del pH se evalu sembrando cada cepa en tubos de ensaye con caldo nutritivo y extracto de levadura al 0.25% con el pH ajustado a 3, 5, 7, 9 y 11; posteriormente se realiz la lectura de crecimiento despus de incubar a 37 C. El crecimiento se evalu por el mtodo de las cruces, al realizar las grficas correspondientes (Crecimiento-pH) se obtuvieron las curvas de crecimiento para cada microorganismo, con las cuales fue posible clasificarlos con base en su pH ptimo de crecimiento: Clasificacin Acidfilos* Neutrfilos Alcalfilos* *** pH ptimo Aquellos que crecen en pH 0-5.5 Aquellos que crecen en pH 5.5-7 Aquellos que crecen en pH 8.5-11.5 Obligados: cuando son incapaces de crecer o mueren en pHs cercanos a la neutralidad

Los organismos pueden resistir a los altos y bajos de pH gracias a que sus enzimas se han adaptado a los pH extremos. El pH intracelular debe ser neutro, para ello algunas bacterias como Helicobater pylori tienen enzimas ureasas que degradan la urea hasta amoniaco, que es un compuesto que alcaliniza el medio, as puede neutralizar el medio cido del estmago. 19.- Defina microbicida y Microbiosttico. Microbicida Microbiosttico Agente qumico capaz de eliminar a un microorganismo Agente qumico que inhibe a un microorganismo pero que si deja de estar presente,el microorganismo puede crecer.

20.- Qu es un colorante? Cules son sus usos en microbiologa? Qu colorantes us en la prctica de colorantes y a qu familia pertenecen? Qu colorantes son ms efectivos contra los organismos? Los colorantes son compuestos orgnicos que tienen varios usos en la microbiologa: Tincin, agentes selectivos (MaC, cristal violeta), indicadores de pH [rojo neutro, vire: 6.4 (rosa) a 8.0 (amarillo)] y xido-reduccin. Trifenilmetano: Moderadamente bactericidas, no tienen efecto sobre las esporas, mejor

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accin contra Gram positivas. Posiblemente actan interfiriendo la oxidacin celular o en la biosintesis de la pared celular. Dentro de esta Cristal violeta y verde de malaquita. Acridina: Semejante a los compuesto con anilina, efecto mayor en Gram positivo pero no tiene efecto contra Psudomonas aeruginosa, Mycobacterium y las esporas bacterianas. Algunos compuesto actan sobre el DNA alterando su estructura y modificando sus propiedades biolgicas al ser molculas planas. Dentro de sta Bromuro de etidio y acriflavina. Colorantes se adhieren a la pared celular y impiden su ntesis, o intervienen en las reacciones redox de la clula fungiendo como ltimo aceptor de electrones de la cadena respiratoria.

21.- Mencione la clasificacin de los detergentes segn su carga y de un ejemplo de cada uno. Mencione su mecanismo de accin. Cules fueron sus observaciones experimentales? Clasificacin Mecanismo de accin Disuelven molculas hidrofbicas, disminuyen la tensin superficial y desestabilizan la membrana. En solucin se ionizan, pero considerando el comportamiento de sus grupos en solucin, el grupo hidrfobo queda cargado negativamente. Estn constituidos por una cadena alqulica lineal o ramificada que va de 10 a 14 tomos de carbono, y en su extremo polar de la molcula se encuentra un anin. En solucin forman iones, resultando cargado positivamente el grupo hidrfobo de la molcula. Son compuestos cuaternarios de amonio o una amina grasa en medio cido. Al ionizarse, se solubilizan mediante un efecto combinado de un cierto nmero de grupos solubilizantes dbiles (hidrfilos) tales como enlace tipo ter grupos hidroxilos en su molcula. Ejemplo

Catinicos

Cetil trimetil amonio. Cloruro de benzalconio.

Aninicos

SDS

No-inicos

Brij36T

22.- Cul es el mecanismo de accin de los metales? De tres ejemplos de metales y sus usos en microbiologa. Por su alta electropositividad, los metales pesados pueden reaccionar con grupos cargados negativamente de las protena (carboxilo libres o sulfhidrilo) causando la inactivacin, mediante una coagulacin o precipitacin, y pueden causar el efecto microbicida o Microbiosttico. Ejemplos: Ag, Cu, Hg, en forma de sales y disueltos en agua. 23.- Mencione cinco gneros microbianos productores de antibiticos.
Antibitico Penicilina Cefalosporina Bacitracina Polimixina B Organismo productor Penicillium chrysogenum(H) Cephalosporium acremonium (H) Bacillus subtilis(B) Bacillus polymyxa (B) Organismos blanco BacteriasGram + Bacterias Gram + y BacteriasGram + BacteriasGram + Sitio o modo de accin Sntesis de la pared Sntesis de la pared Sntesis de la pared Membrana celular

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Anfotericina B Eritromicina Neomicina Streptomycin Tetraciclina Vancomicina Gentamicina Rifampicina Griseofulvina Streptomyces nodosus (B) Streptomyces erythreus (B) Streptomyces fradiae (B) Streptomyces griseus (B) Streptomyces rimosus (B) Streptomyces orientalis (B) Micromonospora purpurea (B) Streptomyces mediterranei(B) Penicillium griseofulvum(H)

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Hongos BacteriasGram + Bacterias Gram + y BacteriasGram Bacterias Gram + y BacteriasGram + Bacterias Gram + y M. tuberculosis Hongos dermatfitos

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Membrana celular Sntesis proteica Sntesis proteica Sntesis proteica Sntesis proteica Sntesis proteica Sntesis proteica Sntesis proteica Microtbulos

24.- Qu es un antibitico? Sustancia qumica (metabolito secundario) producida por ciertos organismos que a bajas concentraciones tiene la capacidad de inhibir el crecimiento o producir la muerte de microorganismos. Cabe mencionar que aquellos compuestos que se sintetizan en un laboratorio no pueden ser llamados antibiticos, por la definicin, stos se llaman quimioteraputicos. 25.- Qu antibitico us en la prctica de laboratorio? Cul es su mecanismo de accin? Discuta si sus resultados experimentales fueron congruentes con lo esperado. Ampicilina. Acta sobre la sntesis de la pared celular. Es un -lactmico al igual que la penicilina, y acta en ltima fase de la sntesis de la peptidoglicana de la pared celular, unindose a una enzima transpeptidasa llamada protena fijadora de penicilina, responsable de producir una serie de enlaces cruzados entre las cadenas de pptidos (aminocido D-alanina). La formacin de estos enlaces o puentes es la que confiere, precisamente, la mayor rigidez a la pared bacteriana. Por lo tanto, las bacterias sin su pared celular estallan o son ms fcilmente fagocitadas por los granulocitos. Los resultados coinciden con lo esperado, pues resultaron ser mayormente inhibidos los microorganismos geam (+) aunque la presencia de la cpsula de Klebsiella Pneumoniae es un factor que le confiere a sta cierta resistencia, a pesar de ser un gram (-). 26.- Qu mtodo us para la determinacin de la sensibilidad prctica? Discuta las ventajas y desventajas de ellos. de antibiticos en su

Mtodo de Kirby-Bauer (multidiscos), el mtodo de dilucion en tubos y el mtodo de dilucin en agar o vaciado en placa. Mtodo Kirby-Bauer (multidiscos) Vaciado en placa Ventajas Se pueden evaluar distintos antibiticos a la vez, y a distintas concentraciones Se puede determinar la CMI. Pueden evaluarse varios microorganismos distintos en una sola placa. Puede determinarse la CMI y la actividad bactericida o bacteriosttica del antibitico. El antibitico se encuentra de manera ms homognea. Desventajas Traslape de los halos Solo se puede trabajar con un microorganismo a la vez Slo se puede evaluar un antibitico a la vez. Es un mtodo laborioso y requiere tiempo. El antibitico no se encuentra lo suficientemente homogneo. Slo se puede evaluar una bacteria por vez. Utiliza mucho material.

Dilucin en tubo

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27.- Cmo se determina la Concentracin Mnima Inhibitoria? Qu significa? Cmo se reporta? Es la ms baja concentracin de antibitico capaz de inhibir la multiplicacin de una cantidad determinada de bacterias, puede determinarse haciendo diluciones en tubo del antibitico, y sembrando determinada cantidad de microorganismo en ellos. Incubar y verificar hasta qu dilucin se encuentra que ya no crece microorganismo, la concentracin de antibitico presente en esa dilucin es la CMI. Y se reporta en g/mL de antibitico. 28.- Cul es la importancia de evaluar la sensibilidad antimicrobiana? Como medio para encontrar un tratamiento para un individuo que presenta una patologa causada por una bacteria, para seleccionar el antibitico ms adecuado. En investigacin para hacer anlisis rutinarios de verificacin de generacin de resistencia en especies bacterianas. 29.- Problema: Usted aisl un actinomiceto en su prctica de laboratorio, los qumicos orgnicos extrajeron lo que parece ser un nuevo antibitico. Usted tiene qu evaluar su sensibilidad con bacterias, as que prepar la solucin de su antibitico a 1.5 g/mL e hizo diluciones seriadas de la siguiente manera: 1:4, 2(1:10), 3(1:13), 2(1:5). Una vez que hizo la dilucin en tubo, transfiri 2.5 mL a cajas de petri estriles y adicion 230 mL de agar fundido. En las cajas sembr Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae. E. coli creci hasta el tubo 5, S. aureus creci en todas las diluciones y K. pneumoniae creci hasta el tubo 2. Calcule la dilucin acumulada, la concentracin en g/mL de los tubos y las cajas. Indique cul fue la C.M.I. para cada bacteria. Con los resultados obtenidos cree que su nueva molcula es buen candidato para ser usado como un antibitico? Qu otras pruebas deber hacer para evaluar su antibitico?