“UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN”

Facultad de Ciencias
Escuela Profesional de Biología Microbiología

PROTOCOLO DE
AISLAMIENTO DE
BACTERIAS TERMOFILAS
ESTEFANY DALILA DELGADO LIENDO 2013-38177
ARMANDO ANDRADE ROMERO 2015-118009
 INTRODUCCION

 Las bacterias termófilas son aquellas que se desarrollan a

temperaturas superiores a 45ºC, pudiendo superar incluso
los 100ºC (hipertermófilos) siempre que exista agua en
estado líquido.
 Los termófilos se caracterizan a nivel de membrana
porque poseen una proporción alta de lípidos saturados
de cadena larga, lo que hace que tenga la fluidez
adecuada a altas temperaturas. En cuanto a las
proteínas, se ha visto que poseen gran estabilidad debido
a enlaces de tipo covalente e interacciones hidrofóbicas.
 CARACTERISTICAS

 Las procariontes termófilos fueron posiblemente las primeras células simples. Se cree que se
desarrollaron en sitios con actividad volcánica (como géiseres) en las dorsales oceánicas.
 Los termófilos se caracterizan por tener una membrana celular rica en lípidos saturados ya que
contienen enzimas que les permiten trabajar en condiciones extremas.
 Los termófilos sobreviven en temperaturas con un mínimo de 20 °C y un máximo de 75 °C,
mientras que las hipertermófilas soportan temperaturas superiores a 75 °C, llegando incluso a
superar a veces los 100 °C, siempre que exista agua en estado líquido, como ocurre en las
profundidades oceánicas, donde la presión es elevada.
 Algunas archaeas (Sulfolobus) obtienen la energía oxidando azufre, por lo que son
quimiosintéticas, pero en general, todas se pueden considerar organismos extremófilos y
resistentes.
 MATERIALES

 TOMA DE MUESTRA
 MEDIO DE CULTIVO
 Frascos estériles  Agar M9
 Agua
 Mascarilla
 Guantes

 MATERIALES
Los medios complementarios mínimos son un tipo de medios
 Agua peptonada mínimos que también contienen un agente único seleccionado,
por lo general un aminoácido o un azúcar. Este suplemento
 Pipetas permite el cultivo de líneas específicas.
Una fuente de carbono para el crecimiento bacteriano, que
 Tubos de ensayo
puede ser un azúcar como la glucosa.
 Asa bacteriologica Distintas sales, que pueden variar entre las especies de
bacterias y las condiciones de cultivo, que permite a las
bacterias sintetizar proteínas y ácidos nucleicos.
 PROTOCOLO

Se recolecto la muestra en un frasco estéril.

En 6 tubos de ensayo que contiene agua

peptonada 5ml, se agrega 2ml de la muestra
haciendo las diluciones 10-1 , 10-2 , 10-3 , 10-4 y 10-5
 A partir de las últimas diluciones, se realizaron
los aislamientos en medio sólido con agar M9,
inoculando 0,5ml de las diluciones y haciendo
la técnica de estriado.
Se incuba a 54°C por 48h.
UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN
FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA MICROBIOLOGÍA

ARMANDO ANDRADE ROMERO 2015-118009

ESTEFANY DALILA DELGADO LIENDO 2013-38177
 Caracteristicas:
 Las bacterias psicrófilas se desarrollan óptimamente en una
temperatura de 15 °C y no por encima de 24°C. Estas
bacterias dependen del medio en el que se les encuentre
para poder desarrollar sus actividades enzimáticas con
normalidad ya que se ha determinado que en su
temperatura adecuada producen enzimas como la
proteasa, amilasa, deshidrogenasas y lipasas que funcionan
óptimamente en frio y se desnaturalizan rápidamente a
temperaturas moderadas. Algunas bacterias psicrófilas
contienen ácidos grasos poco insaturados e hidrocarburos
de cadena larga y dobles enlaces múltiples. (Villalta, 2014)
 Bacterias psicrófilas:
Pseudomonas, Alteromonas, Alcaligenes, Flavobacterium, Serratia, Bacillus, Clostridium,
Lactobacillus, Leuconostoc, Carnobacterium, Brochrothrix, Listeria, Yersinia y Aeromonas
Materiales
 Frascos de vidrio totalmente esterilizados en el autoclave
a 121°C y 1.5 atm por 45 minutos
 Filtros especiales para bacterias
 Agua peptonada esteril
 Caldo de Soja Tripticasa (BBL)
 Agar LB
 Equipos de esterilización
 Refrigeradora
 Herramientas de laboratorio
Toma de Muestras:
 Muestras de Hielo: Se recolectan las muestras en puntos
previamente identificados a 5 cm de profundidad de la capa
de hielo.
 Muestras de Suelo, Barro y Agua: Se recolectan muestras de
campos, arroyos y lagos en frascos esteriles.

 Pretratamiento:
 Las muestras de hielo se filtran una vez son derretidas y se
vuelve a conservar en congeladoras portátiles hasta el
laboratorio.
 Las muestras de suelo y lodo se diluyeron 1:10 en Peptona
estéril al 0,1% y se calienta a 80ºC durante 10 minutos para
destrucción de células vegetativas.
 Aislamiento:

 Muestras de Hielo: Se inocula 1ml en placas

con Agar LB y se deja reposar por 72 horas a
una temperatura aproximada de 3ºC. Se
observa el crecimiento de colonias y se
replican en placas con BL para su Filo Fimicutes
purificación, caracterización o estúdio. Género Clavibacter

 Muestras de Suelo, Barro y Agua: Sin dilución

previa, una cantidad de 5ml se inoculo en
placas petri con 25 ml Caldo de Soja
Tripticasa (BBL), se dejar en el refrigerador por
2 semanas a 0ºC. Se aisla y replican las
colonias que crecieran en nuevas placas con
BBL para su estudio e identificación con Gram